Bcl2和血管内皮生长因子在乳腺癌中的表达及其临床意义

　　　　　　作者：张晓丽 李建春　薄爱华 牛书雷

【关键词】 Bcl2;血管内皮生长因子;乳腺癌

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率居女性恶性肿瘤之首。乳腺癌的发生发展受多基因的调控，但其生物学特性至今尚未清楚。目前已发现癌基因的激活与抑癌基因的失活等因素与乳腺癌有关，进一步研究这些因素在乳腺癌的表达及相互作用，对揭示乳腺癌发生防治的机制有着重要的意义。本实验采用免疫组织化学方法检测乳腺良恶性肿瘤基因的表达情况，并探讨其临床意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 临床资料 于2005年1月至2007年8月间，收集河北北方学院附属第一医院肿瘤科，中医院外科，第五医院外科手术切除乳腺腺瘤标本24例，年龄18～51岁，平均(31.80±18.69)岁，乳腺癌标本55例，年龄32～72岁，平均(55±10.73)岁。病例均为女性。

　　1.2 切片制备 将新鲜标本固定于10%中性福尔马林(24 h)，常规梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续切片，厚度5 μm。其中部分切片用于苏木素尹红(HE)染色和病理诊断，另一部分切片37℃储存，待进行免疫组织化学染色。

　　1.3 免疫组织化学染色 鼠抗人血管内皮生长因子、Bcl2、兔抗人血管内皮生长因子(VEGF)抗体购自武汉博士德生物有限公司，SP免疫组化试剂盒DAB显色剂均购自北京金杉生物公司，染色程序严格按照试剂盒规程操作，阳性对照为已知Bcl2和VEGF阳性乳腺癌切片，阴性对照用PBS液代替一抗。

　　1.4 结果判定 Bcl2、VEGF 阳性细胞均为棕黄色，前者分布于胞浆和核膜上，后者分布于胞浆中。10个高倍视野阳性细胞超过5%者为阳性病例;阳性细胞少于5%者为阴性病例。

　　1.5 统计学处理 组间比较采用χ2检验，相关性分析采用四格列表法。

　　1.6 结果 Bcl2 基因表达产物阳性染色位于细胞胞浆和胞膜中，呈棕黄色颗粒，而 VEGF 成黄色颗粒，胞浆着色。Bcl2、VEGF在乳腺腺瘤中阳性率为45.83%(11/24)和29.17%(7/24)，明显低于乳腺癌中阳性表达率〔分别为72.73%(40/55)和56.36%(31/55)〕(P<0.05)。在乳腺癌中，Bcl2和VEGF在有淋巴结转移组阳性率分别为 82.86%(29/35)和61.76%(21/34)，明显高于无淋巴结转移组〔55%(11/20)和38.10%(8/20)〕(P<0.05);在乳腺浸润性癌中阳性率分别为76.19%(32/42)和60%(24/40)，与非浸润性癌的阳性率〔分别为61.54%(8/13)和22.86%(7/15)〕无差异;在≤45岁组阳性率分别为68.78%(11/16)和50%(8/16)与46～59岁组〔76.76%(23/30)和61.29%(19/31)〕和≥60岁组〔66.67%(6/9)和50%(4/8)〕无差异(P>0.05)。Bcl2和VEGF在乳腺癌中的表达经4个列表统计分析处理无明显相关性(P>0.05)。

　　2 讨 论

　　研究表明凋亡和血管生成在人类肿瘤的发生、发展和转移过程中起重要的作用〔1，2〕。在肿瘤的发生发展过程中，不仅伴随着细胞异常增殖，而且与正常的细胞凋亡缺陷有关，Bcl2基因就是一种抗细胞凋亡基因，它通过变更或移位表达增强〔3〕，表达产物抑制各种理化因素所诱发的细胞凋亡。国外研究发现Bcl2基因产物在胃癌、肾癌、乳腺癌、淋巴造血组织及神经胶质瘤中均有表达〔4〕。 本实验提示Bcl2在基因水平参与肿瘤发生过程，且其发生与年龄和病理类型无相关性，而与腋窝淋巴结转移有相关，提示可能与肿瘤进展及预后有关。

