作者：郭新华 牛卫宁 胡玉霞
【摘要】 ：目的 建立小儿生血颗粒的质量标准。方法 用薄层色谱法对处方中熟地黄、山药、大枣等进行定性鉴别；用紫外分光光度法对处方中硫酸亚铁进行含量测定，检测波长为509 nm。结果 该产品定性鉴别薄层色谱特征明显，专属性强；硫酸亚铁在0.5～2.5 mg/mL范围内呈良好线性关系，r＝0.999 9，平均回收率为101.3%(RSD＝1.48%，n＝5)。结论 所建立的薄层鉴别和含量测定方法准确可行，重复性好，可有效地控制小儿生血颗粒的质量。
【关键词】 小儿生血颗粒 硫酸亚铁 薄层色谱 紫外分光光度法 质量标准
Abstract：Objective To establish a quality standard for Xiaoer Shengxue granules. Method SHU-Dihuang， yam， Chinese data in Xiaoer Shengxue granules were identified by TLC. Ferrous sulfate in the granule was determined by UV with wavelength at 509 nm. Results SHU-Dihuang， yam， Chinese data could be detected by TLC. Ferrous sulfate showed a good linear relationship at the range of 0.50～2.50 mg/mL， r＝0.999 9. The average recovery was 101.3% and RSD was 1.48% (n＝5). Conclusion The method is available with a good reproducibility and can be used for the quality control of Xiaoer Shengxue granule.
Key words：Xiaoer Shengxue granule；Ferrous sulfate；TLC；UV；quality standard
小儿生血颗粒是由《中华人民共和国卫生部标准》中药成方制剂(第14册)收载品种“小儿生血糖浆”改剂型而来，由熟地黄、山药、大枣、硫酸亚铁组成，具有健脾养胃、补血生津之功效，主要用于小儿缺铁性贫血及营养不良性贫血。原小儿生血糖浆标准中无含量测定项，且鉴别项下只有理化鉴别。为了有效地控制小儿生血颗粒质量，本试验建立了熟地黄、山药、大枣的薄层色谱鉴别方法，并建立了紫外分光光度法测定硫酸亚铁含量的方法。
1 仪器与试药
752紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；CP225D电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。硫酸亚铁对照品(批号110613-200301)、熟地黄对照药材(批号121196-200101)、山药对照药材(批号121137-200101)、大枣对照药材(批号1040-9802)，均为中国药品生物制品检定所提供；小儿生血颗粒为本公司自制，批号分别为20040401、20040402、20040403、20050301、20050302、20050303、20050304、20050401、20050402、20050403。所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 薄层色谱鉴别
2.1.1 熟地黄
取小儿生血颗粒样品5 g，研细，加85%乙醇15 mL，超声处理(功率200 W，频率40 kHz)30 min，过滤，取滤液，作为供试品溶液。同时，取按处方同法制备不含熟地黄药材的样品粉末5 g，按供试品溶液制备方法制备，作为阴性样品溶液。另取熟地黄对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取上述对照药材溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-异丙醇-水(4∶5∶6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%苯胺丙酮溶液-2%二苯胺丙酮溶液-磷酸(5∶5∶1)混合液，热风吹至斑点清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。且斑点分离效果好，阴性无干扰。
2.1.2 山药[1]
取小儿生血颗粒样品10 g，研细，加水40 mL，超声处理5 min，溶解并混匀，加乙醚振摇提取3次，每次40 mL，合并乙醚液，挥干，残渣加无水乙醇0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。同时取按处方同法制备不含山药的样品粉末10 g，按供试品溶液制备方法，同法制成阴性样品溶液。另取山药对照药材4 g，加水煎煮，放冷，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液各8 μL，对照药材溶液6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮(10∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。且斑点清晰，分离效果好，阴性无干扰。
2.1.3 大枣
取小儿生血颗粒样品8 g，研细，加70%乙醇40 mL，超声处理20 min，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加水15 mL使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇5 mL提取，取正丁醇溶液作为供试品溶液。同时取按处方同法制备不含大枣的样品粉末8 g，按上法制成阴性样品溶液。另取大枣对照药材8 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液各6 μL，对照药材溶液4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水(3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%茚三酮丙酮溶液，105 ℃加热数分钟，放置12 h。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的红色斑点。且斑点清晰，分离效果好，阴性无干扰。
