嘌呤核苷酸对慢性海洛因处理大鼠条件性位置偏爱与急性戒断的影响

　　　　　　作者：李昆 何海涛 李鸿梅 刘剑凯 洪敏

【摘要】 目的 研究嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠的条件性位置偏爱与急性戒断的影响。方法 将50只雄性Wistar大鼠随机分为对照组（腹腔注射生理盐水9 d）、海洛因组（腹腔注射海洛因9 d）、海洛因+单磷酸腺苷(AMP)+单磷酸鸟苷(GMP)组（腹腔注射海洛因及AMP及GMP 9 d）、海洛因+AMP组（腹腔注射海洛因及AMP 9 d）、海洛因+GMP组（腹腔注射海洛因及GMP 9 d）。于第0、5、9天测评各组大鼠条件性位置偏爱，即观察黑白箱内大鼠在位置偏爱实验箱白侧（伴药侧）的停留时间。通过纳洛酮催促，对大鼠急性戒断症状进行观察与评定。结果 盐水对照组注射5 d后在伴药侧停留时间明显缩短，注射9 d后进一步缩短，对伴药侧产生条件性位置厌恶；海洛因组大鼠给药9 d后在伴药侧停留时间显著延长，产生了对伴药侧的位置偏爱；海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组给药后在伴药侧停留时间无明显延长，说明补偿嘌呤核苷酸可抑制海洛因的位置偏爱效应。海洛因与嘌呤核苷酸同时作用的大鼠戒断后，上睑下垂、齿颤和咀嚼发生次数比海洛因单独作用组明显减少(P＜0.05)。结论 系统应用嘌呤核苷酸可抑制海洛因依赖大鼠精神依赖，还可减轻其部分急性戒断症状。

【关键词】 海洛因依赖；嘌呤核苷酸；条件性位置偏爱；戒断

　　【Abstract】 Objective To determine the effect of purine nucleotides on conditioned place preference and acute withdrawal in chronic heroin dependent rats. Methods 50 male Wistar rats were randomly pided into control， heroin， heroin+AMP+GMP， heroin+AMP and heroin+GMP groups. Conditioned place preference (CPP) trial was done at 0， 5， 9 d. Naloxone was used to observe and evaluate the precipitated syndrome. Results In the CPP trial， the rats of control group showed obvious conditioned place aversion (CPA) because their total time staying in the drugpairing side was decreased dramatically after 5 d treatment and dropped even more after 9 d treatment. In contrast， total time staying in the heroinpairing side was increased significantly after 9 d heroin administration which proved that the rats formed CPP to heroin. The total time staying in the drugpairing side of the heroin+AMP+GMP group， heroin+AMP group and heroin+GMP group were changed little which confirmed that purine nucleotides compensated with heroin inhibits rats′ CPP to heroin after 9 d heroin treatment. In acute withdrawal evaluation， the counts of ptosis， tooth chattering and chewing of heroin+AMP+GMP， heroin+AMP and heroin+GMP groups were significantly higher than those in heroin group(P<0.05) .Conclusions Purine nucleotides can inhibit development of psychological dependence to heroin and alleviate some of the withdrawal symptoms.
　　
　　【Key words】 Heroin; Purine nucleosides ; Conditioned place preference (CPP); Withdrawal symptoms

　　近年来研究提示，阿片和腺苷受体作用系统在中枢神经系统密切相关〔1〕，例如腺苷受体激动剂可明显减轻阿片类药物的戒断症状〔2〕，吗啡可浓度依赖性地诱导腺苷释放〔3〕；鸟苷和鸟苷酸可表现出神经细胞的保护作用〔4〕。还有研究表明，吗啡、海洛因等阿片类物质可引起嘌呤核苷酸分解过度〔5，6〕，而合成代谢降低〔7，8〕。但嘌呤核苷酸对海洛因依赖的影响及其作用机制还不十分清楚。本研究主要通过动物模型在行为学水平研究嘌呤核苷酸对慢性海洛因处理大鼠CPP及急性戒断症状的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 50只雄性Wistar大鼠，体重(200±20)g，由本校实验动物部提供(动物合格证号SCXK2006)。海洛因由吉林省公安厅提供，纯度为98％，用生理盐水配制后抽滤除菌。盐酸纳洛酮(金尔伦)，益侨制药有限公司（湖南），批号20080406。单磷酸腺苷(AMP)及单磷酸鸟苷(GMP)为Amersco产品。

　　1.2 动物分组及处理 50只大鼠随机分为5组：①对照组：每日2次腹腔注射生理盐水，注射体积及时间与海洛因组相同。②海洛因组：建立海洛因依赖大鼠模型，第1～9天每日2次腹腔注射海洛因，每日次剂量依次为0.50、0.75、1.25、2.00、3.00、4.25、5.75、5.75、5.75 mg/kg体重。③海洛因+AMP+GMP组：海洛因给药同第2组，并且每日2次腹腔注射嘌呤核苷酸（AMP与GMP等摩尔混合），每日次剂量均为7.5 mg/kg体重。④海洛因+AMP组：海洛因给药同第2组，并且每日2次腹腔注射AMP，每日次剂量均为7.5 mg/kg体重。⑤海洛因+GMP组：海洛因给药同第2组，并且每日2次腹腔注射GMP，每日次剂量均为7.5 mg/kg体重。第2～5组分别于第10天7∶00腹腔注射盐酸纳洛酮5 mg/kg体重，观察戒断症状40 min。