　　肿瘤的生长、转移和预后受多种因素的影响，其中重要因素之一是肿瘤组织内新血管生成，它是肿瘤生长和转移的形态学基础，不仅向肿瘤提供充分的营养，同时也向机体输出肿瘤细胞，导致恶性肿瘤的发生和转移〔5〕。VEGF是重要的血管生成因子之一，是刺激肿瘤形成的最关键因子，在肿瘤形成过程中发挥核心作用。VEGF能促进血管内皮细胞的有丝分裂，增加血管渗透性并具有旁分泌和自分泌功能〔6〕。乳腺癌转移主要通过淋巴系统，淋巴结受累程度是本病的一个关键性预后因子。陈雪松〔7〕等研究表明，VEGF在乳腺癌中呈高表达，与患者年龄和病理类型无关，而与淋巴结转移呈正相关。提示VEGF与乳腺癌淋巴结转移密切相关，可能成为预后判断指标。

　　Pidgeon等〔8〕在研究人和鼠的乳腺癌细胞中发现，VEGF不仅促进血管生成，使血管的通透性增加，而且还是肿瘤细胞生存因素。Biroccio等〔9〕研究发现肿瘤细胞Bcl2的过表达及缺氧，在调节VEGF表达是有协同作用，可促进乳腺癌新血管生成。VEGF能够上调Bcl2基因的表达从而抑制肿瘤细胞凋亡，间接促进肿瘤细胞增殖和增长〔10〕，二者高表达对癌细胞生长转移有明显促进作用。本组实验表明Bcl2和VEGF二者之间无明显相关性，但在乳腺癌中阳性表达率均显著高于良性肿瘤。Bcl2和VEGF水平升高是乳腺癌发生、发展和转移的重要原因，检测Bcl2和VEGF含量对乳腺癌患者的复发转移判定及疗效观察具有重要的临床意义。

参考文献

　1 Fauvet R，Dufournet C，Poncelet C，et al.Expression of proapoptotic(p53，p21，bax，bak and fas) and antiapoptotic(bcl2 and bclx) proteins in serous versus mucinous borderline ovarian tumors〔J〕.J Surg Oncol，2005;92(4):33743.

　　2 Konno H，Ohta M，Baba M，et al.The role of circulating IL8 and VEGF protein in the progression of gastric cancer〔J〕.Cancer Sci，2003;94(8):73540.

　　3 Molto L，Rayman P，PaszkiewiczKozik E，et al.The Bcl2 transgene protects T cells from renal cell carcinomamediated apoptosis〔J〕.Clin Cancer Res，2003;9(11):40608.

　　4 Kim R，Emi M，Matsuura K，et al.Therapeutic potential of antisense(AS) Bcl2 as a chemosensitizer for patients with gastric and breast carcinoma〔J〕.Gan To Kagaku Ryoho，2005;32(11)：15405.

　　5 王仁启，孔凡明.BAG1和VEGF在乳腺癌组织中的表达及其临床意义〔J〕.实用癌症杂志，2005;20(4)：3514.

　　6 赵百秋，王国华，李雪岩.血清中VEGF、TSGF在乳腺癌中的表达及其临床意义 〔J〕.黑龙江医药科学，2006;29(3):489.

　　7 陈雪松，赵艳滨，蔡 莉，等.血管紧张素Ⅱ受体1、 VEGF和MVD在乳腺癌中的表达及相关性研究〔J〕.现代生物医学进展，2007;7(6)：86871.

　　8 Pidgeon GP，Barr MP，Harmey JH，et al.Vascular endothelial growth factor (VEGF) upregulate Bcl2 and inhibits apoptosis in human and murine mammary adenocarcinoma cells〔J〕.Br J Cancer，2001;85(2):2738.

　　9 Biroccio A，Candiloro A，Mottolese M，et al.Bcl2 overexpression and hypoxia synergistically act to modulate vascular endothelial growth factor expression and in vivo angiogenesis in a breast carcinoma line〔J〕.FASEB J，2000;14(5)：65260.

　　10 薄爱华，芦广萍，闫爱春，等.EGFR和VEGF在乳腺癌中表达的临床意义〔J〕.中国肿瘤临床，2007;34(23)：13246.