作者：章婷婷，何天有，王念宏
【摘要】 目的 观察铺灸对佐剂型关节炎(AA)大鼠血清中的白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)的影响，初步探讨其治疗类风湿关节炎的作用机制。方法 将48只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、药物组、铺灸组，每组12只。除空白组外，于右后足跖皮下注射弗氏完全佐剂形成AA大鼠模型，造模3 d后，药物组给予尪痹颗粒治疗，铺灸组给予铺灸治疗。观察大鼠造模前后及治疗后足趾肿胀度(趾围)的变化。治疗结束后股静脉采血，以放射免疫方法检测血清IL-1、TNF-α及IL-10含量。结果 铺灸可减轻AA大鼠足趾肿胀程度，效果优于尪痹颗粒组(P＜0.05)；显著提高AA大鼠血清IL-10水平(P＜0.05)，降低血清IL-1、TNF-α水平(P＜0.05)。结论 铺灸对AA大鼠具有一定疗效，抑制IL-1、TNF-α的产生，提高IL-10水平可能是其机制之一。
【关键词】 类风湿性关节炎；铺灸；白细胞介素-1；肿瘤坏死因子α；白细胞介素-10；大鼠
Abstract：Objective To observe the effect of long snake moxibustion on adjuvant arthritis rats， and explore its mechanism in treating rheumatoid arthritis. Methods Forty-eight Wistar rats were randomly pided into normal control group， model group， drug group and moxibustion group， 12 rats in each group. The model of adjuvant arthritis rats was induced by intracutaneously injection of complete Freud’s adjuvant in the right hind foot pat of rat. Three days later， the medcine group was given Wangbi Keli， and the moxibustion group was treated with long snake moxibustion. The changes of toe swelling was observed， and the content of IL-1， TNF-α and IL-10 in serum were detected by radioimmunoassay (RIA). Results Long snake moxibustion can relieve toe swelling and decrease the level of IL-1 and TNF-α in serum (P＜0.05)， while increase the level of IL-10 in serum (P＜0.05)， its effect was superior than the drug group. Conclusion Long snake moxibustion has therapeutic effect on adjuvant arthritis rats. One of its mechanism may be decreasing IL-1， TNF-α and increasing IL-10.
Key words：rheumatoid arthritis；long snake moxibustion；IL-1；TNF-α；IL-10；rat
类风湿性关节炎(RA)的常见症状是关节肿胀、疼痛、僵硬、畸形和功能受损，可见于任何年龄，致残率高，目前尚无特效治疗方法。灸法是中医传统外治法之一，具有行气活血、温经通络、消肿散结、强壮保健的作用。本研究观察了铺灸对佐剂型关节炎(AA)大鼠血清白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)的影响，初步探讨了铺灸治疗RA抗炎免疫作用的可能机制。
1 实验材料
1.1 动物
健康2～3月龄Wistar大鼠48只，雄性，体重(200±20)g，
由兰州大学动物实验中心提供，动物合格证号：医动字(甘) 14-06号。
1.2 仪器
FT-630G微机多探头γ计数器，北京核仪器厂生产；KDC- 2044低速冷冻离心机，科大创新股份有限公司生产。
