中药复方“疾病缩减效应”假设及其验证实验

　　　　作者：吴水生 郭改革 李长伟 吴符火 陈朝元

【摘要】 提出了疾病缩减效应假说，认为这一假说可解释中医用药规律及中药配伍提高疗效的机制。并以胃溃疡病作为病理模型，理中汤为对象，进行拆方实验，以验证疾病缩减效应是否存在，揭示疾病缩减效应假说的科学性及其研究的可行性。

【关键词】 疾病缩减效应；胃溃疡；理中汤；假说

　　 Abstract: It puts forwards the hypothesis of disease curtailment efficacy， viewing that it may explain the TCM medication rule and the mechanism of TCM compatibility improving cure effect; taking gastric ulcer as pathological model， Lizhong Decoction as object， it makes split formula experiment to test its existence of disease curtailment effect， exposing the scientific and available hypothesis.Key words: disease curtailment efficacy; gastric ulcer; Lizhong Decoction；hypothesis

　　1 疾病缩减效应假说的提出

　　为了解释中药复方物质基础及其与药效相关性，我们提出了疾病缩减效应假说：中药复方天然组合化学库中的多种有效成分，在一定的有效药物浓度范围内，以低于其某一单体成分治疗剂量进入人体后，有选择地反复作用于与某种疾病有关的多个直接靶点或间接靶点，此后，以协同、整合等形式，通过"疾病缩减效应"，达到治疗疾病、减轻病痛的药理作用。

　　疾病缩减效应：假如某疾病A有x1，x2，x3……xn个病理环节，现有d1，d2，d3……dn种单一化合物药物，这dn种化合物各自均对疾病A有治疗效果，但它们分别针对的是上述xn个病理环节。根据药效学量效关系原理，在一定的有效药物浓度内，选用某药物di，使得其药效为最大效应的10%（此时药物di的用药量记为dix10），疾病减轻或好转了10%，因而用药后疾病A还剩90% (110%)1；如果di与dj两药同用，且用量为dix10，djx10，此时用药后疾病A剩81%［(1～10%)2］；同理，如果xn个药物同时应用，且其用药量均为dnx10时，用药后疾病A的结果将为(1～10%)n。所以，随着n的不断增大，A的结果将越来越接近0，也即疾病将越来越倾向于消失而痊愈。

　　根据《素问》“大毒治病，十去其六；常毒治病，十去其七；小毒治病，十去其八；无毒治病，十去其九”，要使疾病A“十去其九”，经计算后药物（其用量为dnx10）数量n为2122(21∶10.94%；22∶9.85%);若di的用药量为dix20，则使疾病A“十去其九”时所需的药物数量n为10～11(10∶10.74%；11∶8.59%)。在一剂药中含有10～22个具有活性的化学成分，这对中药复方而言是完全可能的。如泽泻中具有降血脂，防治脂肪肝的有效成分就有泽泻醇A、B、C，泽泻醇单乙酸乙酯A、B、C，胆碱、精氨酸等等，若与山楂、石决明、茵陈等配伍用以高血脂的治疗，如此组成的中药复方中具有降血脂活性的化学成分定将不少于22个。

　　这一假说可解释中医用药规律：药简力宏(提高dix值)或药味多(增加药物数量n)而用量减(减少毒副作用)。

　　如四妙勇安汤中金银花90g，玄参90g，当归60g，甘草30g，药仅四味，但用量却甚大，能如此应用在于：一是此四药药性平和，毒性不大，短期内用此大量，不致中毒；二是提高有效成分含量，有利于疗效发挥。即加大dix值，减少药味n，也能达到使疾病“十去其九”的目的。而对于那些有一定毒性、作用峻猛、反应剧烈的药物就得减少用量，减短疗程，“十去其六”，以缓图治，如十枣汤的用量甚小，且中病则止；或增加药味（n），针对多个相关靶点，起协同、整合、加强的作用，达到减轻疾病的目的［(1～10%)n］。

　　这一假说正好解答了中药讲究配伍以提高疗效的机制。一般地就单味药而言，其有效成分结构往往相似，从构效关系上看，其作用靶点（病理环节）可能大致相同，在治疗上存在疗效叠加效应（dix1＋dix2＋……+dixn）甚或竞争拮抗效应。而不同药味，其有效成分结构差异较大，作用靶点(病理环节)往往不同，因而增加药味（n），可针对多个相关靶点，起协同、整合作用，提高疗效，达到减轻和治愈疾病的目的［(110%)n］。

