同型半胱氨酸水平升高对冠心病的影响

　　　　　　作者：鲁洋 李淑梅 张小昊 吴迪

【关键词】 同型半胱氨酸；冠心病；影响

近年来国内外大量研究已经证实，血中同型半胱氨酸（HCY）升高是冠心病新的独立危险因素，HCY浓度的升高增加了罹患冠心病的危险性，并增加不良事件发生的几率，但HCY浓度正常高值对冠心病的发生是否有影响，目前未见这方面的报道。本研究主要探讨HCY在正常范围内升高与冠心病的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象 2006年3月至2006年10月在我院心内科住院的病例资料完整的患者53例，其中男34例，女19例。所有患者均行冠脉造影检查且HCY浓度在正常范围内。排除肝、肾衰竭、甲状腺功能低下、恶性贫血、急性淋巴性白血病，癌症（如乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌）；半年之内未服用维生素、叶酸等影响血中HCY浓度的药物〔1〕。根据造影结果，将无狭窄或狭窄<50％者共30例确定为对照组；将左冠脉主干（LM）、左前降支（LAD）、左回旋支（LCX）及右冠脉（RCA）中至少一支狭窄>50％者共23例确定为冠心病组。再将冠心病组分为1支病变组（LAD、LCX、RCA中有1支病变），11例；2支病变组（LAD、LCX、RCA中有2支病变或LM病变者均为2支病变组），5例；3支病变组，（LAD、LCX、RCA中有3支病变或LM病变同时合并RCA病变归为3支病变组），7例。

　　1.2 研究方法 受检患者清晨空腹抽取外周静脉血4 ml，加入2％乙二胺四乙酸（EDTA）Na2 0.5 ml抗凝，2 h内离心（5 000 r/min，4℃，10 min），分离血清，－20℃保存备用。采用酶联免疫分析法(ELASA)〔2〕进行测量。使用ELASA试剂盒（美国华盛顿TIP公司生产），操作步骤按试剂盒说明书进行。测双孔OD值，结果取两孔的平均值绘制标准曲线。
　　
　　将样品（血清）稀释101倍（5 μl血清加500 μl样品稀释液），标准品不稀释（已稀释101倍）。分别加入10 μl标准品、已稀释血清于反应板孔中。空白孔内加入10 μl样品稀释液。每孔加入100 μl酶联免疫物，轻混匀30 s。水浴箱25℃温浴1 h。甩尽板内液体，用洗涤液洗涤反应板，并除去水滴（在厚叠吸水纸上拍干）；这样反复洗涤5次。每孔加入100 μl 四甲基联苯胺（TMB）显色液，轻轻混匀10 s，水浴箱25℃温育20 min。每孔加入100 μl终止液。轻轻混匀30 s；确定蓝色变为黄色。30 min内在450 nm处读OD值。标准品OD值取相同浓度两孔的平均值，得出标准品与HCY浓度对应的数据，见表1。以标准品的OD值为纵坐标（y轴），以标准品HCY浓度（μmol/L）为横坐标（x轴），绘制标准曲线。见图1。
　　
　　根据两点求直线得出每段的直线方程：
　　
　　①y=1.158x （OD≤0.142）
　　
　　②y=0.082x+0.068 (0.142＜OD≤0.216)
　　
　　③y=0.143x-0.042 (0.216＜OD≤0.602)
　　
　　④y=0.108x+0.116 (0.602＜OD≤1.088)
　　
　　⑤y=0.0756x+0.4072 (1.088＜OD≤1.768)
　　
　　⑥y=0.054x+0.796 (OD＞1.768)　　根据血清样品的OD值所在范围找出其对应的直线方程，计算出其HCY浓度（根据Y值求出X值，即为HCY浓度）。

　　
　　HCY浓度参考值：5～15 μmol/L。本试剂盒灵敏度：0.2 μmol/L。

　　表1 标准曲线数据（略）

　　图1 标准曲线图（略）

　　1.3 统计学处理 采用SPSS11.0软件，计量资料以x±s表示，比较用方差分析及t检验，计数资料比较用χ2检验。

　　2 结果
　　
　　当HCY浓度在正常范围内时，冠心病患者的HCY水平（6.325±4.430） μmol/L明显高于对照组（3.756±3.722） μmol/L（P<0.01）。0、1、2、3支病变组HCY浓度呈递增趋势〔分别为(3.756±3.722) μmol/L、(4.223±3.756) μmol/L、(9.778±3.229) μmol/L、(10.153±4.753) μmol/L〕。其中2支病变组、3支病变组与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01），1支病变组与对照组比较无统计学意义。

