几种免疫组化检测系统在免疫组化中的应用

　　　　作者：江晓红 徐黎明 许林杰

【摘要】 每种检测系统相对应的一抗稀释比都不相同，对使用即用型抗体的用户特别要注意，不能随意更换检测系统。而使用浓缩型抗体的用户，应该根据自己的经济条件，根据组织的来源、抗体表达的部位、抗体的强弱，选择一些敏感度较强的检测系统，同时必须根据检测系统的不同，选择不同的抗体的稀释比和处理方法，才能做出更完善的免疫组化结果。

【关键词】 免疫组化；病理诊断；检测系统

　　 目前，免疫组化广泛地应用于病理诊断中，新的免疫组化检测系统也不断地被开发［1］。为了更好地使用好这些检测系统，我们把最常用的几种检测系统进行了比较。

　　1 材料

　　选择一抗分别来自DAKO公司的 CD30（Berh3）（1：30）；CD45RO（UCHL1）（1：100）；ER（1D5）（1：100）；CK（AE1/AE3）（1：100）；P53（DO7）（1：100）、中杉公司的CD30（Berh3）（1：30）；CD45RO（UCHL1）（1：100）；ER（1D5）（1：100）；CK（AE1/AE3）（1：100）；P53（DO7）（1：100）及迈新公司CD30（Berh3）（1：30）；CD45RO（UCHL1）（1：100）；ER（1D5）（1：100）；CK（AE1/AE3）（1：100）；P53（DO7）（1：100）。选择DAKO公司的EnvisonTM检测系统，高温抗原修复，染色步骤与时间完全按照产品说明书操作。

　　选择检测系统：DAKO公司的EnvisonTM检测系统，DAKO公司的Envison+R加强型检测系统，迈新公司的SP检测系统，迈新公司的EliVisionTMplus检测系统，中杉公司的PV6000检测系统，中杉公司的PV9000检测系统。一抗选择DAKO公司的CD30（Berh3）；CD45RO（UCHL1）；ER（1D5）；CK（AE1/AE3）；P53（DO7）。抗体稀释采用梯度稀释比的方法：CD30（1：15，1：30，1：60）、CD45RO（1：50，1：100，1：200）、CK（1：50，1：100，1：200）、ER（1：50，1：100，1：200）、P53（1：50，1：100，1：200）。

　　组织选择了乳腺癌（标记ER、P53）、肾癌（标记CK）、间变型淋巴瘤（标记CD30）和T细胞淋巴瘤（标记CD45RO）各5例，3μm连续切片。高温抗原修复，染色步骤与时间完全按照产品说明书操作。

　　镜下观察结果，每例切片取三个视野，每个视野数100个细胞，取平均值。阳性细胞数分别用4+（80%～100%）、3+（50%～79%）、2+（30%～49%）、+（5%～29%）、±（＜5%）表示。阳性强度分别用4+、3+、2+、+、±表示。背景分别用3+、2+、+、-表示。

　　2 结果

　　2.1 不同公司的一抗与同一检测系统的检测结果

　　见表1。表1 不同公司的一抗与同一检测系统的检测结果（略）

　　2.2 不同公司检测系统和一抗的检测结果

　　一抗CD45RO（1：50，1：100，1：200）：S-P，EnvisonTM，Envison+R三个检测系统均表达一致，三个浓度阳性细胞依次（3+，3+，2+）阳性强度（3+，3+，2+），S-P检测系统背景（2+，+，-），EnvisonTM，和Envison+R检测系统背景（+，-，-），EliVisionTMplus和PV9000检测系统阳性细胞（3+，3+，3+），阳性强度（3+，4+，3+），背景（2+，+，-），PV6000检测系统阳性细胞（3+，2+，2+），阳性强度（2+，2+，+），背景（-，-，-）。

