作者：冯彬彬 张建海 祝慧凤 徐晓玉
【摘要】 建立丹七片的质量标准的方法。［方法］采用薄层层析法对方中丹参和三七进行了定性鉴别，采用反相高效液相法测定了制剂中所含丹酚酸B的含量。［结果］鉴别方法专属性强、重复性好，含量测定丹酚酸B在线性范围内线性关系良好，回收率为101.7%，RSD为1.77%。［结论］本质量标准可有效地控制丹七片的质量。
【关键词】 丹七片；质量标准；HPLC；TLC
Abstract: ［Objective］ To set up standard method of quality to Danqi Tablets. ［Method］ Take HPLC to make nature authentication， take reverse HPLC to test the content of salvianolc acid B in the preparation. ［Result］ The authentication is strong in attribute and has good repetition， the measurement has good linear relation， the recycle rate is 101.7%， RSD 1.77%. ［Conclusion］ The quality standard can effectively control the quality of Danqi Tablets.
Key words: Danqi Tablets; quality standard; HPLC; TLC
丹七片由丹参、三七两味中药材组成，收载于部颁药品标准中药成方制剂第一册中，具有活血化瘀，血瘀气滞，心胸痹痛，眩晕头痛，经期腹痛等症［1］。该标准未收载薄层鉴别项和含量测定项，不利于相关部门控制其药品质量，本实验拟通过对制剂中三七和丹参药材的鉴别及丹参中丹酚酸B的含量测定，完善其质量标准。
1 材料
1.1 仪器
日本岛津LC20AB高效液相色谱仪，SPD20紫外检测器；722型紫外可见分光光度计，上海菁华科技仪器有限公司；KQ5200E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；JA2003N电子天平，上海精密科学仪器有限公司；摩尔超纯水机，上海摩勒科学仪器有限公司。
1.2 试剂
甲醇、乙腈为色谱纯，实验用水为去离子水，其它试剂均为分析纯。丹七3批（批号20061101、20061102、20061103）、三七皂苷R1（批号：7459002，供含量测定用），丹酚酸B（批号：110857200203，供含量测定用），丹参对照药材，（批号：09239403），均购自中国药品生物制品检定所。
2 方法与结果
2.1 三七的薄层鉴别
（1）对照品的制备：取三七皂苷R1对照品10mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解，并定溶，制成浓度为1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。（2）供试品的制备：取本品10片，除去包衣，研细，取2g，加水1ml，搅匀，再加以水饱和的正丁醇20ml，密塞，超声处理10min，放置2h，离心，取上清液，加50ml正丁醇饱和的水，振摇，放置使分层，取正丁醇层，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。（3）薄层鉴别：吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水（15∶40∶23∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点［2］。见图1。
2.2 丹参的薄层鉴别
（1）对照药材的制备：取丹参对照药材0.5g，加水20ml，超声处理20min，加稀盐酸调节pH值至3～4，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，用无水硫酸钠脱水，挥干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为对照品溶液。（2）供试品的制备：取本品10片，除去包衣，研细，同2.2(1)法制成供试品溶液。（3）薄层鉴别：吸取供试品溶液和对照药材溶液分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸（2∶3∶4∶0.5∶2）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点［2］。见图2.
