作者：党海珍 魏品康 庄兴俊 宋远民 姜忠华
【摘要】 ：目的 探讨温中消痰方对寒邪干预S180荷瘤小鼠的影响及对部分相关性指标进行研究。方法 用温中消痰方治疗冰水干预的S180荷瘤小鼠，同时用消痰散结方组及化疗组作为对照，观察温中消痰方治疗后小鼠形态学、肛温的变化及各组肿瘤的生长速度、体积的变化，并用放免法检测小鼠血浆中血栓素B2(TXB2)的表达情况。结果 温中消痰方组动物畏寒的形态学表现较其它组出现晚、历时短，肛温下降幅度较小；温中消痰方组、消痰散结方组、化疗组(FT-207)的抑瘤率分别为86.69%、75.29%、87.55%；温中消痰方组TXB2水平与消痰散结方组、化疗组相近，与寒模组比较差异显著(P&<0.01)，与模型组比较，差异无统计学意义(P&>0.05)。结论 温中消痰方对寒邪干预S180荷瘤小鼠肿瘤的生长有抑制作用，并下调TXB2的表达，其抑瘤率和FT-207、消痰散结方相近。
【关键词】 温中消痰方 消痰散结方 S180小鼠 FT-207 血栓素B2
Abstract：Objective To discuss the influence of Recipe Wenzhongxiaotan to S180 bearing cancer mouse interfered by cold pathogenic factor and study correlation factor index. Methods To treat S180 bearing cancer mouse by interfere in ice water with Recipe Wenzhongxiaotan， with the control of Recipe Xiaotansanjie group and chemotherapy group， the change of morphology and rectal temperature in mouse， growth velocity and volume in tumor after treatment with Recipe Wenzhongxiaotan were observed， and TXB2 in plasma of mouse was detected by RIA. Results It showed late and short in chilly morphology and rectal temperature amplitude small than other groups in Recipe Wenzhongxiaotan group. The rate to restrain tumor growth was 86.69%， 75.29%， 87.55% in Recipe Wenzhongxiaotan group， Recipe Xiaotansanjie group and chemotherapy group (FT-207)， respectively. TXB2 was near in Recipe Xiaotansanjie group and chemotherapy group and the difference was significant compared cold model group (P&<0.01)， and was not statistically significant with model group (P&>0.05) in Recipe Wenzhongxiaotan. Conclusions It may be restrain tumor growth which S180 tumor-bearing mice interfered by cold pathogenic factor and degrade TXB2 in Recipe Wenzhongxiaotan， the rate to restrain tumor growth was near to FT-207 and Recipe Xiaotansanjie.
Key words：Recipe Wenzhongxiaotan；Recipe Xiaotansanjie；S180 mouse；FT-207；TXB2
