作者：徐明 李旸 张翔 麻亦柏 李大进 董薇
【摘要】 目的 观察小剂量氯化铵对小鼠学习记忆功能的影响。方法 昆明种小鼠40只，随机分为2大组，每大组再随机分为2组（n=10）：生理盐水组（腹腔注射生理盐水25 ml/kg），氯化铵组（腹腔注射2.5%氯化铵 25 ml/kg）。通过水迷宫实验和Y型迷宫实验观察氯化铵对小鼠学习记忆功能的影响。结果 用药后氯化铵组与生理盐水组相比：动物水迷宫实验时间延长，错误次数增多(P&<0.05)；Y迷宫实验学习次数增多(P&<0.05)。停药24 h后再次实验，氯化铵组与生理盐水组水迷宫实验和Y迷宫实验结果差异无显著性 (P&>0.05)。结论 单次小剂量注射氯化铵能抑制小鼠短期内的学习记忆功能，但在停药24 h后抑制作用消失，不会造成持久性的学习记忆障碍。
【关键词】 氯化铵；小鼠；学习；记忆
Abstract: Objective To investigate the effects of low-dose ammonium chloride on learning and memory in mice. Methods 40 Kunming mice were randomly pided into groups: 2 NS control groups and 2 ammonium chloride test groups. The test group were each given 2.5% ammonium chloride 25 ml/kg i.p.. The mice were then conducted to take water-maze test and Y-maze test to evaluate the effects of ammonium chloride on learning and memory function. Results Compared with the results of NS groups， it was found that ammonium chloride lengthened the swimming learning time and increased the frequency of error made in water-maze and Y-maze tests (P&<0.05). However， 24 hours after the injection of ammonium chloride， the differences between two groups were no more detectable in the tests. Conclusion Single low- dose ammonium chloride can temporarily impair the learning and memory in mice， causing no persistent memory defect.
Key words: ammonium chloride; mice; learning; memory
氯化铵进入到体内会引起血氨浓度的升高，当体内血氨浓度升高到一定程度的时候，大量的氨会进入脑内，通过干扰脑内能量代谢、改变脑内神经递质、影响神经细胞膜功能等机制引起脑功能障碍，轻度表现有情绪和行为异常，重度有昏睡、昏迷甚至死亡［1-2］。本实验观察了小剂量氯化铵中毒对小鼠学习记忆能力的影响，为进一步研究氨中毒引起脑功能改变的机制提供实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验动物 昆明种小鼠，体重20～25 g，雌雄各半，由徐州医学院实验动物中心提供〔合格证号：（苏）2002-0038〕。实验前2天使小鼠熟悉实验室环境，自由摄食饮水，每日9:00～12:00进行实验。
1.2 主要仪器及药品 MG-3Y迷宫刺激器（安徽淮北正华生物仪器设备有限公司）。 氯化铵（徐州试剂总厂，批号 070823），用生理盐水（NS）稀释至所需浓度。
1.3 动物分组 按分层随机区组设计将小鼠分组，使各组小鼠雌雄比例、平均体重基本相同。在水迷宫（徐州医学院麻醉基础实验室提供）实验和Y迷宫实验中均将小鼠分为2组（n=10）：生理盐水组和氯化铵组。
1.4 给药方法和剂量 生理盐水组腹腔注射生理盐水（25 ml/kg），氯化铵组腹腔注射氯化铵（2.5%氯化铵25 ml/kg）。两组在给药后5 min进行水迷宫和Y迷宫实验，并于24 h后不给药重复上述实验。
1.5 水迷宫实验［3］ 动物进行水迷宫实验，检测小鼠空间分辨学习能力。水迷宫含4个盲端，终点有一高出水面的安全区。水温控制在(25±1) ℃。实验分4 d进行，仅第3天测试前5 min给药，余均不给药：第1天训练A点1次和B点3次，第2天训练C点3次，第3天测C点，第4天测C点。每次训练时间均限定在3 min内，超时者按3 min计。每只小鼠每次训练和测试均记录小鼠由入水至到达各终点的时间(到达时间)和进入盲端的次数(错误次数)。分别记录第3、4两天从C点到达终点时间和错误次数的均值作为学习记忆成绩。
1.6 Y迷宫实验［4］ 应用 MG-3Y 迷宫刺激器，测试成绩分为学习成绩和记忆成绩。宫箱设有3条通道，每臂末端有信号灯，箱底通以交流电。灯光指示为安全区，不通电。将小鼠置于一支臂端，另两支任意一支给灯光信号，示安全区。适应1 min后给予电击，以小鼠直接逃至安全区为正确反应，否则为错误。实验共3 d，第1天给药后5 min开始实验，学习能力以小鼠达到连续9次以上正确反应时所需的电击总次数为准。分别在24 h、48 h后，不给药再次测试，以电击10次中正确反应的次数为准，以衡量其记忆能力。所有学习记忆测试均在安静、暗光下进行。
1.7 统计学处理 统计学数据以均数±标准差(x±s)表示，两组间比较用t检验，多组间比较用完全随机设计方差分析法(ANOVA)和q检验，P&<0.05为统计学上有显著性差异。
与生理盐水组相比，氯化铵组第3天水迷宫实验到达时间延长（P&<0.05），错误次数增多（P&<0.05）；Y迷宫实验学会次数增多，差别有显著性(P&<0.05)。用药后第2、3天，各组两法观测，不论是达到时间、错误次数还是正确反应的次数差异均无显著性 (P&>0.05)。见表1、2。表1 小剂量氯化铵对小鼠学习记忆的影响表2 小剂量氯化铵对小鼠学习记忆的影响（Y迷宫实验，n=10，x±s）
3 讨 论
血氨主要来自肠道、肾脏和骨骼肌生成的氨，但胃肠道是氨进入身体的主要门户。正常人胃肠道每日可产氨4 g，大部分是由血循环弥散至肠道的尿素经肠菌的尿素酶分解产生，小部分是食物中的蛋白质被肠菌的氨基酸氧化酶分解产生。机体清除血氨的主要途径为：①尿素合成，绝大部分来自肠道的氨在肝脏中经鸟氨酸代谢环转变为尿素；②脑、肝、肾等组织在ATP的供能条件下，利用和消耗氨以合成谷氨酸和谷氨酰胺；③肾脏是排泄氨的主要场所，除排出大量尿素外，在排酸的同时，也以NH4+的形式排除大量的氨；④血氨过高时可从肺部呼出少量［1-2］。当氨产生、摄入过多（如本实验），或者清除障碍（如肝功能衰竭）的时候，就会使血氨水平升高，特别是游离型的NH3升高，游离的NH3有毒性，且能透过血脑屏障进入脑内。氨进入脑内会干扰脑内能量代谢，改变脑内神经递质，影响神经细胞膜功能，还有增加脑水肿、改变基因表达以及诱导线粒体通透性改变等作用［2，5］，从而引起脑功能障碍。
氯化铵进入体内后，可以使血氨浓度迅速升高。本实验注射的小剂量氯化铵不会导致小鼠出现重症的脑功能障碍，如痉挛、昏睡、昏迷或者死亡，但小鼠在给予小剂量氯化铵后出现了学习和记忆能力的下降，在停药24 h以后，小鼠的学习记忆能力恢复正常，本实验提示单次小剂量给予氯化铵可以引起小鼠短期学习记忆功能的障碍，但不会造成持久性损害。
【
参考文献
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