cErbB4/HER4 在涎腺黏液表皮样癌中的表达及临床病理相关性

　　　　 作者：杨邵东 曾鸣，刘德裕2，谢福生

【摘要】 目的：探讨黏液表皮样癌（mucoepidermoid carcinoma，MEC）中表皮生长因子受体4（human epidermal growth factor receptor 4， HER4）的表达及与MEC临床病理因素的关系。方法：采用SP免疫组化方法检测45例黏液表皮样癌和15例正常涎腺组织中HER4的表达。结果：HER4表达主要定位于肿瘤细胞的胞浆，当着色强时，通常可见完整或不完整的胞膜着色。MEC阳性表达31例（69%），阴性表达14例（31%）。HER4的表达与性别、年龄、部位、肿瘤直径、临床症状、淋巴结转移、临床分期无关（P&>0.05），而与组织学分级呈明显负相关(P&<0.05)。结论：HER4的表达与MEC组织学分级呈负相关; ErbB4癌基因可能参与MEC的发生与发展，需积累更多的资料研究，以明确其生物学作用。

【关键词】 涎腺； 黏液表皮样癌；表皮生长因子受体4；免疫组织化学法

［ABSTRACT］ Objective: To assess the expression of HER4 in mucoepidermoid carcinoma of salivary gland origin， and its correlation to clinicopathologic factors of mucoepidermoid carcinoma. Methods: A total of 45 cases of mucoepidermoid carcinoma and 15 normal salivary gland tissues were examined using a standard streptavidinbiotin method. Results: Immunostaining was observed predominantly in the cytoplasm. When cytoplasmic staining was strong， a partial or complete circumferential membrane pattern of immunostaining could be seen. A total of 31 cases (69%) showed positivity and 14 cases (31%) were negative. There was no association between the expression of HER4 with age， sex， tumor site， tumor size， nodal metastasis， and clinical stage (P&>0.05)， but significant adverse association between the expression of HER4 with histological grade was noted (P&<0.05). Conclusions：HER4 receptor protein has high negative correlation with histological grade in MEC， and maybe play a certain role in initiatation and developing of salivary MEC. Further studies are required to elucidate the biological behavior of HER4 in MEC.

　　
［KEY WORDS］ Salivary gland; Mucoepidermoid carcinoma; HER4; Immunohistochemistry

　　人第四表皮生长因子受体（Human epidermal growth factor receptor 4， HER4）由cErbB4基因编码，通过自身磷酸化参与细胞的信号传递，最终调节细胞的生长及分裂。近来研究表明， HER4介导的信号通路与多种肿瘤发生、发展及转移相关［1］。目前在涎腺肿瘤中尚无HER4的研究报道。黏液表皮样癌（mucoepidermoid carcinoma，MEC）是最常见的涎腺恶性肿瘤之一，约占涎腺上皮性恶性肿瘤的30% ，不同组织学分级的MEC预后相差显著且高度恶性MEC易转移，严重危害生命［2］。本研究拟检测HER4在涎腺黏液表皮样癌中的表达，探讨HER4表达与黏液表皮样癌临床病理因素的关系，揭示cErbB4基因在黏液表皮样癌发生、发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 标本来源

　　
回顾分析武汉大学口腔医院口腔病理科1985年～2006年间收治经病理诊断的涎腺MEC组织标本，根据2005年WHO涎腺肿瘤组织学诊断标准，选取45例MEC。采用Goode等［2］提出的量化分级标准对本组病例行组织学分级。临床分期按照国际抗癌联盟（2002）涎腺肿瘤TNM分类标准。45例MEC中男性19例，女性26例，年龄16～75岁，位于大涎腺16例，小涎腺29例。组织学分级低度恶性20例，中度恶性11例，高度恶性14例。淋巴结有转移者7例。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为10、20、12、3例。15例正常涎腺的石蜡包埋组织作为对照。

1.2 实验方法

　　
采用免疫组化染色SP法检测。一抗鼠抗人cErbB4/HER4 单克隆抗体HFR1为Neomarker公司生产。 SP试剂盒和DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。免疫组化染色程序按试剂盒说明书进行，用已知阳性的切片作阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 判断标准

