关于HCV感染者IgG/IgM

【关键词】 免疫紊乱
　　摘要:目的 初步探讨IgG/IgMTCIC在HCV感染者体内的意义。 方法 采用捕捉法ELISA，以抗人IgG的羊IgG为包被抗体，HRP抗人IgM的羊IgG 为指示抗体，检测80例HCV感染者及30例健康人体内IgG/IgMTCIC的水平。结果 HCV感染组IgG/IgMTCIC的水平显著高于健康对照组（P&<0.01）；进一步比较与ALT及BT的关系，发现IgG/IgMTCIC与两者均无明显关系（P&>0.05）。结论 IgG/IgMTCIC并不直接参与肝脏损伤的病理过程，而可能是丙肝患者体液免疫紊乱的重要指征。
　　关键词:HCV；IgG/IgMTCIC；ELISA；免疫紊乱
　　Abstract: Objective To preliminarily elucidate the significance of IgG/IgMTCIC in HCVinfected inpiduals. Methods Coated with goat IgG aimed to human IgG，and then detected by HRPlabeled goat IgG aimed to human IgM，a capture ELISA method was established to examine the circulating immune complexes composed of IgG and IgM (i.e. IgG/IgMTCIC) in HCVinfected inpiduals (80 cases) and healthy inpiduals (30 cases). Results The level of IgG/IgMTCIC in HCVinfected inpiduals was obviously higher than that in the control group (healthy inpiduals). In addition，there was not an obvious correlation between the level of IgG/IgMTCIC and ALT or BT in the serum of HCV infected inpiduals. Conclusion It was suggested that IgG/IgMTCIC did not participate in the damage of liver，whereas it might be an important indication that reflected the disordered status of humoral immune response.
　　Key words:hepatitis C virus (HCV)；IgG/IgMTCIC；ELISA；immunologic derangement
　　自双特异性循环免疫复合物(twocomponentdetermined circulating immune complexes，TCIC)的概念提出以来［］，有关报道层出不穷。迄今为止，研究主要集中在抗原/抗体双特异性循环免疫复合物、抗原/补体双特异性循环免疫复合物及抗体/补体双特异性循环免疫复合物［2-6］，对Ig/Ig双特异性循环免疫复合物(Ig/IgTCIC)的研究则鲜见报道。本文拟建立一种捕捉法ELISA以检测IgG/IgM双特异性循环免疫复合物(即IgG/IgMTCIC)，并通过该方法探讨HCV感染者体内这类免疫复合物的理论和临床意义。
　　1 材料和方法
　　1.1 实验材料
　　1.1.1 抗人IgG的羊IgG
　　羊抗人IgG抗血清( 卫生部上海生物制品研究所)，经硫酸铵盐析DEAE32层析，提取IgG组分。
　　1.1.2 HRP
　　抗人IgM的羊IgG 取羊抗人IgM抗血清(卫生部上海生物制品研究所)，提取IgG，采用简易过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP，Sigma)。
　　1.2 研究对象
　　HCV RNA阳性血清标本80例（其中男性37例，女性43例），采自广州市传染病医院；另取30份健康体检者血清标本作为对照组。
　　1.3 检测方法
　　1.3.1 检测IgG
　　IgM双特异性免疫复合物捕捉法ELISA的操作过程 用0.1 mol/L，pH9.6的碳酸缓冲液将抗人IgG的羊IgG稀释至7.5 μg/mL，加入反应板，每孔0.1 mL，4 ℃18-24 h，用0.01 mol/L，pH 7.4 PBST洗涤3次，加入用生理盐水按1∶75稀释的血清标本，每孔0.1 mL，4 ℃18-24 h，同上洗涤；用含25%兔血清的PBST将HRP抗人IgM的羊IgG作1∶3 200稀释，每孔0.1 mL，37 ℃ 1 h，同上洗涤；加入TMBh3O2底物溶液，每孔0.1 mL，37 ℃避光反应45 min； 2 mol/L的h3SO4终止反应，最后在BIORAD 680全自动酶标仪 (美国产品)上测OD值。每块反应板分别以混合人血清和羊血清作阳阴性对照。
　　1.3.2 ALT测定方法 按试剂盒说明进行。
　　1.3.3 黄疸指数（BT）测定方法
　　按卫生部颁发的临床操作规程进行。
　　2 结果与分析
　　2.1 本ELISA法的特异性
　　2.1.1 阻断实验