中医理论认为，恶性肿瘤的发生、发展及临床表现形式与痰有着密切的关系。研究认为，染色体基因发生改变或体细胞内的物质减少或增多，破坏了细胞内之间的平衡与稳定，均可使细胞突变而成为痰浊，痰浊久瘀，终生癌肿。中国人民解放军第401医院肿瘤中心应用消痰散结法治疗肿瘤多年，在改善患者临床症状，提高生存质量，延长生存期等方面具有显著的临床效果。本研究拟从肿瘤发生的病因学入手，结合肿瘤乃“恶痰”的理论，应用温中消痰法治疗“寒邪”干预的荷瘤鼠，观察其形态学及相关指标的变化，探讨确定的病因在肿瘤生长中的作用机制，为中医药抗肿瘤治疗开拓思路。现将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 动物、试剂及药物
昆明种小白鼠60只，雌雄各半，6～8周龄，体重18～22 g，中国医学科学院上海实验动物中心提供[实验动物合格证号为SCXK(沪)2003-0003]。在中国医学科学院上海实验动物中心SPF级动物实验室内饲养[动物使用许可证号：SYXK(沪) 2004-0011]。传代S180腹水型荷瘤小鼠由中国医学科学院上海实验动物中心提供，本组瘤源为第4代。蒸馏水：长征医院药剂科提供。2% EDTA·2Na抗凝：长征医院实验诊断科提供。血栓素B2(TXB2)放免试剂盒：购自苏州医学院血栓止血研究室，批号060826。甲醇冰醋酸固定液、Giemsa染液、伊红染液(HE)均由第二军医大学医学生物细胞教研室提供。温中消痰方：消痰散结方加阿魏、高良姜、干姜等组成；消痰散结方：导痰汤加味，由半夏、胆南星、全蝎、蜈蚣、鸡内金、炙甘草等组成，上方均含原药材2.5 kg/L备用，购自上海市药材公司，道地药材，产地明确，经第二军医大学药学院生药教研室鉴定，长征医院药剂科制备。喃氟啶片：50 mg/片，900 mg/d，2.34 mg/20 g体重，上海医药集团公司华联制药厂，批号060102。
1.2 造模
无菌抽取荷瘤小鼠腹水，用生理盐水稀释至2×1010/L，注射于小鼠左腹股沟皮下，每只0.2 mL，建立移植瘤模型。小鼠按体重随机分为6组：正常组、模型组(生理盐水)、寒模组(0～4 ℃冰蒸馏水)、化疗组(FT-207，0.4 mL/d)、温中方组(温中消痰方)、消痰方组(消痰散结方)，每组10只。除正常组、模型组、化疗组外，各组动物种瘤前１周寒邪干预(各组灌饲0～4 ℃冰蒸馏水，0.2 mL/20 g，1次/d，连续1周)，第2周将S180传代后(4代)实体瘤匀浆后接种小鼠右侧腋下，继续寒邪干预。接种第2天(48 h)后各实验组灌胃给药，寒邪干预组开始给药后上午继续寒邪干预，下午给药；寒模组下午给予生理盐水；化疗组给予喃氟啶2.34 mg/20 g体重，900 mg/d；温中方组、消痰方组给予相应中药，0.4 mL/只，6次/周，连续2周；正常组、模型组常规饲养，自由饮水；各实验组给药浓度按70 kg体重人鼠体表面积换算。第22天，颈椎脱离术处死动物，处死前眼眶取血测TXB2，解剖动物，肉眼观察种植瘤的局部生长情况，取瘤测瘤重、体积，取部分瘤组织用甲醛固定、切片、染色后行病理组织检测。
1.3 动物测温
每日冰蒸馏水灌胃后，以体温计插入小鼠肛门测肛温，每20 min测1次，每次5 min，共测6次。
1.4 S180小鼠血浆血栓素B2的检测
TXB2由第二军医大学神经生物教研室协助测定。
1.5 统计学方法
采用SPSS软件包对小鼠肿瘤瘤重、肿瘤体积、肛温的变化及血浆TXB2含量进行方差分析。
2 结果
2.1 荷瘤小鼠形态学观察
寒邪(0～4 ℃冰蒸馏水)干预2周左右，寒模组小鼠可见耸毛、蜷缩、四肢发冷、耳壳发白，温中方组动物上述畏寒表现较其它组出现晚、历时短，第3周左右，寒模组和模型组动物逐渐消瘦，活动受限，逐渐衰竭，濒临死亡。
2.2 温中消痰方对寒邪干预S180荷瘤鼠瘤重、肿瘤体积及抑瘤率的影响
温中方组、消痰方组、化疗组肿瘤瘤重、肿瘤体积分别与寒模组、模型组相比，统计学差异具有显著性意义(P&<0.01)；消痰方组、温中方组与化疗组相比，无显著性差异(P&>0.05)，温中方组、消痰方组、化疗组的抑瘤率分别为86.69%、75.29%、87.55%。结果见表1。 表1 各组小鼠种植瘤瘤重、肿瘤体积及抑瘤率观察(略)注：与寒模组比较，◆P&<0.01；与模型组比较，▲P&<0.01
2.3 寒邪干预后荷瘤鼠肛温的变化
荷瘤鼠正常肛温平均为37.8 ℃，寒模组灌胃20 min后肛温开始下降，在2 h内肛温平均下降1.5 ℃左右，2 h后恢复正常。温中方组肛温平均下降1 ℃左右，1 h后恢复正常。消痰方组肛温变化与寒模组基本一致。
2.4 寒邪干预对小鼠血浆血栓素B2的影响
寒模组血浆中TXB2的水平明显高于模型组，其中寒模组的TXB2的水平接近模型组、化疗组的1倍；模型组、化疗组、消痰方组血浆中TXB2的水平相比没有明显的差异。结果见表2。表2 各组小鼠肿瘤组织中TXB2水平的变化(略)注：与正常组比较，*P&<0.01；与寒模组比较，#P&<0.01；与温中方组比较，☆P&<0.05
