谷胱甘肽S转移酶在胃肠腺癌和乳腺癌中表达的临床意义

　　　　 作者：李海峰 张晓丽 王晓寅 薄爱华

【关键词】 胎盘型谷胱甘肽S转移酶；胃腺癌；大肠腺癌；乳腺癌；免疫组织化学

谷胱甘肽转移酶（GST）有5个亚型，其中胎盘型GST（GSTπ）占90%左右，在上皮肿瘤内表达较高，而且GSTπ高表达与肿瘤发生和耐药有密切关系〔1～3〕，因此GST被称为肿瘤标志物或耐药相关基因。目前关于GSTπ在上皮性肿瘤表达的报道不多，本文采用SP免疫组织化学技术，检测了胃肠腺癌和乳腺癌中GSTπ的表达，分析了GSTπ过表达与癌细胞生物学特性的关系和导致肿瘤耐药机制，旨在为临床治疗提供依据。

　　1 对象与方法

　　1.1 病例资料

　　2004～2007年我院肿瘤外科及张家口市第五医院手术切除的胃腺癌64例，其中，男40例，女24例，年龄30～79（平均53.5±21.4）岁；大肠癌66例，男49例，女17例，年龄32～84（平均58±16.7）岁，平均年龄58岁；乳腺癌84例，全部女性，年龄27～71（平均49±21.8）岁。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 切片制作

　　将新鲜标本固定于10%中性甲醛中过夜，常规乙醇梯度脱水，二甲苯透明和石蜡包埋，连续切片厚度5 μm。部分切片常规HE染色，用于病例诊断。其他切片37℃温箱储存待染。

　　1.2.2 免疫组化染色

　　第Ⅰ抗体为兔抗人GSTπ血清，由美国MAXIM公司生产；链霉素抗生物蛋白过氧化物酶连接法（SP）免疫组化试剂盒及二氨基联苯胺（DAB）显色剂均由北京中山生物技术公司购入。免疫组化染色程序严格按照试剂盒规定操作，阴性对照采用PBS代替一抗，阳性对照为已知食管癌GSTπ阳性切片。

　　1.3 阳性结果判定

　　凡切片在高倍视野（×400）阳性细胞超过5%者即为阳性病例，否则为阴性病例。

　　1.4 统计学处理

　　组间比较采用χ2检验。

　　2 结 果

　　GSTπ阳性物质呈棕黄色分布在细胞质中，细胞核不着色，间质细胞和纤维有非特异性着色为浅黄色或无色。GSTπ在胃腺癌，大肠癌和乳腺癌中的阳性率分别为68.75%（44/64），68.18%（45/66）和71.34%（60/84），三者GSTπ阳性率无明显差异，它们与癌组织病理类型，分化程度和有否淋巴结转移的相关性，见表1、表2。表1 GSTπ与胃肠腺癌组织生物学特性的关系〔n(略)〕表2 GSTπ与乳腺癌组织生物学特性的关系〔n(略)〕

　　3 讨 论

　　胃肠癌，乳腺癌术后化疗治疗是综合治疗的重要措施，然而由于许多患者因癌细胞的耐药性，导致化疗效果不够理想，如何提高化疗效果，首先应当了解各个患者癌组织中多药耐药相关基因蛋白的表达状况，其中GSTπ是胃肠癌，乳腺癌中阳性率较高的耐药相关基因蛋白〔4，5〕，因此GSTπ在癌细胞中表达高低，直接影响化疗方案的决择。

　　GSTπ是Mannervik研究所1979年从胎盘中分离出来的一种酸性蛋白质，它是一组多功能二聚体，广泛地分布在哺乳类、鸟类、昆虫和植物中〔6〕。在人体内也广泛地分布在多种器官的上皮细胞中，参与细胞排毒和解毒功能，被誉为Ⅱ期解毒酶，对人体有保护功能。当肿瘤发生时，GSTπ基因激活，GSTπ表达增多（含量增高），使肿瘤细胞产生耐药性。GSTπ增高导致肿瘤耐药的机制可能有以下几个方面：①能把抗癌药物产生的过氧化物还原为无毒物质。②抑制烷化剂等亲电学性化疗药物引起的癌细胞的DNA交联，从而降低化疗药物对细胞的杀伤作用。③GSTπ不仅可催化亲电物质与谷胱甘肽结合，而且本身可以与亲脂性细胞毒药物结合，并增加其水溶性，促进其代谢，从而降低抗癌药物的细胞毒作用。GSTπ表达越强，化疗药物毒性作用降低越明显，肿瘤细胞对化疗的药物的耐受性就越强。Huang等〔7〕研究表明，GSTπ阳性乳腺癌相对GSTπ阴性者更具侵蚀性及更差的预后。

　　本实验表明在胃癌，大肠癌和乳腺癌GSTπ均有较高表达，其阳性率分别为68.75% 68.18%和71.34%。GSTπ过表达与肿瘤组织的病理类型相关性不明显。在胃肠癌分化低组和有转移组阳性率高，并且与无转移组比较差异有显著性（P＜0.05），在乳腺癌内临床分期高（Ⅲ期）组和有淋巴结转移组阳性率高于Ⅰ期和无转移组（P＜0.05），说明GSTπ高表达和癌瘤恶性度高和预后差有相关性。马兴久〔8〕报告乳腺癌中GSTπ阳性组5年生存率低于阴性组，Ⅲ期组GSTπ阳性率高于Ⅰ、Ⅱ期组。本实验与之类似。关于GSTπ过表达与化疗药物选择的相关性也有实验报告〔5，9，10〕，GSTπ高表达的胃癌、大肠癌及卵巢癌患者，表现了对烷化剂和蒽环类药物耐药性高，因此提示GSTπ高表达不仅与原发性多药耐药有关，而且可能与获得性耐药也有一定关系。

参考文献

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　　7 Huang J，Tan PH，Thiyagarajan J，et al.Prognostic significance of glutathione Stransferasepi in invasive breast cancer〔J〕.Mod Pathol，2003；16:55865.

　　8 马兴久.PgP，GSTπTopoⅡ在乳腺癌组织中的表达及其预后的关系〔J〕.山东医药，2005；45（7）：467.

　　9 陈慧君，吴绪峰，陈蕙祯.TopoⅡ、GSTπ、PgP在卵巢癌化疗耐药中的作用〔J〕. 肿瘤防治研究，2006；33（3）：197200.

　　10 余 震，龚建平.肿瘤抑制基因和耐药基因在肿瘤化疗的应用进展〔J〕.浙江临床医学，2004；6（8）：7323.