【摘要】 目的 确定脉络宁注射液最佳水提工艺。方法 采用正交试验法对脉络宁注射液的水提条件进行优选。结果 脉络宁注射液的最佳水提工艺为：加水浸泡0.5 h，加水量分别为药材量的12、8倍，提取时间分别为1.5、1.0 h。结论 该工艺研究为提取液的进一步精制提供了依据。
【关键词】 脉络宁注射液；正交试验；水提工艺
Abstract：Objective To determine the optimum water-extracting technology of Mailuoning injection. Methods The orthogonal test was used to select the water extract technology of Mailuoning injection. Results The best technology was that crude drug was added 12 and 8 times water， then soaked 0.5 h， and extracted for l.5 and 1.0 h. Conclusion The study of technology provides the basis for further purification.
Key words：Mailuoning injection；orthogonal test；water-extracting technology
脉络宁注射液是在著名医方“四妙勇安汤”的基础上，以中医理论为指导，采用西医结合">中西医结合方法研究而成的中药复方注射剂。本方由石斛、金银花、玄参和牛膝组成，具有养阴清热、补益肝肾、活血化瘀的功效，临床上用于治疗各科的血瘀证。其原工艺为水提醇沉，并经乙酸乙酯萃取[1]。本试验在不改变原工艺的条件下，以方中石斛主要有效成分滨蒿内酯含量和提取液中固体含量为质量控制指标，采用正交试验法，对浸泡时间、加水量和提取时间进行考察，以优选脉络宁注射液的最佳水提工艺。
1 仪器与试药
岛津-10A高效液相色谱仪：LC-10ATvp溶剂输送泵、SPD-10Avp紫外-可见检测器、Anastar色谱工作站；TU-1901双光束紫外-可见分光光度计。
石斛、金银花、玄参、牛膝药材购于天津市中药饮片厂。滨蒿内酯对照品由中国药品生物制品检定所提供。甲醇、乙腈均为色谱纯。
2 方法与结果
2.1 提取工艺
按等比例称取石斛、金银花、玄参、牛膝药材粗粉(过1号筛)各150 g，按设计条件进行提取。提取液滤过，合并滤液，备用。
2.2 滨蒿内酯含量测定
2.2.1 检测波长的选定
配制滨蒿内酯甲醇溶液(10 μg/mL)，在200～400 nm波长处扫描，结果λmax＝343，作为检测波长。
2.2.2 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(20∶80)；流速1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：343 nm；进样量：10 μL[2]。
2.2.3 线性关系考察
精密称取滨蒿内酯对照品5.52 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mL于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取不同浓度的对照品溶液各10 μL，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线图，并经计算得回归方程为：Y＝205 852X＋287 166，r＝0.999 9。结果表明，滨蒿内酯在55.2～1 713.7 ng之间呈良好的线性关系。
2.2.4 样品测定
取各实验样品液适量，滤过，作为供试品溶液，进样10 μL，依据上述色谱条件测定滨蒿内酯含量。
2.3 固体含量测定
精密量取各样品液10 mL，置干燥已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于105 ℃干燥3 h，移置干燥器中，冷却30 min，迅速精密称定重量，根据两次重量之差，计算提取液中固体含量[3]。
2.4 工艺优选
以提取液中滨蒿内酯含量和固体含量为考察指标，选用浸泡时间、加水量和提取时间作为考察因素，采用L9(34)正交表进行试验，数据及结果见表1～表3。表1 因素水平表（略）注：药材第1次提取时多加4倍量水，为药材的吸水量 表2 L9(34)正交试验结果（略）注：综合评分K＝(Ai/AI+BI/Bi)×100/2；Ai、Bi分别为提取液中滨蒿内酯含量和固体含量，AI为其中最大值，BI为其中最小值 表3 方差分析表（略）注：F0.05(2，2)＝19.00，F0.01(2，2)＝99.00
试验结果可见，加水浸泡0.5 h，加水量分别为药材量的12、8倍，提取时间为别为1.5、1.0 h，即A2B2C2为最佳水提条件。通过正交试验结果直观分析，由R值可以看出，影响因素由大到小依次为：C＞A＞B。由方差分析结果可以看出，浸泡时间和提取时间对试验指标影响差异有统计学意义，加水量影响较小。
2.5 验证试验
按优选的最佳水提工艺条件制备3批样品溶液，测定样品溶液中滨蒿内酯含量和固体含量，结果见表4。 表4 验证试验结果（略）
通过以上试验结果可知，脉络宁注射液的最佳水提工艺为加水浸泡0.5 h，加水量分别为药材量的12、8倍，提取时间分别为1.5、1.0 h。
3 小结与讨论
本试验采用正交设计，以提取液中滨蒿内酯含量和固体含量为指标，综合考察了脉络宁注射液的水提工艺。经过预试验，提取次数对指标成分影响不明显，本试验采用与临床上一般汤药的提取次数相一致，即2次，避免了提取次数的增加会导致工业化生产上能量的增加。
脉络宁注射液为中药复方制剂，本试验采用难溶于水的滨蒿内酯作为含量考察指标，主要是考虑到石斛作为方中君药，对其主要有效成分滨蒿内酯进行含量测定更具评价意义。由于石斛药材的质量对指标含量影响较大，故投料前应控制药材质量。通过优化试验，筛选出最佳水提工艺，为提取液的进一步精制提供了依据。
【参考文献
】
[1] 中华人民共和国卫生部药品标准(中药成方制剂)[S].第十八册.1998. 245－246.
[2] 李文莉，汪文涛，雷玉萍，等.RP-HPLC法测定脉络宁注射液中滨蒿内酯的含量[J].中草药，2004，35(7)；762－763.
[3] 赵新先.中药注射剂学[M].广州：广东科技出版社，2000.2－3.