　　2 疾病缩减效应假说的实验验证

　　针对所提出的疾病缩减效应假说，我们选择了现代医学认识清楚的胃溃疡病作为病理模型，以临床上常用于治疗消化性溃疡并取得较好疗效的理中汤为对象，进行拆方实验，以验证疾病缩减效应是否存在，初步揭示疾病缩减效应假说的科学性及其研究的可行性。

　　2.1 实验材料

　　（1）动物：4月龄SD大鼠，体重200g左右，雌雄兼用。（2）仪器设备：Haier低温冰柜、离心机、O2气体罐、大鼠固定架、游标尺、解剖显微镜、缝合针线及手术器具等。

　　2.2 方法

　　（1）分组：①理中汤组；②炙甘草组；③干姜组；④白术组；⑤人参组；⑥模型组。（2）药物用量：①理中汤组：人参、干姜、白术、炙甘草各2.25g，整方用量为9g；②人参9g；③干姜9g；④白术9g；⑤炙甘草9g。（3）实验用中药的制备：分别称取上述用量的实验用药物，用挥发油提取器将干姜、白术两味药提取挥发油后，再与人参、炙甘草合并用，以8倍量蒸馏水煎煮2次，过滤，浓缩，醇沉，过滤，回收乙醇，合并挥发油，制成一定浓度的实验用制剂，置冰箱中备用。单味中药的制备：人参、干姜、白术、炙甘草分别(干姜、白术两味药分别提取挥发油后，其残渣)用8倍量蒸馏水煎煮两次，过滤，浓缩，醇沉，过滤，回收乙醇，(干姜、白术两味分别合并挥发油)，制成一定浓度的实验用制剂，置冰箱中备用。（4）给药：动物造模前2天，按各组动物公斤体重换算用药量，灌服各规定药物，每日早晚各1次，连续2天，实验当天早上灌服1次。空白组给等量的注射用水。

　　2.2.1 大鼠束缚寒冷应激性胃溃疡模型

　　健康SD大鼠，雌雄各半，禁食不禁水24h，在乙醚麻醉下，四肢固定于自制的有机玻璃大鼠固定架上，置于调节至4℃左右的内通以O2的大冰柜内，保持2h后结束造模。

　　2.2.2 检测指标及方法

　　本项目的检测指标应涉及胃壁细胞上的胃泌素受体、h3受体、毒蕈碱受体和H+K+ATP酶等抗消化性溃疡药物的直接作用靶点，如此最能说明问题。但是本项目中未予采用，是考虑到所采用的西药作用靶点已十分明确，而本研究的主要着眼点是：在低于各药单一剂量情况下，各药联合运用时是否起到了整合、协同、放大效应，因而从胃酸分泌、胃蛋白酶活性、胃泌素测定等整体实验上仍可以判断此效应是否存在，结果也能说明问题。

　　（1） 溃疡指数计算。造模结束后，以乙醚麻醉，打开腹腔，结扎贲门和幽门，注入1%甲醛溶液，并浸入同浓度甲醛溶液中，20 min后沿胃大弯剖开，用水轻轻冲洗去胃内容物后展开，置解剖显微镜下观察胃粘膜损伤并计算胃溃疡指数。黏膜损伤指数计分参考Guth 方法，以糜烂点直径的大小分5个等级，决定各等级的溃疡点数，通过累积定出黏膜损伤指数，即：斑点样糜烂-1；糜烂点≤1 mm-2；糜烂点直径大于l～2 mm3；2～4 mm -4 ；> 4 mm -5。总计后作为溃疡指数，在各组间进行统计分析比较。

　　（2）胃液酸度、游离酸、总酸度测定。在大鼠幽门结扎型胃溃疡模型造模方法项下，收集胃液后，准确计量胃液体积。将大鼠胃液置5000 rpm速度下离心10min，取上清液0.5ml，平行测定两份。以酚酞的乙醇溶液( 1％ )和二甲氨基偶氮苯的乙醇溶液( 5％)做指示剂，用0.01 mol/L氢氧化钠滴定胃液颜色变为橙黄色做为游离胃酸的终点，继续滴定胃液变成红色做为总酸的终点。记录2次滴定所耗用的氢氧化钠的体积，计算游离酸的酸度及总酸度。胃液量以ml／100 g 体重(ml／100 g)表示，总酸度以H (mmol／100 g／12h)表示，胃酸度以H (mmol／L)表示。

