作者：艾浩 牛建昭 薛晓鸥 李健
【关键词】 顺铂；卵巢；子宫；小鼠
基金项目：国家自然科学基金（30510403202b）；教育部高等学校学科创新引智计划项目（B07007）
0 引言
近年来随着肿瘤发病率的明显增加［1］，因化疗而导致卵巢功能低下和不孕的患者日渐增多，成为卵巢功能早衰（POF）发病的一个重要原因. 因缺乏化疗后卵巢形态学变化的实验研究，故对其病因和病机研究难以取得突破性进展. 我们通过对顺铂腹腔注射后小鼠卵巢形态分析，为深入研究POF的病理机制提供依据.
1 材料和方法
1.1 材料 顺铂（CDDP，济南齐鲁制药，水针剂，200 mg/支，批号0403039）. ICR小鼠60只，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号：SCXK（京）2002/0003，体质量28～30 g，代谢笼中饲养，23～25℃室温，光照12 h，食水随意. 观察1 wk后，随机分为正常对照组和CDDP实验组，每组30只.
1.2 方法 小鼠给药剂量为2.0 mg/kg，连续腹腔注射7 d. 对照组小鼠每次腹腔注射生理盐水0.2 mL. 以上各组均于停药次日取材. 一般状态观察，每日测体质量1次. 卵巢组织石蜡切片HE，Mallory染色后摄片观察. 计量资料用x±s表示，应用SPSS 13.0进行数据处理.
2 结果
2.1 生命指征观察 给予CDDP后，小鼠体质量均在3 d起呈下降趋势，体毛晦暗、无光泽，与对照组比较有统计学差异（P＜0.01）. 实验组小鼠体质量与对照组比较呈下降趋势（表1）.
表1 CDDP腹腔注射给药小鼠体质量变化（略）
bP＜0.01 vs 正常对照.
2.2 光镜观察 正常组大鼠卵巢形态正常，可见各期卵泡及其黄体组织，其中原始卵泡较多，多数生长卵泡母细胞较大，核染色质细粒状（图1）. CDDP腹腔注射给药后卵巢组织呈现“纤维化”样改变，肉眼观卵巢组织体积缩小，表面凸凹不平，镜下见皮质变薄，原始卵泡明显增多，典型的生长卵泡少见，闭锁卵泡增加（图2）. 正常对照组小鼠子宫内膜呈增生期或分泌期改变，内膜均较厚，腺体排列密集，腺腔大小不等（图3）. CDDP用药组子宫体积缩小，内膜萎缩，以扁平上皮至立方上皮为主，核小、色深. 腺体分散，稀少，腔狭而直，间质细胞成梭形，排列致密，胞质少，色深（图4）. 在正常卵巢组织中，Mallory蓝紫色染色细胞主要局限性集中于卵泡外膜细胞和间质细胞中，着色浅（图5）. 在CDDP组中，以上特征性变化明显增强，表现为着色区域增加，染色加深（图6）.
图1 正常小鼠卵巢形态规整，可见多个次级卵泡和成熟卵泡（箭头所指为成熟卵泡） HE ×40（略）
图2 CDDP小鼠卵巢明显萎缩，皮质变薄，出现大量闭锁卵泡（箭头所指为闭锁卵泡） HE ×40（略）
图4 CDDP小鼠子宫各层组织明显萎缩， 单层腺上皮细胞呈样改变 HE ×200（略）
图5 正常小鼠卵巢蓝紫色染色集中于外膜细胞和间质细胞中 Mallory ×100（略）
图6 CDDP小鼠卵巢蓝紫色染色面积增多，黄体少见 Mallory ×100（略）
3 讨论
CDDP是一类具有较强毒性的化疗药物， 在临床上限制了大剂量应用［2］. 氧化损伤作用增强和总抗氧化损伤能力降低可能是CDDP导致小鼠POF形成的重要因素之一［3］. 氧自由基（OFR）广泛存在于体内各种组织中，可以破坏氧化与抗氧化的平衡. 机体内氧自由基能引发生物膜中脂质过氧化作用，形成脂质过氧化物，如MDA，酮基等，导致细胞代谢、功能和结构的改变［4］. 体内自由基生成过度或消除能力下降是引发机体和组织功能障碍的重要因素. 因此我们推测，CDDP对卵巢和子宫组织细胞的变化多体现于细胞代谢异常后自发性损伤，与细胞膜完整性流动性受到破坏关系密切.
参考文献
［1］Yang BH， Parkin DM， Cai L， et al. Cancer burden and trends in the Asian Pacific Rim region［J］. Asian Pac J Cancer Prev， 2004， 5(2):96-111.
［2］Robson H， Meyer S， Shalet SM， et al. Platinum agents in the treatment of osteosarcoma: efficacy of cisplatin vs. carboplatin in human osteosarcoma cell lines［J］. Med Pediatr Oncol， 2002， 39(6):573-580.
［3］艾 浩， 牛建昭， 薛晓鸥， 等. 化疗损伤性卵巢功能早衰小鼠动物模型的研究［J］. 中国实验动物学报， 2007， 15(1):35-39.
［4］陈 瑗， 周 玫. 自由基医学基础与病理生理［M］. 北京: 人民卫生出版社， 2002:36-58.