中期因子与脑膜瘤临床病理的关系

　　　　 作者：李新军，夏祥国△，徐宏，曾义，韩扬云，刘伦波，罗小强

【摘要】 　　目的 探讨中期因子（MK）蛋白在脑膜瘤中的表达及其与临床病理的关系。方法 采用SP免疫组织化学技术，检测52例脑膜瘤组织和10例正常脑膜组织中MK蛋白的表达，并对二者的关系进行统计学分析。结果 52例脑膜瘤组织中，MK蛋白阳性表达率为63.5%，正常脑膜组织中无MK蛋白表达，差异有显著性(P=0.001&<0.05)。MK蛋白阳性表达与患者的年龄、性别和肿瘤部位、大小、形状无关(rs =0.4524，P=0.089&>0.05)，而与肿瘤病理分级分类(rs =0.3785，P=0.0024&<0.05)、侵袭性(rs =0.7412，P=0.0087&<0.05)、血供(rs =0.6518，P=0.041&<0.05)、瘤周水肿(rs =0.6142，P=0.032&<0.05)密切相关。结论 MK蛋白在脑膜瘤组织中有过度表达； MK蛋白的表达与侵袭性、瘤周水肿及病理分级相关；MK蛋白有望成为临床上对脑膜瘤生物学行为进行判定的指标。抑制MK的表达，有望为高表达MK的脑膜瘤提供一个新的治疗途径。

【关键词】 脑膜瘤 中期因子蛋白（MK） 人原始造血细胞（CD34） 微血管密度（MVD） 免疫组织化学

　　Abstract Objective To discuss the expresion of midkine (MK) in meningioma and its relation with the clinicopathology of meningioma.Methods S-P immunohistochemistry was applied in detecting the expression of MK in meningioma tissues of 52 cases and in normal dura tissues of 10 cases， and a statistical analysis was made to the relation between the two.Results In the meningioma tissues， the positive rate of the MK expression was 63.5% while there was no MK expression in normal dura tissues， the difference was significant (P=0.001&<0.05); the positive expression of MK had no relation with the age， sex of patients and the location， size and shape of tumors (rs=0.4524，P=0.089&>0.05) but was closely related to the pathological grading and typing of the tumor (rs=0.3785， P=0.0024&<0.05)， invasion (rs=0.7412， P=0.0087&<0.05)， blood supply (rs=0.6518， P=0.041&<0.05)， tumor edema (rs=0.6142， P=0.032&<0.05). Conclusions MK is overexpressed in meningioma tissues: the expression of MK is closely related to the invsion， tumor edema and pathological grading; MK may be the judgement standard of biological behavior of meningioma in clinic; to inhibite the expression of MK may provide a new treatment for meningioma with high expression of MK.

　　Keywords meningioma　　 midkine (MK)　　 CD34　　 microvessel density (MVD)　　 immunohistochemistry

　　中期因子(midkine，MK)是一种分泌性肝素结合生长因子，对葡氨聚糖肝素和硫酸肝素具有高度亲和力，MK与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白介素8(IL8)等共同参与新生血管生长，具有刺激血管内皮细胞增殖作用，是一种重要的血管生成诱导因子。脑膜瘤为常见的颅内肿瘤，血供丰富，其发生、发展有赖于肿瘤本身的丰富血供。MK通过促有丝分裂原活性、抗肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤新生血管的形成等作用，直接或间接参与肿瘤的生长与转移。目前对于脑膜瘤血管生成、侵袭性、瘤周水肿等生物学行为进行了大量的基础和临床研究，但其确切的机制尚不很清楚。近年已有研究发现［1］MK异常表达与肿瘤的发生、发展、血管生成等因素有关，但在脑膜瘤的领域内研究甚少，本文应用免疫组织化学技术，检测脑脑膜瘤组织中MK蛋白的表达，探讨MK蛋白与侵袭性、瘤周水肿及临床病理的关系。

　　1 材料和方法

　　1.1 一般资料 病例来自泸州医学院附属医院神经外科2003年1月至2006年12月经手术及病理检查证实，且病理和临床资料完整的脑膜瘤病人共52例，其中男性31例，年龄21～68岁，平均44.5±15岁；女性21例，年龄11～67岁，平均39±13.5岁。病程1～48月，平均20.4±11.3月。按WHO中枢神经系统肿瘤分型、分级标准分类：其中Ⅰ级40例（包括脑膜上皮型7例，纤维细胞型9例，混合型11例，血管瘤型6例，沙砾型7例）；Ⅱ级5例（包括非典型性脑膜瘤3例，透明细胞型2例）；Ⅲ级7例（间变型7例）。另收集10例正常脑膜组织（取自脑外伤手术病人）以做对照。年龄、大小、位置、病理类型、病情分级、侵袭情况血供及瘤周水肿等作为临床病理因素的评价参数。

　　1.2 主要试剂 羊抗人MK多克隆抗体、鼠抗人CD34单克隆抗体、免疫组化SP试剂盒及DAB显色试剂盒（均购自美国Santa Cruz生物技术公司）。

　　1.3 实验方法 52例标本经10％福尔马林固定，石蜡包埋，5μm连续切片， HE染色，SP免役组化染色、苏木素复染、脱水透明、DAB显色。采用已知MK蛋白阳性肝细胞癌组织切片作阳性对照，以Tris盐酸缓冲液代替第一抗体作阴性对照。MK蛋白（工作浓度1:50）、CD34（工作浓度1：100）均采用SP法。MK蛋白以肿瘤细胞胞膜或胞质内出现清晰黄色颗粒为阳性判定标准。MVD判断标准：CD34染色以在肿瘤间质血管内皮细胞胞浆中出现清晰棕黄色颗粒为阳性。

