血清胱抑素C与健康人颈动脉斑块的关系

　　　　 作者：谷红霞 孙雪峰 张彬 傅博 黄大伟 杨聚荣 陈香美

【摘要】 目的 探讨健康人血清胱抑素C(CysC)与无症状颈动脉斑块的关系。方法 以随机整群抽样方式在北京15个社区通过问卷调查、检测血清CysC、常规及生化指标及体格检查、颈动脉超声及影像学检查，筛选出健康个体396例(男160例，女236例，年龄30～99岁)。5年后随访，重复上述检查，有全部资料者224例(男85例，女139例，年龄36～93岁)。肾小球滤过率(GFR)由CKDEPI公式估算。结果 颈动脉斑块组血清CysC高于无颈动脉斑块组〔(0.898±0.155)vs(0.772±0.139)mg/L〕(P<0.01)。Spearman相关分析发现颈动脉斑块与血清CysC、年龄相关(r=0.398，P<0.01;r=0.462，P<0.01)，Logistic回归分析显示CysC并非颈动脉斑块的独立危险因素。10岁年龄段分层，各层颈动脉斑块组与无颈动脉斑块组组间血清CysC无统计学差异(P>0.05)。根据5年前后斑块变化分为4组，1组：两次均无斑块组119例;2组：从有到无斑块组38例;3组：从无到有斑块组27例;4组：两次均有斑块组40例。单因素方差分析，2、3、4组5年前年龄、血清CysC浓度均较1组升高，3、4组5年前EPI GFR较1组低，5年前后血清CysC差值4组间无统学差异(P>0.05)。协方差分析调整年龄、性别、EPI GFR后，4组间无统计学差异(P>0.05)。结论 血清CysC与颈动脉斑块无确切关联，不能作为其预测指标。

【关键词】 胱抑素C;颈动脉;增龄;肾小球滤过率

　　【Abstract】 Objective To investigate the correlation analysis between serum cystatin C and carotid plaque in asymptomatic adults. Methods The ones on the data base of 396 healthy subjects (males 160 and females 236， 30～99 years old) were selected from 15 communities of Beijing， which in terms of questionnaire investigation， measurement of serum cystatin C， routine and biochemical indicator， physical examination， carotid artery ultrasound and imaging tests. 5 years later， the followup was carried out. There were 224 subjects (males 85 and females 139， age varies from 36 to 93 years old) being followed up， and the above checks were repeatedly performed. Results Serum cystatin C levels were higher in with carotid plaque group than in without carotid plaque group〔(0.898±0.155) vs (0.772±0.139)mg/L，P<0.01)〕. On Spearman correlation analysis， carotid plaque correlated positively to serum cystatin C and age (r=0.398， P<0.01; r=0.462，P<0.01); the Logistic regression analysis show that cystatin C was not the independent risk factor for carotid plaque. In subgroups stratified by age， the difference of serum cystatin C between with and without carotid plaque groups was disappeared. According to the change of carotid plaque before and after 5 years， the subjects were pided in to 4 groups. There were 119 subjects in group A of two times without carotid plaque， 38 subjects in group B of with to without carotid plaque， 27 inpiduals in group C of without to with carotid plaque， 40 subjects in group D of two times with carotid plaque. In analysis of the data in 5 years ago by one way analysis of variance， serum cystatin C levels in group B， C， D were respectively higher than those in group A， and levels of EPI GFR of group C， D were respectively lower than those in group A. In an analysis of covariance， after adjusted by age， gender and EPI GFR， the difference of serum cystatin C among 4 groups was disappeared(P>0.05). Conclusions There is no definite correlation between Serum cystatin C and carotid plaque， and serum cystatin C can not serve as indicators for carotid plaque.

　　【Key words】 Cystatin C; Carotid; Aging; Glomerular filtration rate

　 胱抑素C(CysC)是一种内源性半胱氨酸蛋白酶抑制剂，属于2型半胱氨酸蛋白酶抑制剂超家族，存在于所有类型细胞中。与血肌酐相比，血清CysC很少受年龄、性别、肌肉体积影响〔1，2〕，被认为是优于血清肌酐的肾小球滤过率(GFR)的标志。也有报道认为血清CysC可以预测未来心血管事件并与外周动脉粥样硬化相关〔3，4〕，而颈动脉是动脉粥样硬化的窗口。本研究旨在探讨血清CysC与颈动脉斑块的关系。

　　1 对象与方法

　　1.1 研究对象 采用随机整群抽样方法，选择北京市15个社区30岁以上自我评价健康居民，通过问卷方式了解调查对象营养状况及生活习惯;进行体格检查、检测血清CysC、血生化、血常规及尿常规、尿α1微球蛋白及β2微球蛋白、X线胸部正位片、腹部B超、心电图、心脏彩超检查。

