作者：廖宝霞 朱爱琴 郗爱旗 禇以德
【摘要】 目的 探讨藏药七十味珍珠丸(RNSP)对阿尔茨海默病(AD)AD的作用机制。方法 筛选出AD患者48例，随机分为治疗组及对照组，治疗4、12 w后分别进行认知功能评价及血浆超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)的测定。结果 AD 患者经RNSP治疗后，与对照组比较，简易精神状态量表(MMSE)总分、认知分量表(ADAScog)和日常生活活动量表(ADL)均有明显改善(P<0.01，P<0.05)，治疗组SOD升高(P<0.05)， NOS水平显著降低(P<0.01)。结论 RNSP具有明显改善AD患者认知功能，提高血浆SOD含量，降低NOS水平，改善脑功能的作用。
【关键词】 阿尔茨海默病;藏药七十味珍珠丸;认知功能;氧化应激因子
【Abstract】 Objective To observe the effect of Ratnasampil (RNSP) on Alzheimer′s disease (AD) patient′s cognitive function and oxidative stress and explore its mechanism. Methods 48 AD patients were selected and pided into treatment group (treated with RNSP) and control group (treated with Piracetam). After 4 and 12 weeks， patient′s cognitive function， superoxide dismutase (SOD)， malonaldehyde (MDA)， nitrogen monoxide (NO) and nitric oxide synthase (NOS) were detected.Results Compared with control group， the patients′ MMSE， ADAScog and ADL score were all improved (P<0.01， P<0. 05)， the level of SOD were increased (P<0.05) and the level of NOS were decreased (P<0.01) in RNSP group. Conclusions RNSP has the effect of improving the cognitive function， increasing the level of SOD， decreasing the level of NOS， and improving the function of brain.
【Key words】 Alzheimer′s disease; Ratnasampil; Cognitive function; Oxidative stress factor
目前阿尔茨海默病(AD)的发病机制尚不清楚，越来越多的研究发现氧化应激在其发生发展中起关键作用〔1〕，如超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NOS)等。许多证据显示〔2〕，在老年痴呆出现神经元及病理变化的极早期，在易感神经元中就有氧化损伤出现，说明氧化损伤是导致疾病的一个早期因素。提示早期抗氧化措施对延缓AD的发生可能有一定帮助。我国很早就有治疗痴呆的中药方剂，对AD的治疗有一定的优势，藏药七十味珍珠丸(RNSP)是否能够治疗AD仍处于空白状态。本研究初步探讨RNSP对AD患者的认知功能改善以及对氧化应激因子的影响。
1 资料与方法
1.1 病例选择 所有患者均来自于2005年1月至2007年12月本院住院48例AD病人，过筛后随机分组。治疗组24例，男14例，女10例，年龄55～88(平均75.2±7.3)岁，对照组24例，其中男13例，女11例，年龄57～85(平均74.7±6.9)岁。