　　一抗CK（1：50，1：100，1：200）：S-P，EnvisonTM，Envison+R三个检测系统表达一致，三个浓度阳性细胞依次（3+，3+，2+）阳性强度（3+，3+，2+），S-P检测系统背景（2+，+，-），EnvisonTM，和Envison+R检测系统背景（+，-，-），EliVisionTMplus和PV9000检测系统阳性细胞（3+，3+，3+），阳性强度（4+，4+，3+），背景（2+，+，-），PV6000检测系统阳性细胞（3+，3+，2+），阳性强度（3+，2+，+），背景（+，-，-）。

　　一抗ER（1：50，1：100，1：200）：S-P，EnvisonTM，Envison+R三个检测系统表达一致，三个浓度阳性细胞依次（3+，3+，2+）阳性强度（3+，2+，+），S-P检测系统背景（2+，+，-），EnvisonTM检测系统背景（-，-，-）Envison+R检测系统背景（+，-，-），EliVisionTMplus和PV9000检测系统阳性细胞（3+，3+，2+），阳性强度（3+，3+，2+），背景（+，-，-），PV6000检测系统阳性细胞（3+，2+，2+），阳性强度（3+，2+，+），背景（-，-，-）。

　　一抗P53（1：50，1：100，1：200）：S-P检测系统阳性细胞（3+，3+，2+）阳性强度（3+，3+，2+），S-P检测系统背景（2+，+，-），EnvisonTM，检测系统阳性细胞（2+，3+，2+），阳性强度（3+，2+，+），背景（+，-，-）Envison+R检测系统阳性细胞（3+，3+，2+）阳性强度（3+，2+，+），背景（+，-，-），EliVisionTMplus和PV9000检测系统阳性细胞（3+，3+，3+），阳性强度（3+，3+，3+），背景（2+，+，-），PV6000检测系统阳性细胞（3+，2+，2+），阳性强度（2+，2+，+），背景（+，-，-）。

　　3 讨论

　　检测抗体与检测系统从科学的角度，应该使用同一公司的产品。本次实验为了能够说明检测系统的敏感性，避免由于各公司间一抗的的敏感度不同引起的结果差异，我们特意选择了几只各公司间克隆号一样的一抗，并通过实验一，用同一检测系统和不同厂家的抗体进行对照，结果证明了这些一抗的敏感性无差异。

　　我们发现不同的检测系统会产生不同的表达结果，六种检测系统在CD30，P53，CD45RO的抗原表达中，除了阳性强度有差异外，阳性细胞数的差异并不十分明显。但在CD30抗原表达中，差异较为明显，以PV9000、EliVisionTMplus检测系统阳性细胞数最多，阳性强度最强，见图1。由此可见，尽管检测系统的敏感性对大多数抗原来说结果差异不大，但对于那些抗原表达较弱的肿瘤来说是相当更要的。我们在实验中发现，在找到最佳抗体稀释比后，抗体浓度降低，阳性细胞数会相应减少；但抗体浓度升高，阳性细胞数增加并不明显，只是增强了表达强度和背景。但不同的检测系统，对那些表达较弱的抗原，阳性细胞数差异却十分明显。因此，敏感性较强的检测系统能够把较弱的抗原较好的表达出来。

由于各家公司制作工艺不一样，敏感性不尽相同，对核、膜或浆表达也各有优势。而PV9000和EliVisionTMplus检测系统，采用了一种增强剂，增加了检测系统的穿透性和亲和性，可以更好的将抗原抗体结合的微弱信号进行有效的放大，使很多以前表达较弱或不表达的抗原也能很好的表达出来；同时，对表达较强的抗原，由于方法的敏感性增强，容易产生背景或非特异性着色，我们在实验中发现，必须降低抗体的浓度，找出合适的抗体稀释度才能做出满意的结果。

　　由上可见，每种检测系统相对应的一抗稀释比都不相同，对使用即用型抗体的用户特别要注意，不能随意更换检测系统。而使用浓缩型抗体的用户，应该根据自己的经济条件，根据组织的来源、抗体表达的部位、抗体的强弱，选择一些敏感度较强的检测系统，同时必须根据检测系统的不同，选择不同的抗体的稀释比和处理方法，才能做出更完善的免疫组化结果。

参考文献