　　
参照Kountourakis等［3］的研究标准，HER4免疫组化染色结果以肿瘤细胞的胞浆或胞膜有棕黄色颗粒沉着为阳性，根据染色细胞百分率和染色程度进行半定量分析。判断标准：0，&<10%的肿瘤细胞着色；1+，≥10%的肿瘤细胞弱着色；2+，≥10%的肿瘤细胞着色，程度中等；3+，≥10%的肿瘤细胞强着色。计分为0和1+认为是阴性(-)，2+和3+为阳性(+)。全部切片均由2位病理科医师采用双盲法在光镜下评价。

1.4 统计学处理

　　
应用SPSS 13.0 统计分析软件根据理论值进行卡方检验或校正卡方检验， 以P&<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HER4在正常涎腺组织的表达

　　
正常涎腺组织导管细胞胞浆着色较强，呈弥散颗粒状，部分浆液性腺泡细胞胞浆弱着色，黏液性腺泡细胞和肌上皮细胞染色为阴性(图1)。

图1 HER4在正常涎腺组织导管细胞中表达 (SP×400)

2.2 HER4在黏液表皮样癌组织中的表达

　　
杨邵东等.cErbB4/HER4 在涎腺黏液表皮样癌中的表达及临床病理相关性

HER4表达主要定位于肿瘤细胞的胞浆，当胞浆着色强时，通常可见完整或不完整的胞膜着色（图2）。31例（69%）黏液表皮样癌表达阳性，14例（31%）表达为阴性。

图2 HER4在低度恶性黏液表皮样癌中的表达 (SP×200)

2.3 HER4表达与黏液表皮样癌临床病理因素的关系

　　
HER4表达与性别、年龄、部位、肿瘤直径、临床症状、淋巴结转移和临床分期无明显相关（P&>0.05），与组织学分级（低、中度恶性，高度恶性）呈负相关（P&<0.05）。HER4表达与黏液表皮样癌临床病理特征的关系见表1。

表1 HER4表达与MEC临床病理因素的关系 n(%)

类别nHER4(+)HER4(-)

性别 男1912（38.7）7（50.0）

　　 女2519（61.3）7（50.0）

年龄 ≤40岁2218（58.1）4（28.6）

　　 &>40岁2313（41.9）10（71.4）

部位 大涎腺1611（35.5）5（35.7）
　　 小涎腺2920（64.5）9（64.3）

临床症状 有2520（58.8）5（35.7）
　　 无2011（32.4）9（64.3）

直径 ≤2cm129（26.5）3（21.4）

　　 &>2cm3322（70.9）11（78.6）

淋巴结转移 有73（9.7）4（28.6）
　　 无3828（90.3）10（71.4）

临床分期 Ⅰ期和Ⅱ期3023（74.2）7（50.0）
　　 Ⅲ期和Ⅳ期158（25.8）7（50.0）
组织学分级 低、中度恶性3126（83.9）5（35.7）
高度恶性145（16.1）9（64.3）

3 讨论

　　
表皮生长因子受体家族HER/EGFR/ErbB家族属于I型受体酪氨酸激酶超家族，是一类具有跨膜结构的酶蛋白，其成员有：HER1（EGFR，ErbB1）、HER2（ErbB2）、HER3（ErbB3）及HER4（ErbB4）。它们的结构相似，均由配体结合区，单链跨膜区及高度保守的胞浆蛋白酪氨酸激酶区组成。当各成员的配体结合区与配体结合后而被激活，引起同源或异源二聚体的形成，激活胞内的酪氨酸激酶，使自身酪氨酸残基发生磷酸化，从而激活众多的下游信号路径，包括 PLCγ、PI3K、小的G蛋白、P21ras、rasGTP 酶激活蛋白(GAP)、生长因子受体结合蛋白2(grb2) 和src激酶家族等，调控细胞的生长、分化、增殖、血管生成和凋亡［4］。 ErbB 4基因是编码HER4的癌基因，是在研究禽成红细胞增生病的过程中发现的，于1993年在人体组织中被克隆。该基因在绝大部分正常人体组织包括涎腺中均有不同程度的表达，并参与了许多生理病理过程，此外，HER4的异常表达与多种肿瘤的发生发展有关［1，5］。

