【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定不同采收期绿衣枳壳中柚皮苷的含量，确定绿衣枳壳的最佳采收时期。方法 色谱柱为Hypersil ODS C18(4.6 mm×250 mm，25 μm)，柱号1612774，流动相为乙腈-0.1%磷酸(21∶79)，检测波长为283 nm，流速1.0 mL/min。结果 柚皮苷在0.164 4～0.832 0 μg范围呈良好的线性关系，回归方程为Y＝156 681X-84 834(r＝0.999 9)，平均回收率为98.49%，RSD＝2.68%。结论 该方法简便、快速、灵敏、准确、重复性好，可作为枳壳中柚皮苷的含量测定方法。绿衣枳壳宜于6月初－6月中旬采集。
【关键词】 高效液相色谱法；采收期；绿衣枳壳；柚皮苷；含量测定
Key words：HPLC；collect time；fructus ponciri trifoliatae；naringin；content determination
绿衣枳壳属福建省道地药材，因品质优良，长期以来远销我国台湾地区、以及韩国、东南亚各国，是福建省极具发展前途、可用于出口创汇的优质传统药材。然而，植物类药材因其入药的花、叶、根、茎、实的采收季节均有严格的限定，提早或延期采收或采收后不及时进行加工处理，都直接关系到有效成分的含量或变异。本试验选用福建闽候地区不同采收时期的绿衣枳壳药材，通过对不同采收时期的绿衣枳壳中柚皮苷的含量进行比较，确定绿衣枳壳的最佳采收时期。现报道如下。
1 仪器与试药
岛津LC-10AT型双泵高效液相色谱仪，包括CBM-102真空脱气机、LC-10AT泵、SPD-10A检测器。 乙腈(HPLC级，Merck)；其他试剂均为分析纯；水为重蒸水。柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号722-8803)；绿衣枳壳样品(经福建省药品检验所鉴定为Fructus Ponciri Trifoliatae)。
2 色谱条件
色谱柱为Hypersil ODS C18(250 mm×4.6 mm，25 μm，大连依利特科学仪器公司)；流动相为乙腈-0.1%磷酸(21∶79)；检测波长为283 nm；流速为1.0 mL/min；柱温为室温；进样量为20 μL[1-2]。理论塔板数按柚皮苷峰计算应不得低于2 000。色谱图见图1。
3 方法与结果
3.1 对照品溶液的制备
精密称取柚皮苷对照品5.2 mg，置25 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，并从其中精密吸取10.0 mL，加甲醇至刻度，摇匀，即得。制成83.2 μg/mL的对照品溶液。
3.2 供试品溶液的制备
取枳壳药材粉末，取约1 g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚适量，置水浴中加热回流3 h，弃去石油醚液，药渣挥干。再置索氏提取器中，加甲醇适量，水浴加热回流至提取液无色，放冷，移至100 mL量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得[3]。
3.3 线性关系考察
取“3.1”项中的储备液，分别精密量取该储备液0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL于10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀。按上述色谱条件进行测定。以对照品溶液进样量(μg)为横坐标，峰面积的积分值为纵坐标，绘制标准曲线，线性方程为Y＝156 681X－84 834，r＝0.999 9。柚皮苷在0.166 4～0.832 0 μg范围具有良好的线性关系。
3.4 精密度试验
取上述对照品溶液20 μL，连续进样5次，测得柚皮苷峰面积积分值，RSD＝0.47%。结果表明精密度良好。
3.5 重复性试验
取同一枳壳药材约1.0 g，精密称定5份，按上述样品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积积分值，RSD＝2.90%。结果表明该方法重复性良好。
3.6 稳定性试验
取同一批供试品溶液，分别在制备后室温下放置2、6、10、 16、24 h，按上述色谱条件测定峰面积，RSD＝1.93%。结果表明供试品在室温下24 h内基本稳定。
3.7 回收率试验
采用加样回收法，取已知含量的绿衣枳壳约1.0 g(含量1.285 35%)，精密称定，分别精密加入柚皮苷对照品6.4 mg，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积值，计算回收率。结果见表1。表1 绿衣枳壳中柚皮苷回收率测定结果（略）
3.8 样品含量测定
分别取5月中旬、5月底、6月初、6月中旬、6月底采收的绿衣枳壳药材约1.0 g，精密称定，按上述样品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积积分值。结果见表2。表2 不同采收期绿衣枳壳中柚皮苷的含量测定结果（略）
4 讨论
实验室常用枳壳黄酮类成分的提取方法有：甲醇直接回流法、超声波法[4-5]、药典法[6]、索氏提取法[3]，其中索氏提取法提取柚皮苷高达3.47%，效率最高，故选之。
5月采收的绿衣枳壳中柚皮苷的含量明显比6月的低，6月初－6月中旬期间柚皮苷的含量变化不大，6月底柚皮苷的含量有下降的趋势。因此，建议绿衣枳壳宜于6月初－6月中旬采集，在药材收购时应引起注意。
本试验测定不同采收时期绿衣枳壳药材中柚皮苷的含量，方法简单、快速、准确度高、重现性好，结果较为满意。为评价不同采收时期绿衣枳壳的质量提供了依据。
【参考文献
】
[1] 潘 馨.HPLC法测定绿衣枳实中柚皮苷的含量[J].中国药学杂志，2004， 39(4)：317.
[2] 李秀玲，李 龙，肖红斌，等.反相高效液相色谱法测定枳实、枳壳中橙皮苷和柚皮苷的含量[J].色谱，2002，20(6)：585.
[3] 杨武亮，李越峰.枳壳中黄酮提取方法的比较[J].江西中医学院学报， 2005，17(2)：35－36.
[4] 杨文斌.薄层层析-分光光度法测定枳壳中橙皮苷、柚皮苷的含量[J].中国中药杂志，1994，19(6)：359.
[5] 王跃生，罗文毓.薄层扫描法测定青皮、枳实中总黄酮含量研究[J].中国中药杂志，1989，14(4)：230.
[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2000.199.