1.3 试剂及药物
弗氏完全佐剂(Freund’s Complete Adjuvant，FCA)，批号Lot88H8804，美国Sigma公司生产；尪痹颗粒，辽宁华源本溪三药有限公司生产，批号20040205；艾炷，制成三棱柱形，长约6 cm，宽约2 cm，高约2 cm，每壮3 g；生姜泥：自制；IL-1试剂盒，北京科美东雅生物技术有限公司生产，批号050725；TNF-α试剂盒，北京科美东雅生物技术有限公司生产，批号050725；IL-10试剂盒，北京北方生物研究所生产，批号050907。
2 实验方法
2.1 分组
将48只Wistar大鼠按随机数字表法随机分为空白组、模型组、药物组和铺灸组4组，每组12只，适应性喂养1周。
2.2 造模
参照文献[1-2]方法。先将FCA充分摇匀，模型组、药物组、铺灸组每只大鼠右后足跖皮下注射0.1 mL致炎，空白组每只大鼠右后足跖皮下注射生理盐水0.1 mL。同时参照王氏[3]利用外界寒湿因素制造中医寒湿痹证模型的方法，让大鼠在15～17 ℃冷水中游泳5～7 min，每日1次，连续7 d，加重关节局部病变。
2.3 给药
所有动物在同一条件下(温度16～22 ℃，相对湿度40%～50%)喂养，自由饮水。FCA注射3 d后，铺灸组大鼠剪去大鼠背部体毛(长约8 cm，宽3 cm)，装入自制大鼠固定器，俯卧位固定，从大鼠大椎至后会，包括两侧膀胱经背俞穴(参照林文注主编的《实验针灸学》)，先擦姜汁，长约7 cm，宽约2.5 cm，在其上再放置生姜泥(重约8 g，长约7 cm，宽2.5 cm，厚0.3 cm)，然后用自制的三棱柱形艾炷铺于生姜泥上，进行铺灸(每壮3 g，长约6 cm，宽约2 cm，高约2 cm)，每次3壮，铺灸后，将生姜饼用胶布固定1 h，隔日1次，共8次。药物组大鼠造模3 d后用尪痹颗粒灌胃，所用药量按照动物和人体表面积比例表进行换算[2]，每次给药0.324 g，相当于成人剂量18 g/d，每日1次，连续16 d。空白组、模型组同样条件抓取，但不给予任何治疗。
3 指标测定
3.1 关节肿胀度(趾围)测量
在大鼠右足的固定部位测量其趾围，造模前、造模后、治疗后每只动物各测量2次，取平均值。
3.2 白细胞介素-1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素-10检测
治疗结束后次日所有大鼠股静脉采血，每只大鼠取血3 mL，血清离心后用放射免疫分析法检测IL-1、TNF-α、IL-10含量。
4 统计学方法
所有数据以x±s表示，采用SPSS统计软件处理，用方差分析、Bonferroni、Tamhane’s T2法检验。
5 结果
(见表1、表2)表1 各组大鼠足趾肿胀度(趾围)变化(略)注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05， △△P＜0.01；与药物组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01(下同)表2 各组大鼠血清IL-1、TNF-α、IL-10含量比较（略）
6 讨论
中医应用灸法治疗炎症性疾病具有悠久的历史，古人很早就认识到了灸的重要性，如《灵枢·官能》曰：“针所不及，灸之所宜。”《医学入门》则强调：“凡病药之不及，针之不到，必须灸之”。《千金方》记载，孙思邈用灸法治疗外科炎症或感染多达30余种疾患；现代周楣声在《灸绳》中也记载了灸法治疗中耳炎、腮腺炎、关节炎等多种疾患。
现代研究表明，炎症和免疫密切相关，炎症过程多伴有免疫功能的紊乱和障碍，艾灸对免疫功能的调节有重要作用[4]。RA的确切发病机制目前尚不明确，但在RA患者血清中，炎性细胞因子异常活跃，特别是IL-lβ和TNF-α水平显著升高。IL-1、TNF-α属促炎因子，IL-10属抗炎因子[5]。IL-1具有广泛的免疫调节作用，TNF-α是一种重要的生理性炎症介质， IL-1和TNF-α通常同时合成和分泌，且TNF-α能促进对方的合成。
TNF-α在关节病变中能刺激滑膜细胞和软骨细胞合成前列腺素和胶原酶，引起骨和软骨的吸收破坏，促进成纤维细胞的增生[6]。IL-10是一种天然的免疫抑制剂，可减少致病性促炎症细胞因子和趋化因子，抑制IL-1和TNF-α的产生，同时加强可溶性TNF受体的表达而清除TNF[7]。
实验表明，铺灸能显著减轻AA大鼠足趾肿胀，效果优于中药尪痹颗粒；抑制炎症因子IL-l和TNF-α的产生，显著升高抗炎因子IL-10的水平，这可能是铺灸延缓RA病情的机制之一。
参考文献
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