2.2 含量测定[2]
2.2.1 溶液的制备
精密称取硫酸亚铁对照品1.260 00 g，置25 mL容量瓶中，用醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.2)溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品贮备液(0.050 4 g/mL)。精密称取小儿生血颗粒样品(批号20040401)2 g，置100 mL量瓶中，用醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.2)稀释至刻度，超声处理5 min，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。取按处方同法制备不含硫酸亚铁的样品2 g，按供试品溶液制备方法，制成阴性样品溶液。
2.2.2 检测波长的选择
精密量取对照品贮备液(0.050 4 g/mL) 3 mL，置100 mL量瓶中，精密加入0.3%邻菲罗啉溶液2 mL，用醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.2)溶解并稀释至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白。照分光光度法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅤB]，在400～760 nm范围内进行扫描，结果该溶液在509 nm处有最大吸收，故选择509 nm作为检测波长。
2.2.3 线性关系的考察
精密吸取对照品贮备液(0.050 4 g/mL) 1、2、3、4、5 mL，分别置100 mL量瓶中，精密加入0.3%邻菲罗啉溶液2 mL，用醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.2)溶解并稀释至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白。照分光光度法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅤB]，在509 nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，硫酸亚铁的浓度(mg/mL)为横坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y＝0.406 3X＋0.026 6(r＝0.999 9)。结果表明，硫酸亚铁在0.5～2.5 mg/mL范围内具有良好的线性。
2.2.4 精密度试验
精密吸取对照品贮备液(0.050 4 g/mL) 3 mL，置100 mL量瓶中，精密加入0.3%邻菲罗啉溶液2 mL，用醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.2)溶解并稀释至刻度，摇匀，以相应的试剂为空白。照分光光度法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅤB]，在509 nm波长处测定吸收度。结果吸收度RSD＝0.23%(n＝6)，表明仪器精密度良好。
2.2.5 稳定性试验
精密量取供试品溶液(批号20040401) 3 mL，自精密度试验下“置100 mL量瓶中”起，同法操作，于配制后0、1、2、4、8、24 h依法测定硫酸亚铁吸收度。结果RSD＝0.94%(n＝6)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.2.6 重复性试验
取小儿生血颗粒样品(批号20040401)2 g，共5份，分别按供试品溶液制备方法制备，自精密度试验下“置100 mL量瓶中”起，同法操作，计算硫酸亚铁含量。结果硫酸亚铁含量RSD＝0.32%(n＝5)，表明测定方法重复性良好。
2.2.7 阴性干扰试验
精密量取阴性样品溶液3 mL，自精密度试验下“置100 mL量瓶中”起，同法操作。结果阴性样品溶液在509 nm处未见吸收，故认为无干扰。
2.2.8 回收率试验
采用加样回收法。精密称取已知含量的样品(批号20040401，含量25.04 mg/g)1 g，共5份，分别精密加入硫酸亚铁对照品溶液(浓度5.011 mg/mL)5 mL，置100 mL量瓶中，用醋酸-醋酸钠缓冲液(pH 4.2)稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取3 mL，自精密度试验下“置100 mL量瓶中”起，同法操作，计算回收率。结果表明，回收率大于95%，RSD&<2%，表明本法测定硫酸亚铁回收率良好。见表1。表1 回收率试验结果（略）
2.2.9 样品测定
分别精密称取10批样品各2 g，按供试品溶液制备方法制备，并依法测定吸收度，计算硫酸亚铁含量，结果见表2。表2 样品中硫酸亚铁含量测定结果(略)
3 讨论
按本品处方比例及制备工艺分别制备的不含熟地黄、山药、大枣的阴性样品，并按相应供试品溶液制备方法，同法制成阴性样品溶液，与相应的供试品溶液、对照药材溶液同板进行薄层色谱试验。结果表明，各阴性样品均在与相应药材同一位置上无相同斑点显示，该3味药的鉴别方法具有专属性。
2005年版《中华人民共和国药典》(一部)中熟地黄[3]、大枣[3]项下收载的薄层色谱鉴别方法，是对该两味药中脂溶性成分5-羟甲基糠醛及齐墩果酸的鉴别；山药[3]项下未收载薄层色谱鉴别方法。而小儿生血颗粒中，该3味药的工艺为水煮，5-羟甲基糠醛及齐墩果酸很难提出。经多方摸索，确定了正文中此3味药的薄层色谱鉴别方法。
在大枣的薄层色谱鉴别试验中，发现喷过显色剂后，放置时间对斑点显色影响较大，经考察，确定喷显色剂，加热后放置12 h，结果斑点清晰，分离效果好。
在山药的薄层色谱鉴别过程中发现，样品中山药的产地不同，斑点和分离效果不同，建议在制剂投料过程中严格控制山药来源。
硫酸亚铁的含量测定
参考文献
[2]方法，结果重复性好，回收率在95%～105%之间，RSD%均小于2%。表明该法适用于小儿生血颗粒中硫酸亚铁的含量测定。参考文献
[1] 陆 华.肾泰脾康颗粒质量标准研究[J].中成药，2003，25(10)：799.
[2] WS3-214(Z-0281)-2001(Z)，益中生血片.国家食品药品监督管理局国家药品标准：新药转正标准(第32册)[S].67.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.83，16，21