轮叶党参提取物对脑血栓栓塞大鼠溶血磷脂酸和磷脂酸水平的影响

　　　　　　 作者：吕立勋 韩刚 董月 原海忠 王成强

【摘要】 目的 考察轮叶党参乙醇提取物对脑血栓栓塞大鼠血浆溶血磷脂酸（LPA）和磷脂酸（PA）水平的影响。方法 采用颈内动脉直接插管注入凝血酶建立大鼠脑血栓栓塞模型。SD大鼠40只，随机分为正常对照组、模型组、假手术组、轮叶党参提取物低、中剂量组。除正常对照组外，其余4组大鼠建立脑血栓栓塞模型。轮叶党参提取物组预先14 d灌胃给予轮叶党参乙醇提取物，观察轮叶党参乙醇提取物对大鼠脑血栓栓塞后LPA和PA水平的影响。结果 与正常对照组比较，模型组大鼠血浆溶血LPA和PA水平升高（P<0.05）；预防性给予轮叶党参乙醇提取物可明显降低血浆LPA和PA水平（P<0.05）。结论 轮叶党参乙醇提取物可降低脑血栓栓塞大鼠血浆LPA和PA水平。

【关键词】 轮叶党参；溶血磷脂酸；磷脂酸；脑血栓栓塞

　轮叶党参(Codonopsis lanceolata)属桔梗科党参属多年生草本植物，分布于我国东北、华南、西南等地〔1〕。轮叶党参含多种维生素、皂苷、多糖、黄酮类化合物、齐墩果酸及挥发油，具有抑制肿瘤生长、抗疲劳、降血脂、抗氧化及清除自由基等作用〔2～4〕，对人血小板有抗凝集作用〔5〕，但其抗血栓研究鲜见报道。磷脂代谢的中间产物溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid，LPA)和磷脂酸(phosphatidic acid，PA)，在(心)脑卒中的发生过程中可能起重要作用。血浆LPA的增高标志着血小板活化，而PA水平的增高则反映脑缺血缺氧程度，与氧自由基的过度形成有关。当血浆中LPA明显增高时，凝血过程开始，预示有形成血栓的可能〔6〕。LPA一般在体内含量较低，主要在血小板被激活时释放，刺激血小板聚集和平滑肌收缩，促进血管内皮增生，在凝血和血栓形成过程中起着重要的作用〔7〕。血小板活化在脑梗死的发生发展、治疗和预后中有重要意义。本文采用凝血酶凝血的方法建立大鼠脑血栓栓塞模型，研究轮叶党参乙醇提取物对脑血栓栓塞大鼠LPA和PA水平的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 仪器

　　TU1810型紫外可见分光光度计（北京普析通用公司）；RE52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KDC1042低速离心机（科大创新股份有限公司）；SK1型快速混匀器（江苏医疗仪器厂）。

　　1.2 试剂

　　凝血酶（安徽桑尼生物药业有限公司，规格500 U）；LPA测定用套装试剂盒（北京泰福仕科技开发有限公司）；轮叶党参（产于长白山）由延边大学医学院提供；其余试剂均为分析纯。

　　1.3 动物

　　健康清洁级SD大鼠40只，雌雄各半，体重240～260 g，购于北京实验动物有限公司，动物许可证号： SCXK（京）20060330。

　　1.4 方法

　　1.4.1 轮叶党参乙醇提取物的制备

　　将切碎的轮叶党参根茎浸入70%乙醇中，于70℃水浴中浸泡，并不断搅拌4 h，过滤得到上清液，将滤渣重复操作一次，合并上清液置于旋转蒸发仪中于70℃减压浓缩，干燥后得到轮叶党参乙醇提取物，备用。

　　1.4.2 动物分组与给药

　　40只大鼠随机分为，正常对照组、模型组、假手术组、轮叶党参乙醇提取物低、中剂量组，每组8只。除正常对照组外，其余4组大鼠建立脑血栓栓塞模型。正常对照组、假手术组、模型组术后4 h断头处死取血；轮叶党参乙醇提取物低(0.5 g/kg)、中(1 g/kg)剂量组术前每天灌胃给予轮叶党参乙醇提取物，连续给药14 d，其余过程同模型组。

