摘要:目的 建立奥拉西坦注射液中奥拉西坦的含量测定方法。方法 高效液相色谱法，用氨基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈水（体积比80∶20），检测波长210 nm。结果 奥拉西坦质量浓度在0.025~0.20 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=10000）；精密度、重复性试验结果RSD分别为0.10 %和0.30 %；平均回收率为100.85 %，RSD＝0.79 ％。结论 本法简便，灵敏，准确，重现性好，建立的定量方法可用于控制该注射液的质量。
关键词:奥拉西坦；注射液； 含量测定； 高效液相色谱法
Abstract: Objective To establish a quick and efficient highperformance liquid chromatographic assay for the determination of oxiracetam in oxiracetam injection. Method Chromatography was performed on a column (250/4.6 NUCLEOSIL 1005 Nh3) using acetonitrilewater (80∶20) as the mobile phase under the detection wavelength of 210 nm. Result The linear range was 0.025~0.20 mg /ml（r=1.0000）. The average recovery was 100.85 % and RSD 0.79 %. Conclusion The method is convenient，sensitive and accurate for the quality control of oxiracetam injection.
Key words:oxiracetam; oxiracetam injection; content determination; HPLC
奥拉西坦注射液主要成分为奥拉西坦。奥拉西坦（化学名：4羟基2氧代1吡咯烷酰胺）是一种智能促进药，能改善思维记忆功能和学习成绩，对防治老年性痴呆疗效显著［1］。测定奥拉西坦含量的方法，目前国外文献报道有柱切换法［2］和柱前衍生化法［3］；国内有凯氏定氮法。本文采用HPLC法测定奥拉西坦的含量，为控制该产品的质量提供依据。
1 仪器与试药
Agilent1100sereil高效液相色谱仪；METTLER AE 240电子分析天平（1/10万）；奥拉西坦工作对照品由岳阳市制药三厂提供（质量分数99.7 %），奥拉西坦注射液（广东世信药业有限公司提供，批号：030901、030902、030903，规格：5 mL∶1 g），实验用水为超纯水；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
采用色谱柱250/4.6 NUCLEOSIL 100-5 Nh3，流动相为乙腈水(体积比80∶20)，流速1.0 mL/min，检测波长210 nm，进样20 μL，柱温为室温。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取奥拉西坦对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1 mL中含约 012 mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
精密量取样品2 mL置100 mL的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。再精密量取3 mL置100 mL的量瓶中，加流动相稀释制成每1 mL中含 0.12 mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。
2.3 阴性样品干扰试验
按样品处方量除不加奥拉西坦外，按其工艺制备阴性制剂。再按“供试品溶液的制备”项下方法制得阴性对照液。按上述色谱条件测定，结果显示阴性制剂对奥拉西坦测定无干扰，HPLC图谱见图1。
2.4 线性关系
精密称取奥拉西坦对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1 mL中含1 mg的溶液，作为对照品储备液。精密量取0.50 ，1.0，2.0，3.0，4.0 mL置于20 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积(A)对质量浓度(ρ)进行回归，得回归方程：A＝10375ρ+22.11，r＝1.0000。结果表明奥拉西坦在0.025～0.2 mg/mL范围内峰面积与质量浓度呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
取浓度为0.1 mg/mL的对照品溶液，连续进样5次，记录峰面积，RSD为0.10% ，表明精密度良好。 2.6 稳定性试验
取同一供试品溶液在0、1、2、3、4、5、6、7、8 h分别进样，记录峰面积。结果平均峰面积为1316.2，RSD＝031％，表明供试品溶液在室温下8 h内稳定。
2.7 重复性试验
取样品（批号为030903），按供试品溶液制备方法配制6份供试品溶液，按供试品含量测定方法测定，测得平均值为101.02％，RSD＝0.30％，结果表明该方法重复性好。
2.8 回收率试验
取已知含量的同批样品3份，分别精密加入奥拉西坦对照品160 mg(80%)、200 mg(100%)、240 mg(120%)，加流动相溶解并稀释制成每1 mL含0.12 mg的奥拉西坦溶液。照上述色谱条件测定，各进样3次，记录色谱图，计算加样回收率。结果见表2。 表2 加样回收率试验结果（略）
2.9 供试品的测定
取样品3批，按上述色谱条件进行测定，按外标法计算含量并与凯氏定氮法作比较。凯氏定氮方法：精密量取本品1 mL，置凯氏烧瓶中，加水250 mL，摇匀，加40%氢氧化钠溶液20 mL，连接蒸馏装置，另取2%硼酸溶液40 mL作为吸收液，加入甲基红-溴甲酚绿混合指示液10滴，进行蒸馏，至吸收液的总体积约为200 mL时，停止蒸馏，吸收液用硫酸滴定液（0.05 mol/L）滴定，并将滴定结果用空白试验校正，即得。每 mL的硫酸滴定液（0.05 mol/L）相当于15.82 mg的C2H10N2O3。结果见表3。表3 含量测定结果（略）
3 讨论
本法操作简单，结果准确，方法可靠，重现性好。与凯氏定氮法相比，操作更为简便快速，可用于奥拉西坦注射液的含量测定，为该制剂的测定提供了一种新方法。
将按“2.9”项下方法配制的每1 mL中约含1.0 mg的样品溶液做降解试验（强光、强热、强酸），结果降解产物均能与主峰达到基线分离，对主成分测定不产生影响，说明本色谱系统的专属性良好。HPLC图谱见图2。
参考文献
［1］江一帆.世界最新药物手册［M］.中国医药科技出版社，1994:381.
［2］LECAILLON J B. Determination of oxiracetam in plasma and urine by column-switching high performance liquid chromatography［J］. J Chromatogr，1989，497:223.
［3］PERUCCA E. Pharmacokinetics of oxiracetam following intravenous and oral administration in healthy volunteers［J］. Eur J Drug Metab Pharmacokinet，1984(3):327.