血管生成素2、血管内皮生长因子和尿激酶型纤维酶原激活剂在乳腺癌中的表达及意义

　　　　 作者：刘芳 杨翠军 刘正泉 薄爱华

【摘要】 目的 探讨血管生成素（Ang2）、血管内皮生长因子（VEGF）和尿激酶纤维酶原激活剂（UPA）在乳腺癌中表达的意义。方法 利用SP免疫组织化学方法， 检测89例乳腺癌和36例乳腺腺瘤中Ang2、VEGF和UPA的表达。结果 Ang2、VEGF在Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期（P<0.05）。 在浸润性乳腺癌组三者的阳性率明显高于非浸润癌组（P<0.01）。Ang2及UPA在淋巴结转移组阳性率明显高于无转移组（P<0.05）。Ang2与VEGF及UPA、VEGF与UPA在乳腺癌中表达呈相关，相关系数分别为0.952、0.480和0.725。结论 Ang2，VEGF和UPA在乳腺癌高表达与患者预后不良有关，在乳腺癌浸润和转移过程中三者又协同作用。

【关键词】 乳腺癌；乳腺腺瘤；血管生成素;血管内皮生长因子;尿激酶型纤维酶原激活剂；免疫组织化学

　目前认为血管生成素（Ang）家族，血管内皮生长因子（VEGF）和尿激酶型纤维素酶原激活剂（UAP）对肿瘤内血管新生和瘤细胞间质降解有直接影响〔1～3〕。它们的过表达为恶性肿瘤内血管增殖和癌细胞浸润转移建立了物质基础，也是导致抗肿瘤治疗失败的主要原因。关于Ang2、VEGF和UPA的临床意义各家认识不一，为进一步探讨Ang2、VEGF和UPA在乳腺癌中表达的意义和它们之间的相关性，我们利用SP免疫组织化学技术对乳腺肿瘤标本进行检测，并分析它们之间的相关性，为乳腺肿瘤早期诊治提供科学依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 临床资料

　　2008年6月至2009年7月收集张家口市河北北方学院附属第一医院、第三附属医院和张家口市第五医院外科乳腺癌手术切除标本89例，腺瘤标本36例，全部病例均为女性，乳腺癌患者年龄27～73(平均54)岁，中位年龄52岁；腺瘤患者年龄23～51(平均40)岁，中位年龄41.5岁。

　　1.2 标本处理及染色

　　将新鲜标本固定于10%中性甲醛液，行常规石蜡包埋，制备切片厚度5 μm，行免疫组化染色。鼠抗人Ang和VEGF和UPA单克隆抗体、SP免疫组织化学试剂盒和DBA显色剂均购自北京中杉金桥生物技术公司。染色程序严格按照试剂盒规程要求进行。阳性对照为已知Ang、VEGF和UPA阳性胃癌切片。阴性对照以PBS代替Ⅰ抗。

　　1.3 结果判断

　　UPA、VEGF和Ang阳性者，癌细胞质呈棕黄色，近胞膜处着色更深。凡10个高倍视野阳性细胞＞15%者为阳性病例；阳性细胞少于15%者为阴性病例。

　　1.4 统计学处理

　　采用SPSS13.0软件进行χ2检验。

　　2 结 果

　　2.1 Ang2、VEGF和UPA在不同年龄段的乳腺腺瘤和腺癌中的表达

　　Ang2、VEGF和UPA在乳腺癌中表达率高于腺瘤(P＜0.01)，且阳性率在31～50岁年龄组阳性率偏高，但30岁以下组和51岁以上组相比差异不显著。见表1。表1 Ang2、VEGF及UPA在不同年龄段乳腺良恶性肿瘤表达〔n（略）〕

　　2.2 Ang2、VEGF和UPA在乳腺癌表达与病理学特点

　　Ang2、VEGF和UPA在浸润性癌组阳性率明显高于非浸润癌组（P＜0.01）；VEGF和UPA在Ⅲ，Ⅳ期患者阳性率高于Ⅰ，Ⅱ期（P＜0.05）；Ang2和UPA在有淋巴转移组阳性率明显高于无淋巴转移组（P＜0.05）。见表2。表2 Ang2、VEGF和UPA表达与乳腺癌病理学特性分析结果〔n（略）〕