1.1.1 入组标准 符合美国第4版(DSMⅣ)的痴呆诊断标准;符合美国神经病学、语言障碍、卒中阿尔茨海默病和相关疾病学会(NINCDSADRDA)有关AD的诊断标准;简易精神状态量表(MMSE) 评分3～25分之间;Hachinski缺血评分≤4分;汉密尔顿抑郁量表评分(HAMD)<7分;CT和MRI示AD的形态学指标为:颞叶萎缩明显，海马结构变小，脑室扩大，皮质萎缩和白质病灶。
1.1.2 排除标准 头颅CT或MRI等检查血管性痴呆，物理、化学因素及颅内占位性病变等引起的痴呆;严重的心肺肝肾及血液方面疾病;病情危重，难以对药物的有效性和安全性做出确切评价者;本治疗前2 w内服用中、西促智药物者;过敏体质及对多种药物过敏者。
1.2 人群的基线特征 完成试验的两组患者的人口学特征(性别、年龄、民族)、病程、受教育程度、MMSE基线分数以及病情的严重程度，均无显著性差异(P>0.05)，两组资料均衡而具有可比性。两组患者血尿常规及血生化指标(肝肾功能、血糖、血脂、电解质)在入组前和结束时均正常。
1.3 研究设计 采用随机、单盲药物对照的试验设计方法。治疗组口服RNSP，1 g/d(青海金诃藏药药业股份有限公司提供，批号：国药准字Z63020062)。对照组口服吡拉西坦胶囊2.4 g/d，3次/d口服。两组治疗期间均不用其他影响智能的药物、中枢神经兴奋剂。对有并发症者均予适当治疗。疗程均为12 w。
1.4 疗效指标 主要疗效指标为量表MMSE评分、ADAScog评分和日常生活量表(ADL)评分。
1.5 测定方法 血浆SOD、MDA、NO及NOS采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行检测。SOD 测定采用黄嘌呤氧化酶法;MDA采用硫代巴比妥酸(TAB)法。
1.6 统计学处理 数据用x±s表示，采用SPSS10.0软件进行t检验。
2 结 果
2.1 RNSP对AD患者认知功能及日常生活能力的影响分析 两组间治疗前各量表各项观察基线分相似(P>0.05)。12 w后，治疗组MMSE总分和定向力、计算能力、记忆力、回忆和语言5个因子显著增高，ADAScog评分进一步降低(P<0.01)。ADL总分以及工具使用和生活自理能力2个因子均有明显改善(P<0.05)。对照组治疗12 w后各项评分无明显改善(P>0.05)，见表1、表2。
2.2 两组治疗前后SOD、MDA、NO 及NOS水平变化 组内比较，治疗组12 w后，AD患者SOD较治疗4 w和治疗前有明显差异(P<0.05);同时发现AD患者NOS水平也显著降低，较治疗4 w(P<0.05)，治疗前(P<0.01)。和对照组比较，治疗12 w后，NOS在治疗组明显降低(P<0.05)(表3)。表1 两组治疗前、后MMSE总分和各因子之间的变化与对照组比较：1) P<0.05，2)P<0.01;下表同表2 两组治疗前、后ADAScog和ADL总分和各因子之间的变化表3 两组治疗前、后SOD、MDA、NO及NOS水平变化与治疗前比较：1)P<0.05，2)P<0.01;与本组治疗4 w比较：3)P<0.05;与治疗组12 w比较：4)P<0.05
3 讨 论
脑组织中含高浓度不饱和脂肪酸、儿茶酚胺和高水平的氧化代谢，是氧自由基最易侵袭的靶器官，而脑内保护性抗氧化酶和非酶性自由基清除剂含量却很低。有报道自由基代谢紊乱是造成神经细胞的老化及变性，促使或加重老年痴呆进程的原因之一〔3〕。SOD是重要的抗氧化酶，其活力反映机体清除氧自由基能力，MDA是体内过氧化作用的最终产物，其含量高低间接反映机体细胞受自由基攻击的严重程度〔4〕。故SOD和MDA的变化可反映出老年痴呆的进程。NO通过与氧自由基反应形成活性更高的毒性基团，通过脂质过氧化作用、酶灭活等作用导致神经元的死亡。NO过多可直接影响机体铁代谢、能量代谢、蛋白质功能，对基因产生毒性作用，诱导细胞凋亡，可以直接参与多种急慢性神经病变的病理过程。NOS一个重要特征是不仅合成NO，也能产生超氧阴离子。因此，改善自由基代谢成为抗痴呆药物的研究方向之一。动物实验表明，RNSP对小鼠记忆获得障碍具有良好的改善作用，这对于防治智能衰退、记忆量减低是很有益的〔5〕。同时其改善微循环、增加脑组织血流及营养供应，使神经功能得到改善，行为障碍明显恢复，起到了减轻脑继发性损伤的作用。近年抗氧化治疗的研究取得了长足的进展，其中维生素E、金纳多的抗氧化作用在老年痴呆症的临床实验得到证实〔6，7〕。大量研究提示中药在动物实验改善痴呆小鼠学习记忆及调节脑内SOD、MDA 及NO水平方面有效〔8，9〕，提高痴呆小鼠的抗氧化能力可能是治疗AD的重要机制之一。