2.3 丹酚酸B含量测定［3］
（1）对照品溶液的制备：精密称取丹酚酸B对照品3.5mg于100ml容量瓶中，加75％甲醇溶解并定溶至刻度，制成每1ml含35ug的溶液，即得。（2）供试品溶液的制备：取本品10片，除去包衣，研细，精密称定0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。（3）高效液相色谱法（HPLC），色谱条件（色谱柱：Shimpack VPODS 150mm×4.6mm，流动相为：甲醇乙腈0.1％磷酸（7：20∶73）；流速：0.9ml/min；温度：室温；检测波长：286nm；进样量；20μl。所有标准品和样品在进样前都经0.22μm微孔滤膜过滤）。（4）方法学考察。①线性关系考察：精密称取丹酚酸B对照品17.0mg，置100ml量瓶中，加75％甲醇溶解并稀释至刻度。再精密吸取上述溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml分别置于10ml量瓶中，加75％甲醇稀释并定容至刻度。分别精密吸取上述溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积的积分值为纵坐标，丹酚酸B浓度（μg/ml）为横坐标，进行线性回归，得回归方程：y=14453x20713，r=0.9996，丹酚酸B在8.5～68.0μg/ml的范围内线性关系良好。②精密度实验：选择同一批号的丹七片（批号：061101），按照正文所述方法平行制备6份供试品溶液，测定峰面积并计算含量，求得丹酚酸B峰面积的RSD为2.45％，表明精密度良好。见表1。表1 重复性实验的考察结果（略）。③稳定性实验：精密称取样品适量，按供试品溶液的制备方法，制备供试品溶液，室温下保存，制备完成后放置0、2、4、8、16h，分别精密吸取20μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，考察其稳定性，供试品溶液及对照品溶液在配制后16h内测定，对照品溶液峰面积RSD=0.61%（n=5），供试品溶液峰面积RSD为0.64%（n=5）。结果表明，供试品溶液及对照品溶液在配制后16h基本稳定。④重复性实验：称取同一批号（批号：061101）的样品1g，共5份，精密称定，按“2.3（2）”项下操作，采用“2.2（3）”项下方法进行测定，结果含量平均值为12.23mg/g，RSD为2.45%，表明该分析方法精密度良好。⑤回收率实验：精密称取已知含量的同一批样品（批号：061101，丹酚酸B含量平均值为14.23mg/g）6份，分别精密加入同量的丹酚酸B对照品，按“2.3(2)”项下操作，采用“2.2(3)”项下方法进行测定，计算含量，结果表明：平均回收率为101.7%，RSD为1.77%。结果见表2。表2 丹酚酸B回收率测定结果。（略）⑥样品测定与结果：精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录峰面积，以外标法计算含量，结果见表3。表3 样品测定结果（略）。
3 讨论
3.1 在薄层鉴别中，三七供试品溶液的制备参考《中国药典》2005年版一部三七药材的薄层鉴别，色谱条件的选择参考《中国药典》2005年版一部三七药材的薄层鉴别中的展开剂，并将比例调整为：三氯甲烷乙酸乙酯甲醇水（15∶40∶23∶10），所得斑点集中，分离度好，Rf值适中。丹参供试品溶液的制备曾参照《中国药典》2005年版一部丹参药材的薄层鉴别，所得色谱背景干扰严重，斑点难以检识；改用水提，再用乙醚萃取后，则斑点清晰。显色剂曾分别采用碘蒸气熏蒸和三氯化铁溶液，结果用碘蒸气熏斑点清晰度较高，干扰小。
3.2 《中国药典》2005年版一部规定丹酚酸B为丹参中含量测定的指标成分。因此，本制剂选择丹酚酸B作为含量测定指标，可以反映和控制本品内在质量。丹酚酸B具有紫外吸收峰，对丹酚酸B在200～400nm进行紫外扫描，其在波长为286nm时具有最大吸收，故选择286nm作为丹酚酸B的紫外检测波长。流动相选择时，参考《中国药典》2005年版一部丹参品种含量测定项下的流动相甲醇乙腈甲酸水（30∶10∶1∶59），未达到基线分离，后根据液相色谱的实际分离情况调成甲醇乙腈0.1％磷酸（7∶20∶73），分离效果良好，分离度可以达到2.0以上；且柱效较高。表明该方法灵敏、准确，为制剂的安全性评价提供了依据。
3.3 与原标准比较，本实验增加了丹酚酸B含量测定，并建立了丹参和三七的薄层鉴别方法，所建方法专属性、重复性好，进一步完善了本制剂的质量标准，为本制剂的质量监控提供了实验依据。
参考文献
1］中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制剂（第一册）［S］.北京人民卫生出版社，1993.
［2］中华人民共和国药典委员会.中国药典·一部［S］.北京：化学工业出版社，2005.
［3］吴果.HPLC法测定心脉通胶囊中丹酚酸B含量［J］.中国临床药学杂志，2005，14（3）：184186.