【摘要】 目的：检测类胰岛素生长因子1（IGF-Ⅰ）基因微卫星多态性CA重复与食管鳞状细胞癌是否关联。方法：应用荧光标记片段分析法对78例食管鳞状细胞癌患者和470例正常对照进行基因分型，并用非条件性Logistic回归分析微卫星多态性与食管鳞状细胞癌的关联性。结果：IGF-Ⅰ基因微卫星多态性CA重复与食管鳞状细胞癌的发病没有关联。结论：IGF-Ⅰ基因微卫星多态性CA重复在食管鳞状细胞癌的发病过程中不起主要作用。
【关键词】 食管鳞状细胞癌；类胰岛素生长因子1；微卫星多态性
Abstract Objective: To investigate the relationship between a microsatellite polymorphism (CA repeats) in the insulin-like growth factor I gene and the risk of esophageal squamous cell carcinoma. Methods: IGF-Ⅰ microsatellite polymorphism was genotyped among 78 cases with esophageal squamous cell carcinoma and 470 normal controls by fluorescent labeled fragment analysis. And data were analyzed using unconditional logistic regression to evaluate the association of examined polymorphism with esophageal squamous cell carcinoma. Results: No association was found between IGF-Ⅰ microsatellite polymorphism and esophageal squamous cell carcinoma. Conclusion: IGF-Ⅰ microsatellite polymorphism (CA repeats) does not play a major role in the development of esophageal squamous cell carcinoma.
Key words Esophageal squamous cell carcinoma; Insulin-like growth factor I (IGF-Ⅰ); Microsatillite polymorphism
类胰岛素生长因子1（IGF-Ⅰ）是一种多功能肽，能够促进细胞的增殖、分化和抑制细胞的凋亡[1]。有研究显示IGF-Ⅰ在癌症的发生过程中起到了重要作用[1]，而其基因的启动子区域有一个高度多态性的微卫星标记，即CA重复与血循环中的IGF-Ⅰ水平相关联[2]。有一些研究已经检测了这一多态性与乳腺癌、前列腺癌和结肠直肠癌的关系，但结果不太一致[3-6]。到目前为止未见有这一多态性与食管癌关系的报道，因此在本研究中，我们检测了两者之间是否关联。
1 材料与方法
1.1 样本 我们收集了78例食管鳞状细胞癌患者为观察组，470例为正常对照组。观察组所有病例均经病理学确诊，年龄范围48～79岁，平均年龄64岁，其中男性57例，女性21例。正常对照组年龄范围48～80岁，平均年龄62岁，其中男性388例，女性82例。
1.2 基因分型 我们用酚/氯仿抽提法提取DNA，然后采用荧光标记片段分析法进行基因分型。15μL PCR反应体系中含有25ng基因组DNA，200μM dNTPs，0.3μM引物（F:5'-FAM-GCTAGCCAGCTGGTGTTATT-3';R:5'-ACCACTCTGGGAGAAGGGTA-3'），2.5mM MgCl2，0.6U DNA聚合酶。PCR的反应条件为：95℃预变性12分钟，然后10圈循环，每一循环中94℃预变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒；然后再20圈循环，每一循环中89℃预变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒；最后72℃再延伸5分钟。扩增后，1μL PCR产物和9μL Hi-DiTM甲酰胺以及0.5μL GeneScanTM-500LIZTM标准大小片段混合，在ABI 3730分析仪上进行毛细管电泳，并用GeneMapper 4.0生物软件分析样品基因型。
1.3 统计分析 我们用Monte-Carlo法检测基因型分布在正常对照中是否符合Hardy-Weinberg平衡；非条件性Logistic回归分析来估计相对发病风险，并以优势比（ORs）和95%可信区间（95% CIs）表示。所有的OR值都平衡了性别、年龄、吸烟和饮酒等因素的影响。在本研究中，IGF-Ⅰ基因型分为3组：（1）最常见等位基因192bp纯合子；（2）192bp杂合子；（3）其它。
2 结果
在本研究中，IGF-Ⅰ基因微卫星多态性CA重复显示有9个等位基因，长度从184bp到200bp，最常见等位基因为192bp，等位基因分布在观察组和对照组中差异没有统计学意义，见表1。在正常对照组中，基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡，这一多态性与食管鳞状细胞癌的发病没有关联，见表2。表1 IGF-Ⅰ (CA)n等位基因在样本中的分布表2 IGF-Ⅰ (CA)n 基因型与食管鳞状细胞癌的关联
3 讨论
食管癌是一种高度致死性癌症，其5年生存率仅为10%，目前改善其低生存率只能通过早期肿瘤筛查获得 [7]，因此识别一些高度易感人群对疾病的防治是非常重要的。
大量证据显示IGF-Ⅰ系统在食管癌的发病过程中作用显著。一些研究提示在人类食管癌中IGF-Ⅰ可通过自分泌作用刺激肿瘤细胞的生长[8-9]；而一些群组研究（cohort study）也显示血清中IGF-Ⅰ水平升高与食管癌的发病风险呈显著关联[10-11]。由于血循环中IGF-Ⅰ的浓度并不总是能直接反映局部组织中的产生量，因此识别一些基因多态性可能会帮助我们鉴别IGF-Ⅰ在局部和全身中的长期暴露水平。
双生子研究显示不同个体IGF-Ⅰ水平不同，大约有40%～60%是由遗传因素决定的[12]。在本研究中我们所检测的微卫星多态性CA重复位于启动子区域，在转录起始位点上游约1 kb处，而且含有特异的调控元件[13]。因此，这一多态性等位基因的改变可能导致IGF-Ⅰ基因转录的改变；或者这一多态性与其它位于启动子区域或其附近的多态性处于连锁不平衡，从而影响IGF-Ⅰ mRNA的稳定性或IGF-Ⅰ的半衰期[14]。虽然有研究显示这一多态性与血循环中的IGF-Ⅰ水平相关联[2]，然而我们的研究并不支持它与食管鳞状细胞癌的发病相关联。但是，我们的样本量只有约80%的效能检测到最低OR值为2，因此，我们并不能排除这一多态性对疾病的OR值低于2的效应，关于IGF-Ⅰ微卫星标记CA重复与食管鳞状细胞癌关系的最终结论还需要许多其它大的研究来确证。
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