【摘要】目的：探讨肝组织中Chymase（类糜酶）浓度在酒精性肝纤维化中的意义。方法：采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测48例酒精性肝纤维化患者肝组织中Chymase浓度，与28例急性肝炎做对比；用免疫组织化学染色法观察Chymase单克隆抗体标记的肥大细胞分布情况。结果：酒精性肝纤维化患者肝组织中Chymase浓度为17.53±4.39ng/mg，明显高于急性肝炎（2.81±1.03ng/mg）， P&<0.01;免疫组化染色结果，Chymase标记的肥大细胞主要分布于纤维化旺盛的肝细胞周围及中心静脉周围，其分布与纤维化部位相一致，且肝组织中Chymase浓度高的患者，其肝组织内Chymase标记的肥大细胞分布增多。结论：肝组织中Chymase浓度可能与酒精性肝纤维化关系密切。
【关键词】Chymase；酒精性肝纤维化；肥大细胞；纤维化；血管紧张素
Chymase是存在于肥大细胞分泌颗粒中的蛋白酶的一种，它在非血管紧张素转换酶（ACE）途径下， 使血管紧张素Ⅰ（AngⅠ ）转换成血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)。近年，肥大细胞与成纤维细胞的关系受到关注，分泌Chymase的肥大细胞是成纤维细胞的前身，它在间质结缔组织分化。研究报道，Chymase与心肌、肾间质等的纤维化密切相关［1］。以往研究表明肥大细胞与慢性肝病肝纤维化关系密切。酒精性肝纤维化是肝脏在酒精及其初级代谢产物乙醛的慢性持续性损伤作用下，肝脏纤维增生和降解失衡，造成肝细胞外基质（extracellular matrix，ECM）的过度沉积与分布异常的结果［2-3］。本文通过检测肝组织中Chymase浓度，探讨其在酒精性肝纤维化中的意义。
1资料与方法
1.1临床资料
2007年1月-2008年12月住院患者共48例，男41例，女7例，年龄38-68岁（平钧50.34岁）。诊断符合国家标准［4］；对照组为急性肝炎患者28例（急性乙型肝炎18例、戊型肝炎8例、急性药物性肝炎4例），男19例，女9例。全部患者做肝穿取活检。
1.2实验方法
1.2.1用RT-PCR法检测肝组织中Chymae mRNA；
1.2.2肝组织中Chymase浓度的检测采用ELISA法［5］
1.2.3用Chymase单克隆抗体标记Chymase， 行免疫组织化学染色法染色，观察Chymase标记阳性的肥大细胞分布情况。并与HE染色做对比。
1.3统计学处理：采用T检验。
2结果
2.1肝组织中Chymase浓度：酒精性肝纤维化患者肝组织中Chymase浓度为17.53±4.39ng/mg，明显高于急性肝炎（2.81±1.03ng/mg）， P&<0.01。
2.2免疫组化染色与HE染色对比结果，酒精性肝纤维化患者的肝组织，用Chymase单克隆抗体标记的肥大细胞呈棕色，主要分布于肝纤维化旺盛的肝细胞周围及中心静脉周围，并且在小叶内纤维化部位的类洞壁上也可见到Chymase标记阳性的肥大细胞。而且，肝组织中Chymase浓度高的患者，其肝组织内Chymase标记的肥大细胞增多。
3讨论
肥大细胞存在于全身的结缔组织中，其胞内含有很多生理活性物质，当有各种刺激时，肥大细胞即释放这些活性物质。肥大细胞在各种病态的进展，特别是炎症、纤维化的发生与发展过程中起着重要的作用［6］。当肥大细胞与成纤维细胞相互接触或当肥大细胞脱颗粒时，成纤维细胞即发生分裂、增殖，并促进产生胶原［7］。 目前为止，肥大细胞与肝纤维化的关系国外报道很多，文献报道［8］慢性肝炎、酒精性肝病、原发性胆汁性肝炎等，随着肝纤维化的进展，肝组织中肥大细胞分布增多，提示肥大细胞与肝纤维化有关。鉴于Chymase主要存在于肥大细胞内，且Chymase与心肌、肾间质等的纤维化有密切关系，本文探讨了肝组织中Chymase浓度与酒精性肝病肝纤维化的关系。结果，酒精性肝纤维化患者肝组织中Chymase浓度均明显高于急性肝炎(P&<0.01)。酒精性肝病是由于长期大量饮酒所致的肝脏疾病。初期通常表现为脂肪肝，进而可发展成酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化。而急性肝炎很少发生纤维化。