肾细胞癌患者手术治疗前后T淋巴细胞亚群的变化

【摘要】 目的 研究肾细胞癌患者手术治疗前、后外周血T淋巴细胞亚群的变化规律，为了解病情、判断预后提供免疫学依据。方法 应用流式细胞术分别检测肾细胞癌患者手术治疗前、后外周血CD4、CD8、CD3阳性T淋巴细胞百分率，并与正常对照组进行对比研究。结果 肾细胞癌患者手术前CD3+、CD4+T细胞明显低于正常对照组，CD8+T细胞明显高于正常对照组，CD4/CD8比值倒置；肾细胞癌患者手术后CD3+、CD4+T细胞较术前明显升高，CD4/CD8比值恢复正常。结论 肾细胞癌患者手术治疗前T淋巴细胞百分率异常，存在细胞免疫功能紊乱现象；手术治疗后有效去除瘤负荷，免疫功能得以逆转。

【关键词】 肾细胞癌；细胞免疫；T淋巴细胞亚群

有文献报道，恶性肿瘤病人T淋巴细胞存在一定的变化特征，其中CD+4/CD+8的比值是反映机体免疫功能紊乱的敏感指标〔1〕。本文对经病理确诊的肾细胞癌病例在治疗前、治疗后进行T淋巴细胞亚群动态分析，以期阐明在不同临床阶段T淋巴细胞亚群的变化规律。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象

　　2007年11月至2009年3月在北华大学附属医院泌尿外科住院，并经病理检查确诊的肾细胞癌病例30例（观察组），男21例，女9例，年龄55～71岁。所有病例均为本院初诊病例，治疗前均未应用化疗、放疗和其他对免疫功能有影响的药物。正常对照组20例，均为本院体检中心正常体检者，年龄21～55岁，平均37岁。

　　1.2 设备与试剂

　　美国Beckman Coulter公司EPLCSXL型流式细胞仪；三色荧光标记的T淋巴细胞亚群检测试剂盒：CD4FITC/CD8PE/CD3PEcy5，美国Beckman Coulter公司；同型阴性对照：IgG1 FITC/IgG1PE/IgG1PEcy5，美国Beckman Coulter公司；溶血剂：美国Beckman Coulter公司甲酸溶血剂；采血管及抗凝剂：奥地利真空采血管，内加EDTAK2抗凝剂。

　　1.3 实验方法

　　观察组及对照组无菌采血2 ml，手术后的采血时间为规范性放、化疗之前。针对每一个标本，取2支流式细胞仪专用试管，分别标记为测定管和对照管。测定管中加入T淋巴细胞亚群检测荧光抗体20 μl，加入全血100 μl；在对照管中加入同型阴性对照20 μl，加入同一人份全血100 μl，混匀；两试管同时放于室温避光标记30 min。溶血：在每管中加入溶血剂甲600 μl，振荡7 s后立即加入溶血剂乙260 μl，振荡混均。洗涤细胞：在溶血后，加入4 ml PBS，混匀，1 000 r/min离心5 min，弃上清，加入1 ml PBS，混匀，待上机检测。流式细胞仪检测：用同型阴性对照调节流式细胞仪电压，使该细胞群充满整个3区但不能超过界线到1、2、4区。调节电压后，将测定管放于样品架上进行检测。

　　1.4 统计学分析

　　组间比较采用t检验。

　　2 结 果
　　
　　肾细胞癌患者手术治疗前、后及正常对照组T淋巴细胞亚群检测结果见表1。表1 肾细胞癌组术前、后及正常对照组T淋巴细胞亚群检测结果(略)

　　3 讨 论
　　
　　在肾恶性肿瘤中，肾细胞癌约占85%左右〔2〕，在肾肿瘤中最为常见。肿瘤的发生发展及其预后与机体的免疫监视及免疫清除功能障碍密切相关。肾细胞癌的治疗以外科手术治疗为主，术后配合免疫治疗取得了令人满意的结果。在抗肿瘤免疫中，细胞免疫尤其是T淋巴细胞的作用更为重要。T淋巴细胞参与机体的抗肿瘤免疫应答，其亚群的数量是反映机体免疫功能的重要指标。
　　
　　有研究结果证实，T淋巴细胞中各亚群的相对比例与患者的免疫功能状态密切相关，可以估测病情的进展情况〔3，4〕。本文应用流式细胞术对我院收治的30例肾细胞癌患者手术前、后的外周血T淋巴细胞亚群进行了动态监测分析，在手术治疗前与20例正常对照组对比分析了T淋巴细胞亚群百分率的变化特征，结果肾细胞癌患者CD3+和CD4+T淋巴细胞显著低于正常对照组，且CD4/CD8比值也低于对照组，而CD8+T淋巴细胞相对高于正常对照组。此结果与文献报道一致〔2〕，说明肾细胞癌患者体内存在细胞免疫功能紊乱，不能有效清除癌细胞导致肿瘤发生。30例肾细胞癌患者手术后T淋巴细胞亚群检测，并与术前进行对照分析，结果CD3+和CD4+T淋巴细胞较术前明显升高，CD4/CD8比值也升高，而CD8改变不明显。此结果与Schwaab〔5〕报道的结果相近。手术虽然不能清除体内的所有癌细胞，却能有效地去除瘤负荷，使机体的免疫功能得以恢复，表现为T淋巴细胞亚群中CD3+和CD4+T淋巴细胞升高，CD4/CD8比值倒置现象得以逆转。随着对这些病例进行动态监测T淋巴细胞亚群，可能会得出T淋巴细胞亚群的变化特征与患者预后的相互关系。

参考文献

　　1 Van den Hove LE，VanGool SW，VanPopel H，et al.Phenotype cytokine production and cytolytic capacity of fresh (uncultured) tumourinfiltrating T lymphocytes in human renal cell carcinoma〔J〕.Clin Exp Immunol，1997；109(3):5012.

　　2 吴阶平，顾方六，郭应禄.泌尿外科学〔M〕.济南：山东科学技术出版社，2005：8989.

　　3 Dewolf F，Spijikerman I，Schellekens PT，et al.AIDS prognosis based on HIV1 RAN，CD+4 T cell count and function：markers with reciprocal predictive value over time after seroconversion aids〔J〕.Cytometry，1997；11(15):1799800.

　　4 Molica S，Levato D，Dattlo A，et al.Clinicoprognostic relevance of quantitative immunophenotyping in B cell chronic lymphocytic leukemia with emphasis on the expression of CD20 antigen and surface immunoglobulins〔J〕.Eur J Haematol，1998；60(1)：478.

　　5 Schwaab T，Heaney JA，Schned AR，et al.A randomizer phase Ⅱ trial comparing two different sequence combinations of autologous vaccine and human recombinant interferon (gamma) and human recombinant interferon(alpha) 2b therapy in patients with metastatic renal cell carcinoma:clinical outcome and analysis of immunological parameters〔J〕.J Urol，2000；163(4):13225.