本研究结果显示在大剂量RNSP治疗高原地区AD患者4 w后，MMSE总分和定向力、记忆力和回忆能力3个因子以及包括记忆、注意、语言、定向、视空间、理解和操作能力等12个项目的AD评估量表的认知分量表ADAScog均有改善，12 w时，MMSE评分总分、定向力、计算力、回忆能力和语言能力5个因子显著增高，ADAScog评分进一步降低。大剂量RNSP治疗ADL总分和生活自理和使用工具能力2项目均有从数值上来看与对照组差异显著。而小剂量RNSP组MMSE、ADAScog和ADL评分差异不显著。治疗12 w后对照组各项评分无明显改善。表明藏药RNSP确能有效地改善AD患者的认知功能，社会活动能力以及日常生活自理能力。
从氧化应激角度探讨RNSP对AD的作用，结果显示，治疗12 w后治疗组SOD明显升高，与治疗前及对照组有显著差异，NOS在治疗4 w后即有明显降低，而MDA无明显变化。提示RNSP有较好的提高AD患者血液SOD活性的生理作用，起到一定清除体内氧自由基保护脑细胞功能的作用，同时观察到治疗组血浆NOS下降，间接降低NO合成，抑制超氧阴离子对脑细胞的损伤。其机制可能与RNSP具有抑制血栓形成、增加脑血流量、降低血管阻力、改善脑膜微循环有关。同时，该药能改善脑缺血造成的血管通透性增加，减轻脑水肿，并能增强大脑对缺氧的耐受〔10〕。提示RNSP在高原抗缺氧、抗氧化方面对AD有一定的改善作用。
参考文献
1 Skoumalova A，Rofina J，Schwippelova Z，et al.The role of free radicals in canine counterpaet of senile dementia of the Alzheimer type〔J〕.Exp Gerontol，2003;38(6):7119.
2 Nunomura A，Perry G，Aliev G，et al.Oxidative damage is the earlist event in Alzheimer Disease〔J〕.J Neuropathol Exp Neurol，2001;60(8):75967.
3 王新玲，李月彩，侯颖香.自由基、细胞凋亡与衰老关系研究进展〔J〕.中国老年学杂志，1999;19(4)：2523.
4 李卫平，刘晓加，林宏川.老年痴呆患者血液和脑脊液的氧自由基反应相关指标研究〔J〕.临床神经病学杂志，1996;9 (4)：21820.
5 王晓勤，海 平，周生祥，等.藏药七十味珍珠丸对樟柳碱所致小鼠记忆获得障碍的改善作用〔J〕.青海医学院杂志，2001;31(7):12.
6 Sung S，Yao Y，Uryu K，et al.Early vitaminE supplementation in young but not aged mice reduces A beta levels and amyloid deposition in a transgenic model of Alzheimer disease〔J〕.FASEB J，2004;18(2):3235.
7 Tariot PN，Federoff HJ.Current treatment for Alzheimer disease and future prospects〔J〕.Alzheimer Dis Assoc Disord，2003;17(4):10513.
8 朱未名，胡海燕.清心开窍方对老年痴呆小鼠脑自由基代谢及海马CA1 区神经细胞形态的影响〔J〕.中国实验方剂学杂志，2007;13(10)：5760.
9 Normile D.Asian medicine.The new face of traditional Chinese medicine〔J〕.Science，2003;299(5604):18890.
10 安尔建，索有瑞.藏药七十味珍珠丸现代药理学研究进展〔J〕.中国民族医药杂志，2004;4(2):335.
