作者：徐佳，陈银宝，王辉，李勇，周艳，石丹萍，陈小娇，武骏，戴体俊
【摘要】 目的 观察七氟醚(svoflurance，Sev)与氯胺酮(ketamine，KT)合用对小鼠的镇痛、催眠作用。方法 120只小鼠随机分为3大组(n=40)，每大组再随机分为4小组(n=10)：生理盐水组(NS组)、七氟醚组(Sev组)、氯胺酮组(KT组)、七氟醚和氯胺酮合用组(Sev+KT组)。通过热板法和扭体法、催眠实验观察小鼠给药后的热板痛阈值(pain threshold in hot-plate test，HPPT)和扭体次数(writhing times，WT)、睡眠潜伏期和睡眠时间(sleeping time，ST)的变化。结果 七氟醚与氯胺酮合用能增大HPPT，减少WT，缩短睡眠潜伏期，延长ST。结论七氟醚与氯胺酮合用对小鼠能产生协同镇痛及催眠作用。
【关键词】 麻醉;镇痛;七氟醚;氯胺酮
Abstract: Objective To observe the analgesic and hypnotic effects of svoflurance combined with ketamine in mice.Methods 120 mice were randomly pided into 3 large groups (n=40)， with each large group further randomized into 4 small groups (n=10): normal saline (NS) group， sevoflurane (Sev) group， ketamine (KT) group and Sev + KT group. Techniques including hot-plate test， writhing test and hypnosis test were employed to evaluate the effects on the pain threshold in hot-plate test (HPPT)， the writhing times (WT)， the sleeping latency and the sleeping times (ST) in the mice subsequent to the treatment.Result The combined administration of sevoflurane and ketamine could increase the HPPT， decrease the WT， curtail the latency and extend the ST.Conclusion Sevoflurane combined with ketamine is able to exert analgesic and hypnotic effects.
Key words: analgesis; hypnosis; sevoflurane; ketamine
氯胺酮( ketamine， KT) 是常用的静脉麻醉药，也是惟一有显著镇痛作用的静脉麻醉剂。氯胺酮起效快、麻醉作用可靠，使用方便，同时价格低廉，对呼吸、循环抑制轻微，非常适用于临床麻醉和现场抢救。七氟醚(svoflurance， Sev)是一种新型的吸入麻醉药，具有麻醉诱导平稳迅速、维持平稳、苏醒快、麻醉深度易调控等优点，目前广泛用于各种年龄、各部位的大小手术，尤其适用于小儿和门诊手术[1]。临床上有多处报道：氯胺酮、七氟醚静吸复合可安全用于小儿全身麻醉及各种手术，不良反应发生率低[2-4]。但在动物实验中，两药合用罕见报道。本实验观察七氟醚与氯胺酮合用对小鼠的镇痛、催眠作用，以期对临床麻醉和急救提供动物实验依据。
1 材料和方法
1.1 实验动物 同一批次的昆明种小鼠120只，清洁级，徐州医学院实验动物中心提供。其中热板法(雌性)、扭体法(雌雄各半)、催眠实验(雌雄各半)各40只。
1.2 药品与仪器 吸入用七氟醚：上海恒瑞医药有限公司，批号：08061831;盐酸氯胺酮注射液：江苏恒瑞医药股份有限公司，批号：KH071001;YLS-6B智能热板仪：淮北正华生物仪器设备有限公司。
1.3 动物分组 按雌雄、体重进行分层随机区组设计，使各组小鼠平均体重、雌雄比例相似。热板法用小鼠40只[5]，分为4组(n=10)：生理盐水组(NS组)、Sev组、KT组、Sev+KT组。扭体法和催眠实验各用小鼠40只，分组与热板法相同。实验于每天下午14：00～16：00进行。
1.4 实验方法
1.4.1 热板法[5] 以用药前2次(2次间隔5 min)热板法痛阈(pain threshold in hot-plate test， HPPT)的平均值(选用5 s
