关于国产和进口格列吡嗪片在健康人体内的药动学比较

【摘要】 目的：比较国产和进口格列吡嗪片在健康志愿者体内的吸收、分布、代谢和排泄. 方法：健康男性志愿受试者12例，单剂量口服国产和进口格列吡嗪片10 mg，用标准二阶段交叉设计自身对照实验方法，以高效液相色谱法测定血浆中格列吡嗪的经时浓度，计算药动学参数. 结果：国产和进口格列吡嗪片在健康志愿者体内的药时曲线均符合一级吸收的单室模型，两种格列吡嗪片的主要药动学参数Tmax， Cmax和 AUC(0-17)分别为（2.6±0.5） h和(2.6±0.5) h； (609.7±112.9) ng/mL和(568.8±101.9) ng/mL；（4499.8±969.0）ng/mL和(4108.3±724.9) ng/mL. 结论：国产和进口格列吡嗪片的药代动力学参数无差异.
【关键词】 格列吡嗪片 药代动力学 高效液相色谱法
　　0引言
　　格列吡嗪是一种亲脂性弱酸，为第二代磺脲类口服降血糖药. 口服吸收快速完全，且无首过效应，其体内作用机理是直接刺激胰岛素β细胞的分泌功能，促使内源性胰岛素的释放增加而降低血糖. 临床疗效确切，常用于治疗Ⅱ型糖尿病［1-2］. 如今该药生产厂家众多，药品质量问题较为普遍，如辅料及生产工艺等因素的不同可直接造成格列吡嗪片在人体内药物释放特征的改变［3］. 释药过快会导致患者血糖过低，而释药过慢则降血糖效果不佳. 为确保我院临床用药的质量，我们采用高效液相色谱法对12名健康男性志愿受试者单剂量口服国产和进口格列吡嗪片后的主要药代动力学参数进行了比较，旨在为指导临床安全、合理的用药提供科学理论依据［4-5］.
　　1材料和方法
　　1.1材料
　　1.1.1仪器LC10AVP高效液相色谱系统，7725型进样阀（配100 μL定量环），SPDM10AVP二极管阵列紫外可见检测器，CTO10AVP柱箱，Classvp5.032色谱工作站；Hypersil C18不锈钢分析色谱柱（150 mm×4.6 mm， 5 μm）.
　　1.1.2药品和试剂受试制剂：格列吡嗪片（西安金花企业集团股份有限公司高新制药厂研制，批号：031010，5 mg/片）；参比制剂：格列吡嗪片（意大利Farmitalia Carlo Erba公司，批号：040521，5 mg/片）；格列吡嗪标准品（西安金花企业集团股份有限公司高新制药厂提供，含量为98.91%）. 甲醇和乙腈为色谱级，其它试剂均为分析纯. 实验过程中均使用去离子注射用水.
　　1.2方法
　　1.2.1色谱条件按文献［6-7］法加以改进，流动相为乙腈（含1 g/L三乙胺和15 g/L冰醋酸)-水=40∶60. 固定相为Hypersil C18色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流速为1.0 mL/min；柱温为室温；进样量为100 μL；检测波长225 nm（在本条件下，经UV扫描，该波长为最大吸收处）.
　　1.2.2专属性在本色谱条件下，格列吡嗪的保留时间为5.88 min(图1)，血浆中干扰物质与格列吡嗪可达基线完全分离，确保分析的专一性.
　　1.2.3给药方案l2例男性健康受试者，年龄（23.7±3.0）岁，体质量(60.9±7.9)kg，身长(170.6±3.7) cm；血、尿常规、肝功、肾功及心电图检查均正常，无药物过敏史. 以标准二阶段交叉设计（twoperiod crossover design）自身对照试验法，将12例受试者随机分为两组，试验第一阶段第一组口服国产的格列吡嗪片10 mg，第二组口服进口格列吡嗪片10 mg. 经2 wk清洗期后，两组交换服药品种进行第二阶段试验. 受试者试验前禁食12 h，于次日07:00空腹用200 mL温开水按规定的剂量及方法给药，服药后4 h 和10 h进食统一餐，服药前及服药后0.5，1，l.5，2，3，4，6，8，10，12，17 h分别抽取空白血样5 mL，置肝素抗凝管中，离心分离出血浆后密封置-20℃冰箱中保存，待测.
　　1.2.4血浆样品预处理精取血浆样品1.0 mL于试管中，加人适量格列吡嗪标准液，每支试管均加人0.5 mol/L盐酸200 μL，漩涡混合1 min，再加入5.0 mL氯仿，漩涡混合萃取3 min，离心(15 000 r/min，-15℃) 10 min. 精取氯仿层4.0 mL于尖底试管中．在40℃水浴中以氮气流挥干，残渣加130 μL甲醇漩涡混合溶解(冰浴中)，100 μL进样分析.
　　2结果
　　2.1标准曲线的制备取混合人空白血浆1.0 mL共8份．分置于试管中，加入适量格列吡嗪标准液，配制成浓度分别为l0.3l7，25.055，50.109，103.166，206.332，397.926，604.258，810.590 ng/mL的血浆样品. 按1.2.4项下的处理方法操作，记录各色谱峰的峰面积. 以配制的格列吡嗪浓度（C）为横坐标，以相应的色谱峰面积（A）为纵坐标，用加权最小二乘法进行回归运算，求得标准曲线回归方程为C=1.9628×l0-3A+1.6693 (r=0.999，n=6)，最低检测浓度为8 ng/mL(按S/N=3计).
　　2.2回收率的测定取1.0 mL混合空白人血浆，分别配成高、中、低三个浓度的血浆样品（618.996，265.284和32.424 ng/mL）. 每种浓度配6份，按样品预处理方法操作后进行分析，将所得峰面积代入标准曲线求出测得量与已知加入量相比得方法回收率；将所得峰面积与同量的格列吡嗪标准溶液直接挥干进样所得峰面积相比得提取回收率. 结果方法和提取回收率相近（表1）.表1格列吡嗪的方法和提取回收率（略）
　　2.3精密度的测定取空白人血浆加入适量格列吡嗪标准液，配制成低、中、高浓度的血浆样品，浓度分别为29.476，221.07和707.424 ng/mL，在1 d和8 d内照样品测定法重复测定6次，求得格列吡嗪日内和日间精密度（表2）.表2格列吡嗪的日内和日间精密度(略）
　　2.4稳定性本试验考察格列吡嗪血浆样品冰冻前及-20℃冰冻两周后的稳定性. 取1.0 mL空白人血浆18份加入适量格列吡嗪标准液，分别配成高、中、低三种浓度血浆样品（707.424，221.070和29.476 ng/mL），按1.2.4项下样品预处理的方法处理后，计算冰冻2 wk及冻融对样品稳定性影响，求得冰冻前后浓度变化比率分别为（100.35±5.19）%，（99.32±3.42）%，（100.13±2.18）%.
　　2.5药动学将血药浓度时间数据经中国数学药理学会开发的3P97药动学统计软件处理，Tmax和Cmax为实测值，以CT曲线末端直线部分血药浓度的对数与对应时间点进行线性回归，求得消除速率常数Ke；以T1/2Ke=0.693/Ke，得到格列吡嗪片剂的体内消除半衰期. 用梯形法求算两种格列吡嗪片的AUC(0-17h)和 AUC（0-∞），（AUC0-∞=AUC0-t+Ct/Ke）. 结果表明，格列吡嗪片剂在健康志愿者体内的处置符合一室模型，其主要药动学参数（表3），两种制剂交叉给12名健康受试者，平均药时曲线相近（图2）.表3健康志愿者口服10 mg格列吡嗪片后的药动学参数(略）

