重型α地中海贫血胎儿产前超声及基因诊断分析

　　　　　　作者：武艳琳，陈新宇，陈碧，唐棣，宋丽君

【摘要】 目的 探讨超声及基因诊断在重型α地中海贫血胎儿产前诊断中的应用价值。方法 回顾性分析2004年1月至2007年7月在我院产住院并引产或分娩的水肿胎儿13例。结果 13例水肿胎儿中，12例为α地中海贫血1基因纯合子(--SEA/--SEA)，B超漏诊1例。结论 用跨越断裂点PCR(gapPCR)技术行产前羊水基因检测能快速、准确诊断α地中海贫血。胎儿产前超声筛查也可早期发现胎儿畸形，两相结合有很好的临床应用价值。

【关键词】 超声；产前诊断；α地中海贫血；聚合酶链反应

α地中海贫血(简称α地贫)是我国南方各省发病率高、影响力较大的遗传病之一，广东α地贫发生率非常高，据报道：广东省的α地贫检出率为8.3%［1］。由于该病的重症型为致死性疾病，在高发区会对人口质量构成严重威胁，目前世界上公认的首选对策是通过产前诊断淘汰重症受累胎儿以达到预防的目的。地中海贫血纯合子水肿胎（Bart's水肿胎）是地中海贫血中最严重的一种，产前超声检查能及早发现胎儿水肿，有着重大意义。超声检查是目前诊断胎儿水肿最直接、最有效的手段之一。本文对2004年1月至2007年7月在我院产住院并引产或分娩的水肿胎儿13例进行回顾性分析。
　　
　　1 临床资料
　　
　　1.1 一般资料
　　
　　13例水肿胎儿为2004年1月至2007年7月在我院行产前超声常规检查并住院引产或分娩的病例，孕妇年龄23～35岁，孕周18～35周。
　　
　　1.2 方法

　　1.2.1 标本采集和制备 孕妇于孕期在B超引导下行羊膜腔穿刺抽取羊水20 mL，引产或分娩后抽取脐血4～5 mL。羊水细胞及脐血白细胞用常规笨酚氯仿法抽提DNA。

　　1.2.2 α地中海贫血基因检测 采用文献［2］报道的跨越断裂点PCR扩增法(α地中海贫血检测试剂盒由第一军医大学提供)检测东南亚缺失型α地中海贫血基因。在缺失基因--SEA的5'端断裂点上游和3'端断裂点下游设计一对特异性引物对P1/P2，能特异地扩增出代表该突变存在的740 bp的DNA片段。在缺失基因区域设计内对照引物对P3/P4，能特异性扩增代表正常α珠蛋白基因的1052 bp的DNA片段。二对引物在单管中扩增，反应总体积25μL。PCR在Hema 4800扩增仪(珠海黑马公司生产)进行，循环参数为95℃变性5 min，55℃加Taq DNA聚合酶1 U、退火3 min，72℃延伸2 min;然后95℃进行变性1 min，55℃进行退火1 min、72℃进行延伸2 min，进行30个循环;最后72℃延伸5 min。

　　1.2.3 结果观察 取PCR产物5μL，用2 g/L琼脂糖凝胶(含溴乙锭)电泳，与标准分子Marker作对照。只出现1052 bp片断为正常人，只出现740 bp片断者为α地中海贫血1基因纯合子(Hb Bart's水肿胎儿)，同时出现1052 bp和740 bp两个片断者为α地中海贫血1基因杂合。

