正交试验法优化治伤灵口服液制备工艺

　　　　作者：于波涛，姜云平，张勤，江宗婷，陈冬琴

【摘要】 　　目的 优选治伤灵口服液的最佳提取条件。方法 建立HPLC法测定口服液中芍药苷含量，在单因素试验基础上，以芍药苷含量和干膏收率为指标，按正交表L9(34)设计试验，优化煎煮时间、煎煮次数、加水量及醇沉浓度4个因素。结果 最佳提取工艺为:用8倍量的水煎煮3次，每次1h，醇沉浓度为70%。结论 优选出的提取工艺合理可行。

【关键词】 治伤灵口服液 芍药苷 提取工艺 正交试验 高效液相色谱法

　　Abstract Objective To optimize the extraction process of Zhishangling Oral Liquid.Methods HPLC was applied to determine the content of paeoniflorin， the test was designed according to L9(34) of orthogonal test on the basis of single factor experiment and taking the content of paeoniflorin and dried cream yield as the index， the decocting time， the decocting frequency， water adding and alcohol precipitation concentration were optimized.Results The best extraction condition was gained: decocting for 3 times in 8 timed water， 1 hour each time and the alcohol concentration for precipitation was 70%.Conclusions The optimized extraction process is reasonable and feasible.

　　Keywords Zhishangling Oral Liuid　　 paeoniflorin　　 extraction process　　 orthogonal test　　 HPLC

　　治伤灵口服液是纯中药复方制剂，主要由川芎、赤芍、当归等12 味药材组成，主要功效为活血祛瘀，行气止痛，临床上主要用于瘀血停滞胸中而见胸痛、头痛或呃逆干呕、烦急、心悸失眠等症，该制剂经多年的临床应用，疗效确切。为了便于临床应用，最大限度地保留有效成分，确保临床治疗效果，笔者以正交试验优化原有制剂工艺，以处方中所含有效成分芍药苷含量为评价指标，筛选出合理的提取工艺。现将实验结果报告如下。

　　1 实验部分

　　1.1 仪器与试药 1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)； AE 200型电子天平(瑞士Mettler公司)；药材(购于成都中药材公司，经鉴定符合药典规定)；芍药苷标准品(中国药品生物制品检定所，批号：110736200731)；95%乙醇(成都市蓉康医疗保健实业有限公司，批号：080331)；甲醇为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

　　1.2 方法与结果

　　1.2.1 色谱条件［1］ 色谱柱：Agilent Zorbax SBC18柱(4.6mm×250mm， 5μm)；流动相:甲醇：水(35∶65)；流速: 1.0 ml·min－1；紫外检测波长：λ= 230 nm；柱温30℃。

　　1.2.2 绘制标准曲线 精密称取芍药苷对照品10 mg，置100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液（0.1mg·mL1）。 按上述色谱条件，分别进样对照品溶液2、4、8、10、12、16 μl，记录峰面积（Y），以芍药苷的进样量(X，μg)为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y=1449.9X+8.2337，相关系数r=0.9999。结果表明，在0.2 μg～1.6 μg范围内芍药苷含量与峰面积成良好线性关系。图1为芍药苷的含量测定色谱图。

　　图1 芍药苷色谱图（略）

　　A.标准品；B.阴性对照；C.供试品；

　　Fig 1 HPLC chromatogram of paeoniflorin

　　A.reference substance；B.negative sample；C.sample；1.paeoniflorin

　　1.2.3 供试品的制备 取处方量药材，按传统工艺（水煮三次，分别为3、2、1h）制成口服液。取口服液1ml上D101型大孔吸附树脂柱（层析柱，15mm×200mm，湿法装柱），以每分钟1.5 ml的流速，依次用100 ml水洗柱，继以40%乙醇洗脱，收集洗脱液80 ml，置水浴上蒸干，残渣以上述流动相溶解并定容至10 ml，用微孔滤膜(0. 45μm)滤过， 取续滤液作为供试品溶液。阴性对照溶液的制备与供试品的制备步骤相同，不同点在于处方中不含赤芍。

　　1.2.4 精密度试验 精密吸取对照品溶液， 重复进样5次， 记录峰面积，其相对标准偏差RSD为 0.766%。

　　1.2.5 回收率试验 精密量取已知含量样品共9份，加入适量标准品，测定芍药苷含量。结果详见表1。

　　表1 加样回收率试验结果（略）

　　Table 1 The recovery test of paeoniflorin

　　1.2.6 正交试验设计［3］ 经预试验选择影响提取效果的主要因素:加水量(A)、提取时间(B)、煎煮次数(C)、醇沉浓度（D）作为考察对象，以芍药苷含量为评价指标，每个因素拟定3个水平(见表2)， 选用L9 (34 ) 正交表。取处方量的药材共9份，按表2所列不同条件进行提取，其中当归、川芎、柴胡等药材先提取挥发油8 h后，再将药渣与其他药材合并提取，制成口服液。按“1.2.3”项下步骤制备供试溶液，照上述色谱条件测定芍药苷含量，同时取口服液适量，真空干燥法测定干浸膏，L9 (34 )正交试验设计详见表3，方差分析结果见表4。

　　表2 因素水平表（略）

　　Table 2 Factors and levels

　　表3 正交试验设计与结果表（略）

　　Table 3 Results of orthogonal experiment

　　表4 芍药苷含量方差分析结果（略）

　　Table 4 Analysis of variance

　　注：F0.05（2，2）=19.0，F0.1（2，2）=9.0；note：F0.05（2，2）=19.0，F0.1（2，2）=9.0
　　
　　由表3可知，治伤灵口服液的水提工艺条件以 A2B1C3D3 为佳，即加8倍量水煎煮3次， 每次1 h，醇沉浓度70%，同时提示，影响水提效果的主要因素是醇沉浓度，其次是提取次数和加水量，煎煮时间影响最小，为验证直观分析结果，对实验数据进行了方差分析（表4），醇沉浓度、加水量对水提效果的影响具有十分显著性意义，这与直观分析结论相同。

　　1.2.7 优选工艺的验证试验 按优选的工艺进行验证试验，测得芍药苷的含量分别为 2.806、2.734、2.737 mg·ml1， RSD为1.48%，测得值均优于正交表中的试验结果，认为验证结果较为满意，表明该工艺稳定可行。因此，确认治伤灵口服液的水提醇沉最佳工艺条件为：加8倍量水，煎煮3次， 每次1 h，醇沉浓度70%。

　　2 讨论
　　
　　治伤灵口服液原采用水提三次，分别提取3、2、1 h，而且未提取挥发油。利用正交设计对原有工艺进行优化，确定了最佳工艺，即先将当归、川芎、柴胡等药材进行水蒸气蒸馏提取挥发油，然后将药渣及其他药材合并，以水为溶媒进行煎煮，加8倍药材量的水煎煮3次， 每次1 h，醇沉浓度70%，最佳工艺在验证试验中得到较好的验证，优化后的工艺，不仅节约时间和能源，而且提高制剂的质量，达到预期的目的。

参考文献