　　1.4 统计学处理 所有数值变量均采用均数±标准差（±s）表示，采用SPSS11.5统计软件包进行统计分析；计量资料采用单因素方差分析（oneway ANOVA）；计数资料采用卡方检验、秩和检验；两变量间相关性用Spearman等级相关分析。显著性水准α取为0.05。

　　2 结果

　　2.1 脑膜瘤组织及正常脑膜组织中MK的表达与MVD的测定 52例脑膜瘤组织中，MK阳性表达率为63.5％，其中弱阳性（＋），阳性（＋＋），强阳性（＋＋＋）表达率分别为17.3％，32.7％，13.4％； MVD均值为82.0±22.7；正常脑膜中无MK表达， MVD均值为25.8±6.2，明显低于肿瘤组织，差异有统计学意义（P=0.019&<0.05）。

　　2.2 MK的表达与脑膜瘤临床病理的关系 MK的表达与患者的年龄、性别和肿瘤部位、大小、形状无关（rs =0.4524，P=0.089&>0.05）。间变性、非典型和血管型脑膜瘤与其他组织学类型之间的比较，MK表达差异有统计学意义（P=0.007&<0.01）;肿瘤侵袭性与非侵袭性之间，病理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级之间，病情Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级之间，血供Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级之间，瘤周水肿0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级之间比较，MK的表达差异有统计学意义（P=0.035&<0.05）；MK的表达与肿瘤侵袭性（rs =0.7412，P=0.0087&<0.05）、病理分级（rs =0.3785，P=0.0024&<0.05）、病情分级（rs =0.5327，P=0.034&<0.05）、肿瘤血供（rs =0.6518，P=0.041&<0.05）和瘤周水肿（rs =0.6142，P=0.032&<0.05）密切相关。

　　3 讨论
　　
　　中期因子是基于其表达于妊娠中期和肾脏而得名。研究发现MK直接参与肿瘤生长、侵袭过程和血管生成的调节，表达于多种实体瘤。本实验结果也证明了MK在在脑膜瘤中过度表达。近年来很多的学者对脑膜瘤临床病理特性进行了大量的研究和探索，但关于MK的表达与脑膜瘤临床病理的关系的研究和报道罕见。现就MK的表达与脑膜瘤的关系讨论如下：

　　MK促进肿瘤的发生发展的机制可能有如下几方面：（1）其具有诱导细胞恶性转化的功能，转染MK或PTN基因cDNA的NIH3T3细胞在裸鼠体内可形成肿瘤［2，3］。（2）针对PTN基因mRNA的核酶或MK基因的反义寡核苷酸，可抑制黑色素瘤细胞、胰腺癌细胞、直肠癌细胞等肿瘤细胞生长、增殖和克隆形成。（3）具有抗凋亡能力，研究［4，5］发现，MK可通过上调bc12逆转顺铂诱导的肿瘤细胞凋亡。已有研究表明MK的高表达具有抑制脑膜瘤细胞调亡的作用［6］。（4）MK和PTN可通过增强肿瘤细胞恶性表型从而促进肿瘤生长和演进。胃癌［7，8］细胞系中MK表达阳性的细胞在软琼脂中集落形成及转移实验中侵袭能力均强于MK表达阴性的细胞，用肝素结合阻断剂戊糖多硫酸盐(PPS)处理细胞后，可明显逆转其恶性表型。且转染MK基因的膀胱癌细胞在裸鼠体内成瘤能力强于对照组，组织病理学证实这种肿瘤生长速度加快与微血管密度增高有关［9］。
　　
　　本实验结果显示：MK的表达与患者的年龄、性别和肿瘤部位、大小、形状无关。而与肿瘤侵袭性、病理分级、病情分级、肿瘤血供和瘤周水肿密切相关。因此，可推测病人的年龄、性别和肿瘤的大小、部位、形状不能反映脑膜瘤的组织学特性，而MK的表达则与脑膜瘤自身的组织学特性相关。MK的表达可在一定程度上反映脑膜瘤患者的病情，可较好的反映脑膜瘤的组织学特性，测定脑膜瘤组织中的MK的表达，有助于了解脑膜瘤的组织学特性，为治疗提供实验依据。MK可促进瘤周水肿的发展，其机制可能是通过增强一系列血管生长因子的表达，促进脑膜瘤血管形成完成的。
　　
　　目前脑膜瘤的治疗主要以手术切除为主，但对一些位置较深，位于功能区、血供丰富、具有侵袭性，病理分级高的脑膜瘤疗效尚不理想。本实验通过应用免疫组织化学染色的方法，检测出脑脑膜瘤组织中MK蛋白的高表达，提示MK蛋白与微血管密度(MVD)、脑膜瘤血管生成、侵袭性、瘤周水肿及临床病理密切相关，为进一步探讨脑膜瘤血管生成、侵袭性、瘤周水肿及临床病理等生物学行为的作用机制提供了实验依据。但目前对MK蛋白在肿瘤中的表达和确切的调控机制尚不甚清楚，进一步研究MK在脑膜瘤中的表达和其调控机制，从基因水平抑制MK的表达或转录活性［10］，有望为高表达MK的脑膜瘤提供一个新的治疗途径。

参考文献

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