　　3讨论
　　本试验采用精确度和准确度均高且易普及的HPLC法测定血浆中格列吡嗪的浓度. 在确定色谱分离条件时，经系统性比较，采用改性乙腈（即在乙腈中加入1 g/L三乙胺和15 g/L冰醋酸）与水做流动相效果最佳，与报道的甲醇磷酸缓冲液相比［6］，不但柱压明显降低．而且分离度及灵敏度显著提高，格列吡嗪的保留时间从10.3 min缩短到5.8 min，从而大大缩短了样品分析的时间. 结果表明在本色谱条件下，提取回收率达78%左右，日内、日间的变异系数均小于10%，操作简便、快速，经济，可确保分析方法的专一性和分析结果的准确可靠.
　　从两种格列吡嗪制剂的血药浓度测定结果可见，格列吡嗪片在人体内的处置符合一室开放模型，本文评价分析了国产及进口两种格列吡嗪片的药代动力学参数. 结果表明，国产格列吡嗪片各时间点的Tmax、Cmax及AUC均较进口的格列吡嗪片略高，但各参数间无统计学差异，与文献报道的格列吡嗪片的体内药动学过程基本一致［6-8］. 此试验结果对该药在临床的进一步研究和推广应用提供重要的数据参考. 在整个试验过程所有受试者未见不良反应发生.

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