　　3 讨论
　　
　　近年来有大量研究已经证实，血中HCY升高是冠心病新的独立危险因素〔3〕。Boushey等〔4〕指出普通人群冠心病的危险性10％的原因是HCY，冠心病的危险性随着血中HCY浓度的增高相应增加。Nygard等〔5〕对587例冠脉造影确诊为冠心病的患者血清中HCY的浓度进行了测定并进行了随访（平均随访时间为4.6年），其中10.9％的患者死亡，指出HCY与死亡率密切相关。李秀昌等〔6〕指出不同类型的冠心病患者血清HCY水平有差异，血清HCY水平升高是促使急性心肌梗死发生的可能因素。Stampfer等〔7〕测定了14 916例没有动脉粥样硬化的正常人的血清HCY浓度，并随访5年，其中HCY浓度高于正常上限的，即使在其他危险因素得到控制以后，其发生心肌梗死的危险性仍是正常水平的3倍。
　　
　　本试验对HCY浓度正常(即HCY<15 μmol/L)的病例进行了分析。结果发现当HCY浓度在正常范围内时，冠心病患者HCY水平明显高于对照组，其中2支、3支病变组与对照组比较有统计学意义，1、2、3支病变组HCY浓度呈递增趋势。说明即使血中HCY在正常值范围内的升高也加大了患冠心病的危险。所以不仅要重视高HCY在冠心病的发生发展中起到的作用，也应该重视HCY在正常水平内升高对冠心病的影响，因为这种潜在的影响往往更容易被人们忽视。HCY的代谢与维生素B族有密切关系，有研究表明冠心病患者血HCY的浓度高于正常人，而叶酸、维生素B6的浓度低于正常人〔8〕，叶酸、维生素B6和B12可有效降低血中HCY的浓度，人补充叶酸和维生素B6后，心脏病发病率降低近一半〔9，10〕。虽然HCY确切的致病机制尚不完全清楚，但通过服用维生素类药物可有效降低血中HCY水平，预防冠心病及其不良事件的发生。

参考文献

　1 马景德，齐秀芬.同型半光氨酸的生物化学及其与动脉粥样硬化的关系〔J〕.中国医学检验杂志，2002；3（5）:2968.

　　2 冯庚臣，蔡艳红.血浆同型半光氨酸的测定方法及临床应用〔J〕.齐鲁医学检验，2005；16（3）:389.

　　3 Guba SC，Fink LM，Fonseca V.Hyperhomocysteinemia.An emerging and important risk factor for thromboembolic and cardiovascular disease〔J〕. AM J Glin Pathol，1996；106（6）:70922.

　　4 Boushey CJ，Beresford SA，Omenn CS，et al.A quantitative assessement of plasma homocysteine as a risk factor for vascular disease〔J〕.JAMA，1995；274（13）:104957.

　　5 Nygard O，Nordrehaug JE，Refsum H，et al.Plasma homocysteine levels and mortality in patients with coronary artery disease〔J〕.N Engl J Med，1997；337（4）:2306.

　　6 李秀昌，付善基，胡燕燕，等.血清同型半胱氨酸水平与冠心病严重程度相关性的探讨〔J〕.山东医科大学学报，2001；39（4）：3013.

　　7 Stampfer MJ，Malinow MR，Willett WC，et al.A prospective study of plasma homocyst（e）ine and risk of myocardial infarction in US physicians〔J〕.JAMA，1992；268（7）:87781.

　　8 Welch GN，Loscalzo J.Homocysteine and atherothrombosis〔J〕.N Engl J Med，1998;338(15):104250.

　　9 Robinson K，Arheart K，Refsum H，et al.Low circulating folate and vitamin B6 concentrations risk factors for stroke，peripheral vascular disease，and coronary artery disease〔J〕.Circulation，1998;97(5):43743.

　　10 Rimm EB，Willett WC，Hu FB，et al.Folate and vitamin B6 from diet and supplements in relation to risk of coronary heart disease among women〔J〕.JAMA，1998；279（5）:35964.