　　
黏液表皮样癌是最常见的涎腺肿瘤，目前关于MEC的组织来源和发病机制尚不明确，表皮生长因子受体家族及其配体的相互作用可能在黏液表皮样癌的发生、发展中起重要作用。研究发现EGFR在正常涎腺组织中导管细胞表达，而腺泡细胞不表达，在MEC及其他涎腺肿瘤中存在高表达，其表达与涎腺肿瘤的组织学形态、结构及细胞类型有关［68］。涎腺正常组织中无erbB2的表达，而在涎腺肿瘤中却发现有erbB2不同程度的过表达。在高度恶性的涎腺MEC中，普遍存在erbB2过度表达，而且erbB2癌基因蛋白阳性表达随MEC恶性程度的增高而增高，与其组织学分级呈明显呈正相关，其过表达可作为MEC预后不良的指标之一［810］。Gibbons等［11］检测了22例MEC中HER3的表达，发现HER3在所有病例中均存在不同程度的表达，其表达显著高于正常涎腺组织。

　　
本实验首次对HER4的表达及与MEC临床病理因素的关系进行了分析，结果表明HER4表达与性别、年龄、部位、肿瘤直径、临床症状、淋巴结转移和临床分期无明显相关（P&>0.05），与组织学分级呈负相关（P&<0.05）。研究结果提示，ErbB4癌基因可能在MEC的形成、演进过程中发挥重要作用。HER4与其他表皮生长因子受体家族成员在MEC中的协同作用机制需要进一步深入研究。

海南医学院学报 Vol.16 No.9 Sep.2010

参考文献

1 Carpenter G. ErbB4: mechanism of action and biology［J］. Exp Cell Res， 2003，284(1):6677.

2 Goode RK，Auclair PL，Ellis GL. Mucoepidermoid carcinoma of the major salivary glands: clinical and histopathologic analysis of 234 cases with evaluation of grading criteria［J］. Cancer，1998，82(7):12171224.

3 Kountourakis P，Pavlakis K，Psyrri A，et al. Prognostic significance of HER3 and HER4 protein expression in colorectal adenocarcinomas［J］. BMC Cancer，2006，28（6）:46.

4 Linggi B， Carpenter G. ErbB receptors: new insights on mechanisms and biology［J］. Trends Cell Biol，2006，16(12):649656.

5 Srinivasan R，Poulsom R，Hurst HC，et al. Expression of the cerbB4/HER4 protein and mRNA in normal human fetal and adult tissues and in a survey of nine solid tumour types［J］. J Pathol，1998，185(3):236245.

6 Katopodi E，Patsouris E，Papanikolaou V，et al. Immunohistochemical detection of epidermal growth factor and its receptor in salivary gland carcinomas［J］. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2003， 95(3):266268.

7 Sorensen KB，Godballe C，de Stricker K， et al. Parotid carcinoma: expression of kit protein and epidermal growth factor receptor［J］. J Oral Pathol Med，2006，35（5）：286391.

8 Shang J，Shui Y，Sheng L，et al. Epidermal growth factor receptor and human epidermal growth receptor 2 expression in parotid mucoepidermoid carcinoma: possible implications for targeted therapy［J］. Oncol Rep， 2008，19(2):435440.

9 Nguyen LH，Black MJ，Hier M，et al. HER2/neu and Ki67 as prognostic indicators in mucoepidermoid carcinoma of salivary glands［J］. J Otolaryngol，2003，32(5):328331.

10 Lopes MA，da CruzPerez DE，de AbreuAlves F，et al. Clinicopathologic and immunohistochemical study of intraoral mucoepidermoid carcinoma［J］.Otolaryngol Head Neck Surg，2006，134(4):622626.

11 Gibbons MD，Manne U，Carroll WR，et al. Molecular differences in mucoepidermoid carcinoma and adenoid cystic carcinoma of the major salivary glands［J］. Laryngoscope，2001，111（8）：13731378