1.4.2 扭体法[5] 动物数量及分组情况与热板法相同，小鼠均腹腔注射1%冰醋酸0.1 ml/10 g致痛。NS组致痛前5 min皮下注射胜生理盐水0.1 ml/10 g，Sev组致痛前6 min腹腔注射七氟醚 2 ml/kg，KT组致痛前5 min皮下注射氯胺酮 20 mg/kg，Sev+KT组致痛前6 min腹腔注射七氟醚 2 ml/kg，致痛前5 min皮下注射氯胺酮 20 mg/kg。记录致痛后15 min内各组小鼠的扭体次数(writhing times， WT)。
1.4.3 催眠实验 Sev组腹腔注射七氟醚2.5 ml/kg，KT组皮下注射氯胺酮 30 mg/kg(催眠剂量为60 mg/kg)，Sev+KT组在腹腔注射七氟醚 2.5 ml/kg 1 min后皮下注射氯胺酮30 mg/kg。将3组小鼠在用药后，放入瓶盖打孔的棕色广口瓶中，并记录小鼠从用药后到翻正反射消失的时间，即潜伏期;以及到翻正反射恢复的时间，简称睡眠时间(sleeping time，ST)。
1.5 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件进行处理，所有计数资料均以±s表示，HPPT、WT、睡眠潜伏期和ST组内比较采用配对t检验，组间比较采用单因素方差分析和q检验，入睡率采用χ2 检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 热板法 与基础痛阈比较，NS组、Sev组、KT组自给药后各时点上的HPPT均无明显改变(P>0.05);Sev+KT组给药后10～60 min的HPPT均增加(P<0.01)，90 min的HPPT无明显改变(P>0.05)。与Sev+KT组比较，NS组、Sev组给药后10～45 min的HPPT均减小(P<0.01)，60 min和90 min的HPPT无明显差异(P>0.05); KT组给药后10、20、30 min的HPPT均减小(P<0.01)，45、60和90 min的HPPT无明显差异(P>0.05)。表明七氟醚与氯胺酮合用可增强小鼠的镇痛作用。见表1。表1 腹腔注射七氟醚联合皮下注射氯胺酮对小鼠的镇痛作用与基础痛阈比较：△△P<0.01;与Sev+KT组比较：**P<0.01
2.2 扭体法 与NS组比较，Sev组和Sev+KT组小鼠的WT减少(P<0.05或P<0.01)。与Sev+KT组比较， NS组、Sev组、KT组小鼠的WT均增多(P<0.05或P<0.01)。表明七氟醚与氯胺酮合用可增强小鼠的镇痛作用。见图1。
2.3 催眠实验 NS组、Sev组和KT组3组小鼠均单用一种药，无一入睡，Sev+KT组有8只入睡，入睡率80%(P<0.01)。Sev+KT组的潜伏期为(18.8±22.4)min，ST为(40.2±25.8)min。图1 腹腔注射七氟醚联合皮下注射氯胺酮对小鼠的镇痛作用与NS组比较：★P<0.05，★★P<0.01;与Sev+KT组比较：△P<0.05，△△P<0.01
3 讨 论
本研究结果表明， 七氟醚与氯胺酮合用，可增加小鼠热板法痛阈值，减少扭体次数，缩短睡眠潜伏期，延长睡眠时间。
氯胺酮是NMDA 受体的非竞争性阻断药，可通过NMDA受体、阿片受体，抑制单胺类神经递质的再摄取，以及对Na+、K+、Ca2+离子通道的抑制作用，选择性阻滞脊髓网状束对痛觉信号的传入，阻断疼痛向丘脑和皮质区传播，产生镇痛作用[6]，氯胺酮的催眠作用与NMDA受体也有关[7-8]，氯胺酮可使NMDA受体活性有所下降，进而使内源性NMDA作用有所减弱[9]，引起催眠。腹腔或皮下注射吸入麻醉药同样能达到催眠、镇痛作用[10-11]。有研究发现，吸入麻醉药的催眠作用主要与大脑皮质部位的活动有关， 而镇痛作用主要是通过脊髓介导[12]，脊髓的NMDA受体激活可拮抗吸入麻醉药的镇痛作用[13]。可见七氟醚与氯胺酮在影响中枢系统功能的机制上可能存在协同作用。
七氟醚与氯胺酮静吸复合麻醉在临床上有多处报道，安全可靠[2-4]。本实验我们在小鼠身上发现两药联合之后起效也非常迅速， 镇痛催眠作用比起单独用药时作用显著。另外，在预实验中，我们发现，七氟醚1.2 ml/kg与氯胺酮12 mg/kg合用以及七氟醚1.5 ml/kg与氯胺酮15 mg/kg合用时对小鼠镇痛作用不明显，七氟醚2 ml/kg与氯胺酮20 mg/kg合用时对小鼠催眠作用也不明显，结果无统计学意义。因此在动物试验中，七氟醚与氯胺酮联合应用剂量和相互作用机制尚需进一步探讨。
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