　　1.4.3 大鼠脑血栓栓塞模型的建立〔8〕

　　术前大鼠禁食12 h，用1%戊巴比妥钠(30 mg/kg)腹腔注射麻醉后，仰卧位固定于手术台上。颈正中部纵向切开皮肤，切口长约2 cm，游离出右侧颈总动脉，从颈总动脉分叉处向上分离颈外动脉和颈内动脉。结扎颈外动脉，然后向颅底方向分离颈内动脉，在颅底处分离出翼腭动脉，并结扎其根部，仅保留颈内动脉入颅底主干；结扎颈总动脉，暂用2只微型动脉夹间隔一定距离夹闭颈内动脉，在近心端颈总动脉处用眼科剪剪一小口，插入导管(内已抽好血栓诱导剂凝血酶10 U加生理盐水0.05 ml)固定后，移去近导管端血管夹，少量血液流入导管头端，放置约10 min形成一小血栓，然后移去另一只血管夹，缓慢将此血栓和凝血酶注入颈内动脉后，拔出导管，并将颈总动脉切口处结扎，缝合切口；术后单笼饲养。假手术组手术操作过程同上，只是不注入血栓和凝血酶，而注入等量生理盐水。

　　1.4.4 血浆LPA和PA测定

　　取全血约4 ml，置于涂有肝素抗凝剂的离心管中。4 000 r/min离心10 min，准确吸取上清1 ml，抽提磷脂成分。加入显色剂于90℃水浴5 min，取出放置35 min后经紫外分光光度计测定吸光度值，计算LPA和PA的浓度。

　　1.5 统计学分析

　　计量资料均以x±s表示。采用SPSS11.5统计学软件进行统计处理。

　　2 结 果

　　与正常对照组比较，模型组血浆LPA、PA水平显著增高（P<0.05）；与模型组比较，大鼠灌胃给予轮叶党参乙醇提取物提前2 w干预后，血浆LPA、PA水平明显降低(P<0.05)，见表1。表1 大鼠血浆中LPA和LA含量(略)

　　3 讨 论

　　LPA是一种新发现的细胞间磷脂类信号分子，正常人血浆中LPA的浓度很低。血清中的LPA在凝血过程中产生释放，具有广泛而多样的生物学功能；可促使血小板活化、聚集，又促使血小板释放溶血磷脂酸和各种血管活性物质；促使血管平滑肌收缩，引起血管壁细胞成分发生增生，细胞外基质累积及血细胞成分凝集，促使局部黏附聚积、应力纤维形成以及纤维黏连蛋白结合，参与缺血性脑卒中的发生和发展。众多的研究已经证实LPA含量可为急性缺血性脑血管病早期诊断提供很重要的临床依据，对血栓进行早期防治有重要意义〔9〕。当血小板或血管内皮细胞受刺激活化时，脑梗死病人急性期LPA水平显著增高，LPA可以作为早期诊断缺血性脑卒中、卒中预警和治疗预后判断的一个重要指标。PA是一种脑缺血的早期释放物，在缺血24 h内产生，由于缺血后氧自由基释放，使得磷脂酶活性增高，导致PA升高，LPA和PA是脑损伤的早期标志物。

　　轮叶党参含有甾萜类、皂苷类、生物碱类等成分，传统医学认为其根入药有补气养阴、润肺生津、消肿排脓及解毒疗疮之功效，是药、食两用的野生经济植物，具有很高的利用价值。轮叶党参乙醇提取物具有降低人血小板凝集的作用，有明显的抗氧化作用，可以保护动脉内壁免受损伤，减少脂类沉积的机会，进而防止血栓形成。本实验结果显示，轮叶党参乙醇提取物能明显降低大鼠脑血栓栓塞后体内LPA和PA的水平，抑制血小板的凝集，对预防脑梗死发生有积极的意义。

参考文献

　1 苏义艳，张艳云，邹玉兰.山胡萝卜的栽培及食用〔J〕.农业与技术，2003；23(2):55.

　　2 附成国，文连奎，董 然.轮叶党参化学成分与药理作用研究〔J〕.中药材，2007；30（4）：4979.

　　3 韩春姬，王东明，俞 星，等.轮叶党参乙醇提取液预防大鼠脂质代谢紊乱的机制〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2005；31(4):5646.

　　4 刘 智，韩春姬，韩 颖，等.轮叶党参水提醇沉物对小鼠酒精性肝损伤的保护作用〔J〕.环境与职业医学，2004；21(5):4012.

　　5 李香善，工藤重光，金泽武道.轮叶党参提取物的生化作用〔J〕.华西药学杂志，2007；22（3）：3067.

　　6 Rivera R，Chun J.Biological effects of lysophospholipids〔J〕.Rev Physiol Biochem Pharmacol，2008；16 (10)：2546.

　　7 赵瑞平，宋志军，孙 凯.急性冠状动脉综合征患者血浆中溶血磷脂酸水平的临床研究〔J〕.中华老年心脑血管病杂志，2003；5:2435.

　　8 张兆岩，郭述苏，曹 霞，等.大鼠大脑中动脉血栓形成模型的建立〔J〕.解放军医学杂志，2001；26:4235.

　　9 邓建中，齐进兴，陈 品.溶血磷脂酸测定对急性缺血性脑血管病早期诊治价值的研究〔J〕.中国老年学杂志，2005；25（10）：12434.