2.2 两组治疗前后SOD、MDA、NO 及NOS水平变化 组内比较，治疗组12 w后，AD患者SOD较治疗4 w和治疗前有明显差异(P<0.05);同时发现AD患者NOS水平也显著降低，较治疗4 w(P<0.05)，治疗前(P<0.01)。和对照组比较，治疗12 w后，NOS在治疗组明显降低(P<0.05)(表3)。表1 两组治疗前、后MMSE总分和各因子之间的变化与对照组比较：1) P<0.05，2)P<0.01;下表同表2 两组治疗前、后ADAScog和ADL总分和各因子之间的变化表3 两组治疗前、后SOD、MDA、NO及NOS水平变化与治疗前比较：1)P<0.05，2)P<0.01;与本组治疗4 w比较：3)P<0.05;与治疗组12 w比较：4)P<0.05
3 讨 论
脑组织中含高浓度不饱和脂肪酸、儿茶酚胺和高水平的氧化代谢，是氧自由基最易侵袭的靶器官，而脑内保护性抗氧化酶和非酶性自由基清除剂含量却很低。有报道自由基代谢紊乱是造成神经细胞的老化及变性，促使或加重老年痴呆进程的原因之一〔3〕。SOD是重要的抗氧化酶，其活力反映机体清除氧自由基能力，MDA是体内过氧化作用的最终产物，其含量高低间接反映机体细胞受自由基攻击的严重程度〔4〕。故SOD和MDA的变化可反映出老年痴呆的进程。NO通过与氧自由基反应形成活性更高的毒性基团，通过脂质过氧化作用、酶灭活等作用导致神经元的死亡。NO过多可直接影响机体铁代谢、能量代谢、蛋白质功能，对基因产生毒性作用，诱导细胞凋亡，可以直接参与多种急慢性神经病变的病理过程。NOS一个重要特征是不仅合成NO，也能产生超氧阴离子。因此，改善自由基代谢成为抗痴呆药物的研究方向之一。动物实验表明，RNSP对小鼠记忆获得障碍具有良好的改善作用，这对于防治智能衰退、记忆量减低是很有益的〔5〕。同时其改善微循环、增加脑组织血流及营养供应，使神经功能得到改善，行为障碍明显恢复，起到了减轻脑继发性损伤的作用。近年抗氧化治疗的研究取得了长足的进展，其中维生素E、金纳多的抗氧化作用在老年痴呆症的临床实验得到证实〔6，7〕。大量研究提示中药在动物实验改善痴呆小鼠学习记忆及调节脑内SOD、MDA 及NO水平方面有效〔8，9〕，提高痴呆小鼠的抗氧化能力可能是治疗AD的重要机制之一。
本研究结果显示在大剂量RNSP治疗高原地区AD患者4 w后，MMSE总分和定向力、记忆力和回忆能力3个因子以及包括记忆、注意、语言、定向、视空间、理解和操作能力等12个项目的AD评估量表的认知分量表ADAScog均有改善，12 w时，MMSE评分总分、定向力、计算力、回忆能力和语言能力5个因子显著增高，ADAScog评分进一步降低。大剂量RNSP治疗ADL总分和生活自理和使用工具能力2项目均有从数值上来看与对照组差异显著。而小剂量RNSP组MMSE、ADAScog和ADL评分差异不显著。治疗12 w后对照组各项评分无明显改善。表明藏药RNSP确能有效地改善AD患者的认知功能，社会活动能力以及日常生活自理能力。
从氧化应激角度探讨RNSP对AD的作用，结果显示，治疗12 w后治疗组SOD明显升高，与治疗前及对照组有显著差异，NOS在治疗4 w后即有明显降低，而MDA无明显变化。提示RNSP有较好的提高AD患者血液SOD活性的生理作用，起到一定清除体内氧自由基保护脑细胞功能的作用，同时观察到治疗组血浆NOS下降，间接降低NO合成，抑制超氧阴离子对脑细胞的损伤。其机制可能与RNSP具有抑制血栓形成、增加脑血流量、降低血管阻力、改善脑膜微循环有关。同时，该药能改善脑缺血造成的血管通透性增加，减轻脑水肿，并能增强大脑对缺氧的耐受〔10〕。提示RNSP在高原抗缺氧、抗氧化方面对AD有一定的改善作用。
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