用单克隆抗体标记肥大细胞，用免疫组织化学染色法观察肝组织中Chymase标记阳性的肥大细胞，结果发现，酒精性肝纤维化患者Chymase标记的肥大细胞主要分布于纤维组织增生活跃的肝细胞周围及中心静脉周围，并且，肝组织中Chymase浓度高的患者，其肝组织中Chymase标记的肥大细胞分布亦增多，而急性肝炎患者的肝组织内，Chymase标记的肥大细胞非常少见，提示肝组织中Chymase浓度与纤维化关系密切。Shuzi simizu［9］等研究报道，慢性病毒性肝炎肝组织中Chymase浓度升高，且纤维化分期高的（S3+S4）患者，其肝组织中Chymase浓度明显高于纤维化分期低（S1+S2）的患者。Chymase主要存在于肥大细胞，当有炎症等刺激时肥大细胞即脱颗粒，Chymase即被释放到细胞外，它在细胞外使AngⅠ转换成AngⅡ，而AngⅡ可促进血管平滑肌收缩，并促进成纤维细胞的增殖、肥大和游走，并促进产生胶原等细胞外基质［1］，从而促进纤维化的发生。
宋怀宇［10］等采用半定量逆转录PCR法，检测到慢性乙型肝炎、肝硬化肝组织中AngⅡ的Ⅰ型受体（AT1R） mRNA、血管紧张素原mRNA的表达比正常人多，提示人肝组织中局部也可能存在独立的肾素-血管紧张素系统。Yoshiji等［11］新近发现AT1R结抗剂Candesartan可减轻大鼠肝纤维化，降低肝纤维化血清标记物表达水平。本研究结果显示肝组织中Chymase浓度在自身免疫性肝病肝纤维化过程中起着重要的作用，其作用机制有待于进一步研究。
参考文献
［1］Yoshikawa H， Tasaka K. Suppression of mast cell activation by glucocorticoid. Arch Immunol Ther Exp (Wars2) 2000， 48: 487-495
［2］刘涛，黄捷，邓存良.肝星状细胞与肝纤维化［J］.山西医药杂志，2005，34(5):355-357
［3］周明玉，程明亮.TGFβ1刺激肝星状细胞的活化与肝纤维化的研究进展［J］.贵州医药，2008，32(8):751-754
［4］中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组.酒精性肝病诊疗指南［J］.现代消化及介入诊疗，2007，12(4):268
［5］Satomura K，Shimizu S，Nagato T，et al. Establishiment of an assay method for human mast cell chymase［J］. Hepatol Res. 2002;24:361-367
［6］Yoshikawa H， Tasaka K. Suppression of mast cell activation by glucocorticoid［J］. Arch Immunol Ther Exp (Wars2) 2000; 48: 487-495
［7］Ginsburg H， Ben-David E. Mast cell growth on fibroblast monolayers: two-cell entities［J］. Immunology. 1998; 45: 371-380
［8］Farrell DJ， Hines JE， Walls AF， et al. Intrahepatic mast cells in chronic liver disease. Hepatology. 1995; 22: 1175-1181
［9］Shimizu S， Satomura K，Aramaki T，et al. Hepatic chymase level in chronic hepatitis and co-localizition of chymase with fibrosisHepatol Res 2003;27:57-61
［10］宋怀宇，韩丽辉、朱菊人。慢性乙型肝炎、肝硬化患者肝组织中肾素-血管紧张素系统mRNA的表达及意义。中华肝脏病杂志。2004；12（2）：109
［11］Yoshiji H， Kuriyama S， Yoshi J， et al.Angiotensin Ⅱtype 1 receptor interaction is a major for liver fibrosis development in rats. Hepatology. 2001:34:745-747