　　1.1.1 研究对象入选标准 健康人群的选择是在SENIEUR草案的基础上〔5〕，增加了排除心、脑、肺、肾、肝等重要脏器疾病状态的标准，即谷草转氨酶≤40 U/L、谷丙转氨酶≤40 U/L、空腹血糖≤7.1 mmol/L、尿素1.8～7.5 mmol/L、肌酐50～133 μmol/L、血红蛋110～176 g/L、平均红细胞体积80～100 fl、尿常规正常，尿α1微球蛋白及β2微球蛋白正常;既往无心、脑、肺、肝、肾慢性疾病，目前无相应症状，血压<140/90 mmHg，心电图、X线胸部正位片、腹部B超、心脏彩超检查正常。

　　1.1.2 研究对象的排除标准 不满足入选标准，排除高血压、冠心病、糖尿病、慢性肾脏病、肿瘤、慢性阻塞性肺疾病、风湿性疾病等患者。

　　筛选出研究对象396例(男160例，女236例，年龄30～99岁)，根据是否有颈动脉斑块分为颈动脉斑块组和无颈动脉斑块组。5年后随访，复查上述检查，有全部资料者224例(男85例，女139例，年龄36～93岁)。

　　1.2 标本留取及检测 留取晨起空腹血20 ml、晨尿10 ml、24 h尿10 ml，记录24 h尿量。血液、尿液常规及生化指标立即送检，由中心临检、生化室统一检测。血清CysC、24 h尿α1微球蛋白及β2微球蛋白由本实验室用BN ProSpec 特种蛋白检测仪检测，血清CysC用颗粒增强散射比浊法(PENIA)检测。

　　1.3 心电图、心脏、血管彩超由心内科彩超室完成。

　　1.4 用CKDEPI公式估算GFR(EPI GFR)〔6〕 女性：≤62 μmol/L(0.7 mg/dl):GFR= 144×〔肌酐(mg/dl) /0.7〕-0.329×(0.993)Age;>62 μmol/L(0.7 mg/dl):GFR= 144×〔肌酐(mg/dl) /0.7〕-1.209×(0.993)Age。男性：≤80 μmol/L(0.9 mg/dl):GFR= 141×〔肌酐(mg/dl) /0.9〕-0.329×(0.993)Age;>80 μmol/L(0.9 mg/dl):GFR= 141×〔肌酐(mg/dl)/0.9〕-1.209×(0.993)Age。

　　1.5 统计学分析 数据的统计处理用SPSS l5.0统计软件。计量资料以x±s表示，两组间比较用t检验，颈动脉斑块与各指标的相关用Spearman相关分析，Logistics回归分析用于分析颈动脉斑块的危险因素，多组间两两比较用单因素方差分析，协方差分析(ANCOVA)用于分析调整EPI GFR、年龄、性别后多组间血清CysC的统计学意义，用GraphPad Prism 5.0作图。

　　2 结 果

　　2.1 5年前无颈动脉斑块组与有颈动脉斑块组各指标的基线水平 颈动脉斑块组年龄、血清CysC、总胆固醇(TC)、尿酸、低密度脂蛋白(LDLC)、收缩压、腰臀比高于无颈动脉斑块组(均P<0.05)，EPI GFR低于无颈动脉斑块组(P<0.01)，见表1。

　　2.2 5年前与颈动脉斑块相关的指标 颈动脉斑块与年龄、血清CysC、TC、TG、LDLC、尿素、肌酐(Cr)、UA腰臀比呈正相关(均P<0.05)，与EPI GFR呈负相关(P<0.01)，见表2。

　　2.3 以颈动脉斑块为应变量与各指标做Logistic回归分析 以颈动脉斑块为应变量，与性别、年龄、血清CysC、TC、TG、LDLC、尿素、Cr、UA、EPI GFR、腰臀比做Logistic回归分析，发现性别、年龄、UA、LCLC是颈动脉斑块的独立危险因素(P<0.05)，见表3。

　　2.4 第5年随访颈动脉斑块变化情况分组、各组5前血清CysC浓度、5年前后差值间关系分析 根据颈动脉斑块5年前后的变化分为4组，1组：两次均无斑块119例;2组：从有到无斑块38例;3组：从无到有斑块27例;4组：两次均有斑块40例。单因素方差分析，2、3、4组5年前血清CysC浓度、年龄较1组升高，3、4组5年前EPI GFR较1组高，5年前后血清CysC差值4组间无统计学差异，见表4。协方差分析调整年龄、性别、EPI GFR后，血清CysC浓度4组间无统计学差异，见表5。表1 5年前颈动脉斑块组与无颈动脉斑块组的基线水平(x±s)表2 5年前与颈动脉斑块相关的指标3 以颈动脉斑块为应变量与各指标做Logistic回归分析表4 颈动脉斑块转化分组分析5年前年龄、CysC浓度及、差值及EPI GFR比较(x±s)

