关于白蛋白和甘露醇对IL┐2活性的影响

作者：包春杰　赵宁　王利兵　李波　张英起


【关键词】 白细胞介素-2
　　关键词: 白细胞介素-2;白蛋白;甘露醇;生物活性;制剂
　　
　　0 引言
　　白蛋白和甘露醇是生产IL-2冻干粉针剂时常用的赋形剂，其目的是保持制剂的生物活性和制剂性状，提高产品的稳定性，并且容易进行冷冻干燥和利于贮藏及运输.我们在实验中利用不同浓度的两种赋形剂生产IL-2冻干制剂，通过检测IL-2的活性，对制剂中白蛋白和甘露醇的保护作用进行比较，以评价该产品的冻干工艺.
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 材料 RPMI1640为美国Gibco公司生产.小牛血清为杭州四季青生物工程材料研究所生产.
　　
　　3 H-TdR购于中国科学院上海原子核研究所.IL-2标准品为中国药品生物制品检定所出品.液体闪烁计数仪（LS-6500，美国Beckman公司）.细胞收集器为江苏江阴生产.冷冻干燥机（JB-300型）为中国长江制冷公司生产.
　　
　　1.2 方法 先将IL-2按不同浓度的赋形剂进行配制，过滤除菌，每支1mL分装，半加塞预冻至-35℃，-20℃升华干燥，30℃保温6h，充氮气后在干燥箱内加塞，出箱后迅速轧铝盖［1］ .将冻干好的药品置于-20℃冰箱保存，按0，6，12和18mo取出检测IL-2的生物活性.取生长状态良好的CTLL细胞，用无血清的RPMI1640培养液洗3次;计数并调整细胞数至（1～2）×108 ・L-1 ，加入96孔培养板，每孔加0.1mL;将稀释好的待检样品加入96孔板，设复孔，n=2.将标准品加入96孔板，同时设阴性对照孔.50mL・L-1 ，37℃培养16～20h，然后将3 H-TdR掺入孔内，每孔加20μL，含18.5kBq，6h后用细胞收集器将细胞收至玻璃纤维滤纸上，烘干后计数.
　　
　　2 结果
　　白蛋白和甘露醇两种赋形剂对IL-2冻干制剂活性的影响与保存时间有关，6mo前两种赋形剂对活性影响无明显差异（P&>0.05），但6mo后差异比较大，且20～30g・L-1 白蛋白对IL-2活性保护优于甘露醇（P&<0.01，表1）.
　　
　　表1 白蛋白和甘露醇对IL-2活性的影响 （略）
　　
　　3 讨论
　　近年来由于白蛋白价格昂贵，加之血液制品传播疾病的影响，因此在生产生物制品冻干制剂时常选用其他赋形剂替代，而甘露醇就是常用的替代品之一.本实验结果证明，甘露醇虽然在长期贮存的生物制品中保持其活性的作用上不及白蛋白，但在半年期内与白蛋白的作用相同，适合作为短期贮存的生物冻干制剂的赋形剂.
　　参考文献:
　　
　　［1］王益寿.医用生物制品学［M］.杭州:浙江科学技术出版社，1992:37-49.