　　随机取血清标本20份，同时设阻断组和对照组。 在加入HRP抗人IgM的羊IgG前，阻断组先加入用PBST按100 μg/mL稀释的抗人 IgM的羊IgG，对照组加入PBST，37 ℃ 1 h，其余操作步骤同前，最后按同份血清阻断孔与对照孔的测定结果来计算其阻断率。结果20 份标本的阻断率均大于50%。 　　2.1.2 替代实验
　　取猪、兔、鸭和牛血清代替人血清标本进行实验。 结果所有标本与作阴性质控的羊血清无异，其OD值均稳定在0.00～0.05之间。
　　2.2 ELISA的重复性
　　结果表明，本ELISA法的变异系数均小于10%。
　　2.3 HCV感染者IgG/IgMTCIC的检测
　　HCV RNA阳性血清IgG/IgMTCIC的±s为092±0.11，而健康人血清为0.65±0.08，前者显著高于后者（P&<0.01）。
　　2.4 HCV感染者IgG/IgMTCIC与ALT的关系
　　在80例HCV感染者中，ALT正常者21例，升高者59例。经相关分析，ALT与IgG/IgMTCIC无相关（r=0.18，P＞0.05）。
　　2.5 HCV感染者IgG/IgMTCIC与BT的关系
　　80例标本中，有58例检测了BT，其中BT正常者40例，升高者18例。经相关分析，BT与IgG/IgMTCIC无相关（r=016，P＞0.05）。
　　3 讨 论
　　本文采用抗人IgG的羊IgG为包被抗体，HRP抗人IgM的羊IgG 为指示抗体，建立了检测IgG/IgMTCIC的捕捉法ELISA。实验结果表明，本法特异性强，重复性好。采用本ELISA法对HCV感染者及健康人的IgG/IgMTCIC进行检测的结果表明，HCV感染者这类CIC的水平要明显高于健康人对照组，两者差异极显著(P&<0.01)，从而提示IgG/IgMTCIC在HCV感染者体内具有一定的病理意义。
　　由于IgG/IgMTCIC是机体IgG和IgM相结合的产物。从理论上来分析，它们的来源有两类，其一是变性抗体与其的抗抗体结合物， 其二是免疫网络学说中Ab1和Ab2的结合物。这种免疫复合物中的IgG和IgM，既可能是抗体或Ab1，也可能是抗抗体或Ab2。但无论何种情况，这种由两种免疫球蛋白组成的循环免疫复合物其意义均主要在于对体液免疫的调节［7］。因此，HCV感染者体内IgG/IgMTCIC水平的升高可能是体液免疫调节紊乱的重要指征。
　　谷丙转氨酶（ALT）和黄疸指数（BT）均为反映肝脏代谢功能的非特异性敏感指标。本文结果表明，在HCV感染者IgG/IgMTCIC 的水平与ALT或BT这两个指标均无明显相关（P&>0.05）。提示IgG/IgMTCIC与其他免疫复合物如抗原/抗体免疫复合物、抗体/补体免疫复合物和抗原/补体免疫复合物临床病理意义有所不同，他并直接不参与HCV感染过程中对肝功能的损伤作用。有趣的是IgG/IgMTCIC水平在ALT正常组反而稍高于升高组，这可能系病毒对机体免疫应答的抑制所至。
　　HCV感染引起的丙型肝炎常易于慢性化，并有自身免疫的倾向。国外也有报道丙肝患者体内总的免疫复合物有升高的趋势［8，9］。本文仅从IgG/IgMTCIC的角度，初步探讨了该类免疫复合物在HCV感染者体内理论及临床意义。由于免疫网络非常复杂，参与体液免疫调节的Ig/Ig双特异性免疫复合物具有多种不同的组合，理论上至少还可以存在IgG/IgATCIC、IgA/IgMTCIC、IgG/IgGTCIC、IgM/IgMTCIC和IgA/IgATCIC。在HCV感染者体内，究竟这些不同类型的双特异性免疫复合物各有何变化，值得进一步深入研究。
　　参考文献:
　　［1］彭宣宪，万雅各，张文军，等. 甲型肝炎的免疫球蛋白-补体循环免疫复合物［J］. 病毒学报，1995，11(3): 203.
　　［2］王三英，彭宣宪. 肺结核病的免疫球蛋白特异性激活补体类免疫复合物的检测［J］. 中国公共卫生学报，1995，14(6): 324.
　　［3］彭宣宪. 双特异性循环免疫复合物的研究进展［J］. 上海免疫学杂志，1996，16(5): 315.
　　［4］李思光，彭宣宪，张文军，等. IgM类HBsAg免疫复合物与乙肝肝损害关系初探［J］. 江西科学，1997，15(3): 154.
　　［5］周裕林，彭宣宪. 检测HBV DNA/Ig-双特异性循环免疫复合物的免疫捕捉法PCR［J］. 中国免疫学杂志，2000，16(2): 71.
　　［6］彭宣宪，王三英. 反应型双特异性免疫复合物的免疫生物学［J］. 厦门大学学报，2001，40(2): 620.
　　［7］王三英，杨天赐，彭宣宪. Ig/Ig 双特异性免疫复合物定量及免疫调节作用［J］. 中国公共卫生，2002，18(6 ): 712.
　　［8］SANSONNO D，DAMMACCO F. Hepatitis C virus，cryoglobulinaemia，and vasculitis: immune complex relations［J］. Lancet Infect Dis，2005，5(4): 227.
　　［9］LAPERCHE S，LE M N，SIMON N，et al. A new HCV core antigen assay based on disassociation of immune complexes: an alternative to molecular biology in the diagnosis of early HCV infection［J］. Transfusion，2003，43(7):958.