3 讨论
魏品康教授认为，痰浊内阻是胃癌发生的物质基础，消痰散结法是治疗胃癌的有效方法[1]。在消痰散结方治疗肿瘤方面，我们前期做了大量的研究工作。苏氏等[2]用消痰散结方对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成及胃癌组织中血管内皮生长因子表达的影响进行研究，结果提示，其能下调肿瘤细胞血管内皮生长因子的表达。陈氏等[3]在对胃癌组织中P21ras及P185蛋白表达影响的实验中发现，中药组细胞膜上两种癌基因蛋白的阳性表达明显低于对照组。肖氏等[4]观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织及体外培养的胃癌细胞中基质金属蛋白酶表达的影响，结果表明，消痰散结方抑制胃癌细胞浸润转移作用的机理可能与其影响基质金属蛋白酶的表达、减少对细胞外基质和基底膜的降解有关。郭氏等[5]立足于痰浊凝结为癌瘤形成与转移的重要病理因素之一，设计观察了消痰散结方对裸鼠胃腺癌体内生长的抑制作用及其对胃癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响，结果表明，消痰散结方确可抑制胃腺癌细胞的增殖。王氏等[6-7]观察消痰散结方对体外培养的MKN-45人胃癌细胞粘附分子CD44V6、对裸鼠MKN-45人胃腺癌组织中E-Cad表达的影响，结果表明，消痰散结方可以通过对胃癌细胞粘附分子CD44V6、E-Cad表达的影响从而抑制胃癌细胞的转移。
肿瘤的发生，除与环境因素相关外，体质的易感性可能与其发生发展有关。体质是人群中个体在其生长发育过程中形成的代谢、机能与结构上的特殊性。这种特殊性往往决定着其对某种致病因素的易感性及其所产生的病变类型的倾向性。体质最基本的分型为寒体和热体。王氏等[8]研究热药疗寒的差异表达基因，发现热药治疗前“寒证”患者的免疫力降低，生命活动减弱，治疗后患者“寒证”表现明显减轻，生理性基因高表达，对揭示“寒证的本质”作了有益的尝试。在本实验中，寒模组肿瘤瘤重及肿瘤体积均大于模型组，但2组的差异无统计学意义，考虑是样本量太小。实验表明，温中消痰方组及消痰散结方组对肿瘤的生长均有抑制作用，其抑瘤率基本和化疗组相近；其中，温中消痰方的抑瘤率较消痰散结方为高，基本接近化疗组，但统计学比较差异不明显，分析扩大样本量可进一步明确结果。温中消痰方治疗后，小鼠肛温的变化幅度较寒模组、消痰散结方组小，肛温恢复较快，提示针对寒证的病因治疗有一定疗效，与文献[8]的实验结果相一致。
血栓素A2(TXA2)为前列腺素的一种，TXA2主要是由血小板微粒体合成并释放的一种具有强烈促进血管收缩和血小板聚集的生物活性物质，但它的性质极不稳定，代谢为无活性的TXB2，故以此作为定量指标。本实验中，温中消痰方组血浆中TXB2明显下调，与寒模组相比，差异具有显著性(P&<0.01)；与模型组、化疗组、消痰散结方组相比，差异也具有显著性(P&<0.05)；其TXB2含量与正常组相近。研究结果表明，TXB2升高与中医寒证密切相关，模型组TXB2升高说明TXB2与肿瘤的生长有关，其中，温中消痰方能明显抑制小鼠血浆中TXB2的表达，而消痰散结方组、化疗组对TXB2的表达未见明显的调节作用。研究说明，中医针对病因学的抗肿瘤治疗有一定疗效。古代医家治疗肿瘤虽各有主张，但都离不开温中化痰，培补先天和后天。肿瘤的治疗，可以通过扶正使气血旺盛，达化痰除浊之目的以预防和治疗癌肿的发生和发展，也可通过有效地祛除病邪抑制肿瘤发展。
【参考文献】
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[2] 苏晓妹，李 峻，许 玲，等.消痰散结方对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成及胃癌组织中VEGF表达的影响[J].山东中医药大学学报，2003，27(4)：296－297.
[3] 陈亚琳，魏品康，许 玲，等.消痰散结方对胃癌组织中P21ras及P185蛋白表达的影响[J].山东中医药大学学报，2003，27(5)：374－376.
[4] 肖 艳，魏品康，许 玲，等.消痰散结方对胃癌基质金属蛋白酶表达的影响[J].中华实用中西医杂志，2005，18(18)：1035－1037.
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