　　1.2.4 超声产前诊断 使用GEV730 Expert超声诊断仪，探头为凸阵探头，频率为3.5～5.0 MHz。孕妇仰卧位进行产前超声常规检查，对于可疑部位进行多切面扫查及孕妇改变体位扫查，并充分利用仪器的放大及彩色多普勒功能，进一步仔细观察。
　　
　　1.3 结果
　　
　　12例孕妇α地中海贫血的产前诊断，在引产后均得到证实。11例Bart's水肿胎儿，均由B超发现水肿胎儿后行基因诊断。B超漏诊水肿胎1例，发现非地贫水肿胎1例。13例水肿胎儿中，腹水11例（84.6%），肝大9例（69.3%），巨大胎盘7例（53.8%），心胸面积比值增大5例（38.5%），羊水过多4例（30.8%），胎儿皮肤双重征4例（30.8%），胸水3例（23.1%），见表1。
　　
　　2 讨论
　　
　　α地贫是由于α珠蛋白基因缺失突变导致α珠蛋白肽链缺如或合成减少而引起的一种遗传性溶血性疾病。

　　表1 13例胎儿染色体异常病例（略） 　

　　在我国，此病多见于南方各省，如广西、广东等省。根据遗传情况如果夫妇双方均为α地贫基因携带者时，将会有25％的危险娩出一个重型α地贫儿。受影响的胎儿常在妊娠中晚期出现系列重度贫血症状，出生后很快就会死亡，孕母也常会出现产科并发症。由于目前对地中海贫血尚无有效的治疗方法，进行产前诊断的目的就是要杜绝纯合子胎儿的出生，减少杂合子胎儿的出生［2］。所以进行产前常规筛查，对夫妻双方均为地中海贫血杂合子的孕妇进行产前诊断，及时引产纯合子胎儿，达到优生目的。随着分子生物学的发展，地中海贫血的基因诊断为临床确诊提供了可靠的方法。本组12例孕妇α地中海贫血的产前诊断在引产后均得到证实。11例Bart's水肿胎儿均由B超发现水肿胎儿后行基因诊断，提示B超对Bart's水肿胎的诊断有着重要参考意义［34］。
　　
　　抽取绒毛活检、羊膜腔穿刺取羊水脱落细胞或经腹穿刺取脐血获取胎儿标本的操作有一定的危险性，患者有较多顾虑，近年来国内外有学者提出更安全简便的产前诊断方法。国内外有应用超声多普勒检测胎儿大脑中动脉血流速度诊断不同类型胎儿贫血的报道， 使有贫血风险的胎儿减少70%以上的侵入性操作， 认为可能是诊断胎儿贫血的最佳方法［56］。
　　
　　目前要杜绝纯合子胎儿的出生， 减少杂合子胎儿的出生， 应加强遗传咨询及婚前指导宣教， 避免地中海贫血基因携带者互相婚配。同时进行产前超声常规筛查，对夫妻双方均为地中海贫血杂合子的孕妇进行产前诊断，及时引产纯合子胎儿，达到优生目的。

参考文献

　　［1］ 曾瑞萍，胡彬，金龙金.广东地区血红蛋白H病基因型分析及高危胎儿基因诊断［J］.中华医学遗传学杂志， 1996， 13 (5):266.

　　［2］ 吴琦嫦，周裕林，王文博，等.厦门地区α地中海贫血发病率及基因诊断前期研究［J］. 中国优生与遗传杂志， 2008， 16(8):2628.

　　［3］ 李兵，夏建红，田丰莲，等.广东省1996年至2004年监测出生缺陷发生情况分析［J］. 中华围产医学杂志， 2006，6(6):154159.

　　［4］ 肖维威，徐湘民，刘忠英.东南亚缺失型α地中海贫血的聚合酶链反应快速诊断技术及产前诊断［J］.中华血液学杂志，2000，21(4):192194.

　　［5］ DelleChiaie L，Buck G， Grab D， et al. Prediction of fetal anemiawith Doppler measurement of the middle cerebral artery peak systolic velocity in pregnancies complicated by maternal blood group alloimmunization or parvovirus B19 infection［J］.Ultrasound Obstet Gynecol， 2001，18(3):232236.

　　［6］ 马燕，温静，李敏清，等. 胎儿大脑中动脉血流速度与胎儿地中海贫血的相关性研究［J］. 中国超声医学杂志， 2008， 9(4):361364.