【关键词】 Rb基因
关键词: Rb基因;食管癌;易感性;多态性
0 引言
食管癌在我国常见，具高发区和家族聚集现象，陕西也为高发区之一，但其发生发展的分子机制还不很清楚.Rb基因是研究较深入的抗癌基因，李华川等［1］ 在食管癌及其癌旁组织中均发现有Rb基因异常，推测Rb基因异常与肿瘤的形成关系密切.基因多态是目前较为理想的遗传标记，目前国内尚未见到对Rb（intron17）多态在中国人中的分布及其与食管癌遗传易感性相关性分析，为此，我们应用PCR技术，检测并分析了陕西正常人群Rb（intron17）VNTR多态分布，并以此为标记探讨与食管癌遗传易感性相关性分析.
1 材料和方法
1.1 材料 陕西正常无血缘关系人群外周血标本52例，由西京医院血库提供;鳞状食管癌标本47例，癌旁组织31例，由唐都医院胸外科提供，经病理组织切片确诊.
1.2 方法 DNA抽提:取静脉血（3～5mL）或组织，采用蛋白酶K消化，酚/氯仿抽提法，制备基因组DNA.以PCR法扩增对象基因组DNA中Rb基因17内含子多态性.反应总体积为30μL，引物序列:A5’-TTGAACCTAA-CACGTTAACG-3’，B5’-GGTAACAAGAAGTAACCTT-3’（美联公司合成）.依次加入灭菌双蒸水，10×缓冲液3μL，引物各25pmol，dNTP200μmol・L-1 ，DNA模板约5ng.PCR扩增在PE DNA thermal Cycler上进行.扩增条件:97℃变性10min，94℃加入Taq酶2.5U（上海Promega公司），加30μL石蜡油.进入循环:94℃变性45s;48℃退火45s;72℃延伸1min，循环30次，最后1次循环72℃延伸10min.产物用XbaI内切酶在37℃消化，用10g・L-1 琼脂糖凝胶电泳（Sigma公司）电泳，35V电泳1h，EB染色，紫外灯下观察并照相.
2 结果
陕西汉族正常人群在52名（104条染色体）Rb基因17内含子位点中发现:2种等位基因片段:945bp（A）及630加315bp（B），基因型频率:A/A:0.29，A/B:0.52，B/B:0.20，基因频率:A:0.49，B:0.51（图1）.在鳞状食管癌47例（94条染色体）Rb基因17内含子位点中发现:该位点也存在相同等位基因片段:基因型频率:A/A:0.11，A/B:0.77，B/B:0.12，基因频率:A:0.57，B:0.43.与正常群体基因型频率分布比较差异有显著性（χ2 =7.05，df=2，P&<0.05，图2）.在癌旁组织31例（62条染色体）中:有与癌组织相同的等位基因片段:基因型频率:A/A:0.22，A/B:0.68，B/B:0.10，基因频率:A:0.55，B:0.45.与正常群体基因型频率分布比较差异无显著性，与食管癌群体基因型频率分布比较差异无显著性.在配对的30例癌旁组织和癌旁组织中检测发现:6例（20%）癌组织在该位点发生突变，其中5例是由945bp突变为630bp和315bp（表1，图1）. 转贴于 3 讨论
Rb基因位于染色体13q14，是隐性抑癌基因，两个Rb基因均发生突变，丧失功能时才导致肿瘤的产生.RB具有抑制细胞增殖的作用，其作用主要通过结合与抑制转录因子E2F，近来发现Rb具有抑制细胞RNA聚合酶Ⅰ和RNA聚合酶Ⅲ的调节转录作用，其作用受到细胞周期依赖的磷酸化控制［2］ .目前已在多种肿瘤中发现有Rb基因的突变，如:视网膜母细胞瘤、小细胞肺癌、骨肉瘤等 ［3］ .
图1 － 图2 略
我们对陕西地区52例正常汉族人群Rb基因17内含子位点多态分布分析，结果共检出2种等位基因片断，945bp（A）及630加315bp（B），基因型频率:A/A:0.29，A/B:0.52，B/B:0.20，基因频率:A:0.49，B:0.51.与食管癌群体基因型频率分布比较有显著差异（χ2 =7.05，P&<0.05），从图可以明显看出食管癌的基因型集中在杂合型，其频率（A/B）&>癌旁组织&>正常组织，因此该位点是一个较好的遗传标记位点，可能与食管癌的发生相关.在配对的30例癌旁组织和癌旁组织中检测发现:6例（20%）癌组织在该位点发生突变，其中5例是由945bp突变为630bp和315bp.是否突变造成基因的异常或不稳定，功能丧失.这6例均是处在Ⅰ-Ⅱ或Ⅱ期，为食管癌的早期，该位点异常可能与食管癌的发生关系密切.
表1 食管癌及癌旁组织Rb基因（intron17）型分布 略
参考文献
［1］李华川，陆士新，崔晓邢.人食管癌与NMBzA引起的人和猴食管上皮细胞中多种抑癌基因变化的相关性研究［J］.中华肿瘤杂志，1995;17（4）:249-252.
［2］Weinber RA.The retinoblastoma protein and cell cycle control ［J］.Cell，1995;81（3）:323-330.
［3］Weinber RA.Oncogenes，antioncogenes and the molecular bases of multistep carciogenesis ［J］.Cancer Res，1989;49（14）:3713-3721.转贴于