　　（3）胃泌素的测定。在“大鼠束缚寒冷应激性胃溃疡模型造模方法”和“大鼠幽门结扎型胃溃疡模型造模方法”项下，大鼠摘眼球取血2ml，放入事先加抑肽酶和EDTA Na2的离心管，迅速离心取血清放入空白离心管，低温保存以供测定胃泌素等项目。具体测定按试剂盒方法。

　　2.2.3 统计学处理

　　数据用SPSS14.0软件统计分析，用t检验方法。

　　2.3 结果

　　（1）疾病残留度见表1。表1 对大鼠胃溃疡模型溃疡指数及疾病残留度的影响（略）各组与模型组比较，*P<0.05。以模型组的平均值A为100%疾病指数（原始状态），而各单味药组平均值Bdn为经过治疗后疾病残留指数（治疗后状态），那么各单味药组疾病残留度(Residual) Rdn＝（1-（A-Bdn）/A）。复方组理论疾病残留度Rdm＝（1-（A-Bdi）/A）×（1-（A-Bdi）/A）×…×（1-（A-Bdn）/A）×n。之所以要乘以n，是因为本复方各组成药物的用量均为各单味药用量的1/n，因而如果在线性量效关系范围内，其整体效应就相当于单味药用量的1/n，所以复方组的最终效应当乘以n倍。本实验中理中汤组理论疾病残留度＝（1-（A-Bd1）/A）×（1-（A-Bd2）/A）×（1-（A-Bd3）/A）×（1-（A-Bd4）/A）×n＝0.588×0.817×0.464×0.418×4＝0.372。

　　（2）理中汤对大鼠胃溃疡模型胃酸等指标的影响见表2。表2 理中汤对大鼠胃溃疡模型胃酸等指标的影响（略）。 各组与模型组比较，*P<0.05。理中汤组及各组成药物组均能使胃酸值降低，以游离酸以干姜组降低最为明显，而总酸度则以甘草组为最；胃泌素各组之间均未显示出差异，说明理中汤不是作用于胃泌素的分泌而起作用。

　　3 讨论

　　3.1 模型的选择

　　理中汤出自由《伤寒论》，具有温中袪寒，补益脾胃的功能，临床中广泛用于消化性溃疡的治疗并取得了良好的疗效。方中干姜温中散寒，扶阳抑阴，为君药；人参补虚益脾，培补后天之本，为臣药；白术健脾燥湿，健运中州，是为佐药；炙甘草补脾益气，调和诸药，用之为使。共成温补脾胃之剂，主要适用于脾胃虚寒证的治疗。这与束缚寒冷应激性胃溃疡的病理模型机制甚为相符，因而本实验选用此模型来进行实验。

　　3.2 实验药物用量的确定

　　理中汤原方用量人参、干姜、白术、炙甘草各9g，但考虑到本实验目的为验证方中各药味的协同作用，如果方中每味药物用量与单味药物用量相同，则难以反应与说明其整合与协同作用，故此每味药的用量为各单味药用量的1/4，即2.25g，整方用量为9g。而人参、干姜、白术、炙甘草各单味药组用量分别为9g。

　　3.3 实验结果表明

　　以溃疡指数为指标时，理中汤组、人参组和白术组与模型组对比均有显著性差异，也即理中汤、人参和白术能有效防治束缚寒冷应激性胃溃疡疾病，而炙甘草和干姜没有显示出明显的抗胃溃疡效应。这与理中汤以干姜为君药的理论不相一致。考虑其原因可能脾胃气虚是中焦虚寒的基础与进一步的发展，而人参与白术均为健脾益气之品，故显示出良好的防治作用。但其中以理中汤为最佳，其次为人参，再其次为白术，说明干姜与炙甘草能加强人参与白术的作用，证明了复方存在的整合与协同作用。以游离酸与总酸度为指标则各实验组与模型组对比均有显著性差异，显示出抑制胃酸分泌的功能，具体原理有待进一步的探讨。胃泌素各实验组与对照组比较无明显差异，说明此指标对此模型没有特异性。

　　3.4 疾病缩减效应的验证

　　本实验中理中汤组理论疾病残留度为0.372，实验结果实际疾病残留度为0.320，理论与实际值十分的接近，说明其疾病缩减效应的客观存在。也即说明中药复方通过多成分的协同、整合，通过多种作用靶点起到减轻病痛的目的。