　　2.5 年龄分层分析颈动脉斑块组与无颈动脉斑块组血清CysC差异 以10岁为年龄段分层分析，各层两组间血清CysC无统计学差异(P>0.05)，见表6。表5 协方差分析调整年龄、性别、EPI GFR后四组间血清CysC浓度比较表6 年龄分层分析颈动脉斑块组与无颈动脉斑块组血清CysC差异

　　3 讨 论

　　一直以来，血清CysC被视为GFR的标志物。近年来研究发现血清CysC与动脉粥样硬化(AS)有关。人们试图寻找血清CysC与AS性疾病间的关系，以确定血清CysC能否成为AS性疾病的标志。Noto等〔7〕研究发现，急性心肌梗死血清CysC较不稳定性心绞痛显著降低，在急性事件发生后1 w接近正常。但并不清楚是因为在急性事件发生前血清CysC已经下降而引起冠状动脉破裂，还是急性心肌梗死血清CysC仅仅是持续不到1 w的急性期反应。而Arpegard等〔3〕研究了45岁以上、有间歇性跛行史、休息时多普勒超声显像踝/肱指数(ABI)<0.9的103例男性外周AS患者，并以性别、年龄相匹配的健康人96例为对照，发现外周AS患者血清CysC较对照组高，并提出了血清CysC升高除与肾功能相关外，还能作为AS疾病的标志。

　　本研究分析了健康人颈动脉斑块与血清CysC的关系。首先将颈动斑块组与无颈动斑块组进行比较，发现颈动斑块组血清CysC升高，Spearman相关分析也显示血清CysC与颈动脉斑块相关，然而非条件Logistic回归分析年龄、性别、尿酸、LDLC是颈动脉斑块的独立危险因素，而血CysC被排除在外。由于血清CysC随年龄增加而升高〔8，9〕，以10岁年龄段分层分析，各层颈动脉斑块组与无颈动脉斑块组血清CysC无统计学差异，也证实颈动脉斑块与血清CysC无关，因此认为年龄是颈动脉斑块组血清CysC升高的混杂因素。分析5年前后斑块变化情况，两次均无颈动脉斑块组的年龄、血清CysC均较其他组低，从无颈动脉斑块到有颈动脉斑块组及两次均有颈动脉斑块组EPI GFR较两次均无颈动脉斑块组低。协方差分析调整年龄、性别、肾功能后，4组间无统计学差异，也说明年龄、性别、肾功能是颈动脉斑块血清CysC升高的混杂因素。

　　基础研究表明，动脉粥样硬化斑块中组织蛋白酶升高、CysC下降。体内基因敲除研究发现，组织蛋白酶K和S在细胞外基质降解中发挥重要作用，缺乏这些组织蛋白酶可使动脉粥样硬化斑块大小、斑块进展时间和弹性蛋白断裂的次数下降〔10，11〕。与正常动脉相比，AS部位组织蛋白酶K、S蛋白水平、组织蛋白酶S mRNA水平上升，组织蛋白酶K mRNA水平无统计学差异〔12〕。CysC是半胱氨酸蛋白酶抑制剂，对组织蛋白酶L、S、B和H有很高的抑制特性〔13〕。研究表明组织蛋白酶对AS的影响是由CysC来平衡的。人类动脉粥样硬化斑块中CysC蛋白水平是下降的〔14〕。应用CysC/apoE/小鼠研究表明，在缺乏CysC时，主动脉根部斑块大小增加或无变化，主动脉提取物中组织蛋白酶B、L和S增加〔15，16〕。因此颈动脉斑块组血清CysC升高不是由于斑块本身病变引起。

　　与Arpegard等〔3〕研究的外周AS患者血清CysC升高由AS所致的结论不一致，本研究结果显示，年龄是健康人群动脉粥样硬化组血清CysC升高的混杂因素。Arpegard等的多元线性回归中年龄没有进入模型，可能是由于人种不同，年龄对血清CysC的影响有统计学差异。炎症可影响AS的形成，Arpegard等在其模型中还引入了炎症指标，这也可能是导致AS在模型中权重增加而进入模型的原因。研究对象也有差别：本研究对象为健康人动脉粥样硬化斑块，而Arpegard等的研究对象为有间歇跛行史的男性患者。

　　本研究认为，虽然健康人颈动脉斑块组血清CysC升高，但经进一步分析颈动脉斑块组血清CysC升高并非颈动脉斑块引起，提示血清CysC与健康人颈动脉斑块无确切关联，不能作为其预测指标。

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