关于血清反复冻融对HBsAg和抗HBs抗体检测的影响

作者：张景霞，周红超，徐德忠，李如琳，闫永平


【关键词】 乙肝表面抗原
　　关键词: 乙肝表面抗原;乙肝表面抗体;血清冻融
　　0 引言
　　ELISA技术已在乙肝标志物的检测中已普遍应用，一般认为收集的血清应及时检测.而在基层单位或在流行病学调查研究中，由于血标本收集不集中，或者有些标本常需检测多个指标而持续时间较长，因此，血清必须低温贮存一定时间或反复冻融后检测，而血清冻融对ELISA检测结果是否有影响尚不清楚.为此，我们对183份血清标本冻融前、冻融3次、冻融6次后的HBsAg和抗-HBs进行了检测和分析比较.
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 材料
　　1999-05收集西京医院门诊乙肝5项检测血清183份，年龄、性别、诊断不限.
　　
　　1.2 方法
　　于初次检测HBsAg和抗-HBs后置-20℃过夜，连续冻融3次、冻融6次后分别检测HBsAg和抗-HBs，试剂盒为上海科华实业有限公司生产，3次检测采用同一批号，实验由同一人在同一实验室严格按照说明书进行，结果在华东电子管厂生产的DG3022A型酶标仪上读取，波长为450nm.标本A值/阴性对照平均A值≥2.1（S/N值）判断为阳性.
　　
　　2 结果
　　HBsAg冻融前共检测血清183份，阳性67份，阳性率为36.6%，阳性平均S/N值为18.1;冻融3次后检测血清183份，阳性64份，阳性率为34.9%，阳性平均S/N值为17.1;冻融6次后共检测血清183份，阳性62份，阳性率为33.9%，阳性平均S/N值为20.4.三次检测结果经t检验，P&>0.05，无显著性差异.抗-HBs冻融前共检测血清183份，阳性107份，阳性率为58.5%，阳性平均S/N值为11.5;冻融3次后共检测血清183份，阳性110份，阳性率为60.1%，阳性平均S/N值为11.9;冻融6次后共检测血清183份，阳性99份，阳性率为54.1%，阳性平均S/N值为11.6.三次检测结果经t检验，P&>0.05，无显著性差异.HBsAg冻融前、冻融6次后均阳性61份，均阴性115份，冻融前阴性冻融6次后阳性者1份，冻融前阳性冻融6次后阴性者6份，符合率为96.2%，χ2 =2.28，P&>0.05，无显著性差异.抗-HBs冻融前和冻融6次后均阳性97份，均阴性10份，冻融前阴性冻融6次后阳性者2份，冻融前阳性冻融6次后阴性者10份，符合率为93.4%，χ2 =4.45，P&<0.05，有明显差别. 　3 讨论
　　李恩民等［1］ 人曾研究了血清冻融次数对水溶性脂质过氧化物测定值的影响，认为血清反复冻融4次，水溶性脂质过氧化物的测定值仍十分稳定，龙宪和［2］ ，吴晓蔓等［3］ 也就溶血标本对乙肝标志物检测的影响进行过探讨，发现高度溶血可明显降低HBsAg的阳性程度，可能导致部分HBsAg弱阳性者漏检.我们在对183份血清冻融前、冻融3次、冻融6次后分别进行HBsAg、抗-HBs检测并进行统计分析后，结果表明:血清反复冻融对HBsAg的检测没有影响，冻融3次和冻融6次与冻融前相比，无论阳性率和S/N值均无明显差别（P&>0.05）.抗-HBs冻融3次与冻融前没有显著差别，而冻融6次后与冻融前相比，其阳性率有明显下降，经对冻融前和冻融6次后抗-HBs检测相关性进行分析，发现冻融6次后和冻融前无相关性，冻融前阳性标本107份，而冻融6次后下降至99份（P&<0.05），说明冻融对血清抗-HBs的检测结果确有影响，血清冻融6次后抗-HBs阳性率有明显下降，其原因尚不清楚.基于以上结果，我们认为，在临床上或血清流行病学调查研究中，血清可以放置在-20℃贮存，反复冻融将不会影响HB-sAg的检测结果;而对抗-HBs的检测，应尽量避免反复冻融，进行多指标检测时，应提前将所有试剂盒准备好，短时间内完成.
　　参考文献:
　　
　　［1］李恩民，许丽艳，李 才.血清存放条件对水溶性脂质过氧化物测定的影响［J］.临床医学检验杂志，1994;12（4）:174.
　　［2］龙宪和.溶血对乙型肝炎五项血清标志物检测结果的影响［J］.中华医学检验杂志，1996;47（1）:48.
　　［3］吴晓蔓.溶血标本对乙肝标志物检测的影响［J］.上海医学检验杂志，1995;10（2）:125.