　　2.3 Ang2、VEGF和UPA之间的相关性 Ang2与VEGF正相关(r＝0.952)；Ang2与UPA正相关(r＝0.480)；VEGF与UPA正相关(r＝0.725)。

　　3 讨 论

　　3.1 Ang2生物学特性及其过表达意义

　　Ang是一种分泌型单链碱性蛋白，是促血管生成因子中唯一具有核糖核酸酶（Rnase）活性的物质。Ang有四个亚型，分别称为Ang1，2，3，4，其中对Ang2的研究较多〔3〕。目前证明Ang2基因定位于8号染色体（8p21），编码蛋白分子量为75 kD，其在肿瘤及血管内皮细胞中有表达，表明其参与血管形成的全过程，即在血管新生的初始阶段，当VEGF存在表达的情况下Ang2诱导内皮细胞分裂增殖，向新的方向移位；在第二阶段能够增强内皮细胞迁移能力〔4〕。本实验提示Ang2过表达与癌浸润行为和转移有关系。

　　3.2 VEGF生物学特性

　　VEGF家族有5个成员分别称为VEGFA，B，C，D和PIGF，它们由于mRNA前体剪切方式不同而形成多种异构体，它们具有酪氨酸激酶活性，可以与血管内皮细胞上的酪氨酸受体结合，引起一系列信号传递效应，促进血管内皮细胞增殖、迁移，导致新生血管形成，为肿瘤细胞浸润、转移提供营养和通道〔5～7〕。本研究发现VEGF在乳腺癌中阳性率明显高于乳腺肿瘤阳性率，而在良、恶性肿瘤的阳性率与患者年龄差异相关性不明显。VEGF在浸润型乳腺癌中阳性率明显高于非浸润癌。因此本实验提示VEGF高表达是乳腺癌预后不良的指标。

　　3.3 UPA的生物学性质及其高表达的意义

　　UPA是一种高度特异性的丝氨酸蛋白酶，相对分子量为55 kD，基因定位于10号染色体。UPA能使纤溶酶原激活形成纤溶酶，后者能降解细胞外基质和基膜中的纤维蛋白，层黏蛋白和纤维结合素，使癌细胞周围间质降解和易于癌细胞浸润、转移，有报道〔8，9〕胃癌中UPA阳性率达67.11%（51/76），浸润组和有转移组阳性率增高明显，而且阳性者生存期明显低于阴性组。本实验提示UPA是参与乳腺癌浸润，转移的重要因素，高表达者预后不良。

　　3.4 关于Ang2，VEGF和UPA在乳腺癌〔10，11〕中表达的相关性 肿瘤发生、浸润和转移是一个多因素、多阶段、多步骤和多基因参与的复杂过程。Ang2、VEGF和UPA在这个其中具有重要作用，本实验证实它们对肿瘤细胞内血管新生，降解基质，促进癌细胞的转移有重要作用。本实验提示Ang2、VEGF和UPA在乳腺癌发生、浸润和转移中有协同作用，但其具体作用机制，有待进一步研究。

参考文献

　1 李圣青.肿瘤血管生成治疗新研究进展〔J〕.实用临床医学杂志，2008；12（6）：914.

　　2 肖继平，张 莉，齐云攀.UPA在乳腺癌中的表达及意义〔J〕.中国普通外科杂志，2007；16（1）：968.

　　3 李国灏，杨为民.血管生成素的作用、表达及其与肿瘤血管生长的关系〔J〕.临床外科杂志，2004；12(5):3113.

　　4 单海燕，白小涓，张伟光，等.AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老相关基因表达的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009；29(1):12932.

　　5 张素贞，张 凡，常永霞，等.宫颈癌不同部位HIF1α、VEGF、p53表达对肿瘤血管生成作用的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009；29(2):4657.

　　6 汤红平，张雅洁，顾莹莹，等.VEGFC和VEGFD在乳腺癌中的表达作用〔J〕.肿瘤，2006；26（6）:5514.

　　7 武鸿斌，宋 燕，谢忠士，等.PTEN与VEGF在大肠癌组织中的表达及其临床意义〔J〕.中国老年学杂志，2008；28(3):4734.

　　8 栾天燕，刘 巍，杨渤房，等.胃癌组织MIC1与UPA蛋白表达及其侵袭转移和预后关系的探讨〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2008；15（19）:14869.

　　9 金向明，陈耀平，王宁菊.乳腺癌患者血浆UPA、UPAR检测意义〔J〕.宁夏医学杂志，2008；30（7）:5801.

　　10 高凤霞.TGFβ1与UPA在乳腺癌中的表达及其相关性的研究〔J〕. 青岛医药卫生，2009；41（1）:34.

　　11 吕正华，马小洁，潘新良，等.尿激酶型纤溶酶原激活物及其受体在下咽癌中的表达及临床意义〔J〕.临床耳鼻喉头颈外科杂志，2008；22（21）:9613.