　　1.3 CPP训练及检测

　　1.3.1 CPP实验箱 自制60 cm×30 cm×30 cm木箱，箱内中间设一可上下抽动的活动挡板将实验箱分成两个体积相同的小室，一侧小室内部全部涂成黑色，并垫上深灰色毡垫；另一侧小室全部涂成白色，保持木制地板面。

　　1.3.2 预实验 在实验开始前1 d(d 0)，将CPP实验箱中间的活动挡板去除，使大鼠可在黑白两箱之间自由活动，观察15 min，记录大鼠在白箱中的累计停留时间。

　　1.3.3 CPP训练 在不观察CPP的实验日，每次给药后将各组大鼠置于CPP实验箱的白色小室中训练1 h。

　　1.3.4 CPP观察 分别于实验第5、9天晚上给药30 min后进行观察。将CPP实验箱中间的活动挡板去除，使大鼠可以在黑白两箱之间自由活动，观察15 min，记录大鼠在白箱中的累计停留时间。

　　1.4 戒断体征的观察及评定 各组于第10日晨给药后腹腔注射纳洛酮5 mg/kg体重，观察戒断症状40 min。直接记录40 min内直立次数、湿狗样抖动次数、腹泻或排便次数以及咀嚼、齿颤和上睑下垂次数。

　　1.5 统计学方法 采用SPSS10.0统计软件对实验数据进行分析，所有数据以x±s表示，采用t检验进行组间显著性分析。

　　2 结果

　　2.1 CPP的测定结果 对照组大鼠实验第5和9天在白箱累计停留时间比实验前（第0天）明显减少（P＜0.01），实验第9天白箱累计停留时间比第5天又有显著减少（P＜0.01）。海洛因组大鼠第9天在伴药侧停留时间比d 0显著延长（P＜0.05）。海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组在白箱累计停留时间与给药前比无明显变化。各组大鼠在白箱侧（伴药侧）累计停留时间见表1。

　　2.2 戒断症状的观察结果 对照组大鼠在纳洛酮催促戒断后仅出现直立，而海洛因组、海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组均出现了直立、湿狗样抖、腹泻（软便和/或不成形）、咀嚼、齿颤及上睑下垂。与海洛因组相比，海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组的上睑下垂、齿颤及咀嚼次数明显减少（P＜0.05）。见表2。

　　表1 各组大鼠在白箱中的累计停留时间（略）

　　与第0天比较：1）P＜0.05，2）P＜0.01；与第5天比较：3）P＜0.05

　　表2 嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠催促戒断反应的作用（略）

　　与对照组比较：1）P＜0.05；与海洛因组比较：2）P＜0.05

　　3 讨论
　　
　　CPP实验是由Katz等〔9〕提出的一种评价药物精神依赖性的方法，其原理是把奖赏刺激与某种特定环境(非奖赏中性刺激)反复联系之后，后者便可获得奖赏性质，即这一特定环境可以诱发与非条件性奖赏联系在一起的那种非条件性行为反应〔10〕。在药物诱导的CPP实验中，与药物伴随的特定环境刺激主要由视觉、嗅觉和触觉三个要素构成〔11〕，用于进行CPP活动的装置应至少包括其中两种刺激。本实验采用视觉和触觉两种刺激进行CPP实验的检测：CPP实验箱采用黑白两色作为不同的视觉刺激，并在黑箱中垫上毡垫而白箱保持木质板面形成不同的触觉刺激。在预实验中，大鼠均偏爱停留在黑箱侧，因此选择白箱作为伴药侧进行CPP的训练和测定。
　　
　　本实验结果显示，实验第5天对照组在白箱（伴药侧）累计停留时间均比实验前明显缩短；至实验第9天，对照组大鼠在白箱累计停留时间比第5天又明显缩短；说明随着盐水给药时间的延长，大鼠对伴药侧产生越来越严重的厌恶，可能是腹腔注射这一刺激产生的作用。海洛因组给药第5天后，大鼠在白箱累计停留时间均比实验前延长但是没有显著差异，给药9 d后比实验前明显延长（P＜0.05），并比第5天显著延长，表明海洛因能时间剂量依赖性地引起大鼠对伴药侧的位置偏爱。海洛因+AMP+GMP组、海洛因+AMP组、海洛因+GMP组在实验的第5和9天在白箱累计停留时间比给药前略有升高但无显著差异。以上结果表明嘌呤核苷酸能抑制给海洛因大鼠CPP的形成，补偿嘌呤核苷酸可能对抗海洛因精神依赖的形成。
　　
　　躯体依赖的主要中枢作用部位是蓝斑核及中脑导水管周围灰质等，以戒断症状的出现为特征。研究表明，腺苷受体拮抗剂能诱发吗啡依赖动物的戒断行为〔12〕。在与阿片成瘾行为相关的重要脑区，阿片受体和腺苷受体激动剂都可以抑制神经元的腺苷酸环化酶，增加钾电流，在NAc还可以抑制突触前γ氨基丁酸(GABA)和谷氨酸的释放，对Ca2+通道也有抑制作用，这些作用提示腺苷受体在阿片戒断时可能发挥作用。本实验中，对照组大鼠在纳洛酮催促戒断后仅出现直立，而海洛因组及各海洛因加核苷酸组均出现了直立、湿狗样抖、齿颤、咀嚼、上睑下垂、腹泻（软便和/或不成形）等。海洛因加核苷酸组上睑下垂、齿颤及咀嚼明显少于海洛因组，提示嘌呤核苷酸可减轻部分海洛因戒断症状。嘌呤核苷酸与海洛因的作用机制关系尚需进一步研究。

参考文献

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