PENTRA－120Retic仪器性能评价

　　　　　　作者：胡宗海 胡娟 李丽娟 肖毅

PENTRA－120Retic仪器是法国ABX HORIBA公司生产的全自动五分类及网织红细胞（Reticulocyte ，RET）分析仪器，该仪器对RET还具有多参数性能分析，为临床提供更多有用的参考指标。仪器检验速度快，不做RET时要达每小时检测120份标本，做RET时也可达到每小时检测60份标本，仪器进行检测过程中可进行自动冲洗，仪器性能较优越，传统的网织红细胞检测即RET%和RET#具有参数值单一，不能反映网织红细胞成熟度的缺点，近年来全自动血细胞分析仪、流式细胞术定量分析等自动化分析仪器为网织红细胞计数提供了先进的检测手段和更多的相关参数。运用全自动流式血细胞分析仪测定网织红细胞，可获得网织红细胞百分比(RET%)、网织红细胞绝对数(RET#)、低荧光强度网织红细胞百分比率(LFR)、中荧光强度网织红细胞百分比率(MFR)、高荧光强度网织红细胞百分比率(HFR)等一系列参数(根据红细胞RNA的存在量将细胞的成熟度分为3级)。我科于去年购买了一台该型号的仪器，使用了一年的时间，我们对该仪器的性能特别是其在RET的检测性能方面进行了评价，现将检测结果报告如下。

　　1 仪器与方法

　　1.1 仪器 法国ABXHORIBA公司生产的PENTRA－120Retic，所用各种试剂及质控均为原装进口。煌焦油蓝染液，洁净玻片。

　　1.2 方法

　　1.2.1 精密度试验 取RET质控、患者（高值、低值）健康人全血各一份在仪器上连续测定11次。去除第一个结果后，计算RET%、RET＃、RETL、RETH、RETM、MFI、MRVT等参数的SD、CV值。

　　1.2.2 线性 取2个RET绝对数大于250×109/L的标本，依次用ABX　Diluent稀释液稀释混匀成100%、90%、70%、50%、30%、10%的标本，然后上机检测RET＃2次，取平均值。

　　1.2.3 携带污染率 取高值（RET绝对数大于250×109/L）和低值样本（RET绝对数小于10×109/L）各一份，在自动进样模式下，先测定高值3次（H1、h3、H3），再测定3次低次（L1、L2、L3）；再在手动进样模式下，同样先测定高值3次（H1、h3、H3），再测定3次低次（L1、L2、L3）。按公式：CV%＝［(L1-L3)/(H3-L3)］×100计算携带污染率。比较2种模式下RET%、RET＃的携带污染率的差异。

　　1.2.4 稳定性 取6个标本，包括2个正常标本、2个高值标本（RET绝对数大于250×109/L）和2个低值样本（RET绝对数小于10×109/L），上机检测，然后在24h后，48h后，72h时后再分别上机检测RET%、RET＃、MRV两次，取平均值，计算各组数据的变异系数CV值。

　　1.2.5 相关性 取300份标本，涵盖从低值到高值的样本，有各类贫血、白血病及其他血液病样本来检测，根据《全国临床检验操作规程》［1］的说明，煌焦油蓝法染色后，同手工推片镜下观察，再与仪器检测（每个标本检测2次，取平均值）结果对比，对应参数RET%、RET＃，然后比较两种方法之间有无显著差异。

　　2 结果

　　2.1 精密度 质控和患者高值及低值标本重复检测11次各参数结果的SD值和CV值见表1。
　　　　
　　表1 精密度结果（略）

　　从上表可以看出各组数据的CV值均小于5%，表明PENTRA－120Retic仪器在检测RET各参数的重复性良好。

　　2.2 线性 两个样本分别检测两次的RET＃平均值结果见表2。

　　表2 线性结果（略）

　　经计算两个样本的线性回归系数r=0.99，表明仪器的线性良好。

　　2.3 携带污染率 根据公式CV%＝［(L1-L3)/(H3-L3)］×100计算携带污染率
　　
　　自动模式下RET＃CV%＝1.14%
　　
　　手动模式下RET＃CV%＝0.7%
　　
　　自动模式下RET%CV%＝4.2%
　　
　　手动模式下RET%CV%＝2.8%
　　
　　从以上数据表明PENTRA－120Retic仪器的携带污染率CV值均小于5%，结果良好。

　　2.4 稳定性 高、低及正常值标本分别在0h，24h，48h，72h所测定的RET%、RET＃值的CV%见表3。

　　表3 稳定性试验结果（略）

　　从上表可以看出不同值的标本在不同时间点所测定的RET%、RET＃数据的CV%值均小于5%，表明仪器的稳定性良好。

　　2.5 相关性 RET%、RET＃手工推片镜下观察300份标本，再与仪器检测（每个标本检测2次，取平均值）结果对比，两者RET%结果显著呈正相关(r=0.985)，且结果差异无显著性(P&>0.05)。两者RET#结果显著呈正相关(r=0.975)，且结果差异无显著性(P&>0.05)。

　　3 讨论
　　
　　目前手工法用煌焦油蓝染色，窥盘计数是临床实验室常用方法，但该方法影响因素多，操作复杂且要求检验人员经验丰富，受主观因素影响大。Pentra 120 retic 是法国ABX 公司开发的具有白细胞五分类和网织红细胞分析仪功能的全自动血细胞分析仪器。在网织红细胞分析上，它们采用专利的 ABX RETIXTM 试剂，其含有改良后的噻唑橙 (Thiazole Orange) 荧光染料。试剂和血液样本在 35℃恒温样品杯中孵育约 25 秒，即可使试剂中的荧光染料与网织红细胞内的 RNA 特异性结合，这是作为快速全自动网织红细胞分析的前提条件。ABX Pentra 120 retic 测定网织红细胞的原理和流程是：细胞荧光染色 (ABX 专利试剂 RETIXTM)-通过鞘流阻抗法测定细胞体积-DHSS( 双鞘流 ) 技术激光流式细胞仪 ( 测定 RNA 含量 )。标本进入独特的双壳流池中氩离子激光器发出 488nm的蓝色激光照射到网织红细胞后，细胞内的荧光染料激发出绿色的荧光 (530nm) 仪器通过测定荧光强度来对网织红细胞进行计数和成熟度分析，仪器的最大检测细胞数量可多达 32，000 个细胞。在网织红细胞散点图上，X 轴表现的是细胞体积，Y 轴表现的是荧光强度，因此可以明显将网织红细胞从红细胞中分离出来，而且同样可以根据网织红细胞的成熟程度－细胞内 RNA 含量，将其划分成低含量的较成熟的网织红细胞群、中等成熟网织红细胞和低成熟度的网织红细胞群［2］，因此仪器法计数越来越受到普遍观注，我们对ABX PENTRA 120 retic的多种评价试验分析检测，该仪器对于检测Ret的准确性好、精密度高、操作简便快捷，并能提供较多的Ret相关参数，完全能够满足临床及科研的需要，值得推广。

参考文献