作者：于昉 杨清 王轶楠 李楠 台桂香 柳忠辉
【摘要】 目的探讨激活素A(Activin A)在肝硬化患者外周血及肝组织中的表达水平。方法采集临床诊断肝硬化患者80例及健康对照者60例，ELISA方法检测血清Activin A水平，免疫组织化学染色观察肝组织Activin A表达。结果肝硬化患者AL T、AST水平均高于健康对照组，同时外周血Activin A水平升高，与健康对照组比较差异显著(P<0.01);肝硬化患者外周血Activin A水平随肝组织病理分期增加而升高。免疫组织化学染色显示，肝硬化患者肝组织Activin A表达水平也明显升高。结论肝硬化患者外周血Activin A可能来源于肝纤维化组织，测定外周血Activin A水平有助于辅助诊断肝硬化。
【关键词】 肝硬化;激活素 A;酶联免疫测定;免疫组织化学
【Abstract】ObjectiveTo study the levels of activin Ain the peripheral blood and liver of patients with liver cirrhosis.MethodsThe diagnosed 80 patients withliver cirrhosis and 60 healthy cases as control subjects were collected， the serum activin A level was detected by ELISA and the expression of activin A in theliver was observed by immunohistochemical staining.ResultsThe levels of ALT and AST in cirrhosis patients were higher than those in control group， and the level of activin A in serum of cirrhosis patients was significantly elevated compared with that of the control group. The level of activin A in serum of cirrhosispatients was increased with the liver pathological stage. The expression of activin A in cirrhosis patients′ liver was increased markedly by immunohistochemi stry.ConclusionsActivin A of cirrhosis patient′s peripheralblood is derived fro m liver fibrosis tissues. The measurement of the activin A level in peripheralblood maybe help to diagnose the liver cirrhosis.
【Key words】Liver cirrhosis; Activin A; ELISA; Immunohistochemistry
激活素A(Activin A)作为转化生长因子(TGF)-β超家族成员，通过抑制肝细胞的DNA合成来影响肝细胞的功能，同时还能刺激肝星形细胞合成细胞外基质，参与肝纤维化的形成〔1~3〕。已有研究显示Activin A在病毒性肝炎中的表达升高，并且TGF-β诱导肝纤维化也部分依赖内源性Activin A的介导作用。因而，Activin A与肝细胞功能的关系日益受到重视〔3〕。但是，Activin A在人肝组织中的表达情况以及与人肝纤维化及肝硬化程度的关系仍缺乏明确报道。本研究通过检测肝硬化患者血清酶变化、肝脏组织病理损伤程度和Activin A在外周血及组织的表达水平，探讨Activin A与肝硬化的关系。
1材料与方法
1.1研究对象肝硬化患者80例，年龄50~70岁，来自吉林大学第一医院和吉林省医院住院病人。肝组织病理标本由吉林省肿瘤医院病理科及吉林大学第一医院病理科提供。健康对照者60例为吉林大学第一医院健康体检者。
1.2主要试剂Activin A ELISA检测试剂盒及抗Activin A单克隆抗体购自R&D，谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.3免疫组织化学染色肝组织经甲醛固定24 h，常规石蜡包埋、切片。采用抗Activin A单克隆抗体进行常规免疫组织化学染色，光学显微镜观察染色结果。
1.4血清转氨酶测定取血清标本，按试剂盒说明书加入试剂，A450 nm测光吸收值。绘制标准曲线，根据标准曲线求得样品值(U/L)。
1.5统计学处理计量数据以x±s表示，采用SPSS10.0软件，血清转氨酶及Activin A组间比较采用t检验。
2结果
2.1肝硬化患者血清Activin A、ALT、AST水平本研究显示肝硬化患者外周血ALT及AST水平明显高于对照组(P<0.01);同时可见Activin A水平也明显升高，与对照组比较差异显著(P<0.01)。见表1。
2.2肝活检病理分期与血清Activin A水平关系肝病理S0~S1期患者外周血Activin A水平〔(1.52±0.48)μg/L〕与健康对照组〔(1.09±0.31)μg/L〕比较轻度升高;Activin A水平随病理分期逐步上升，S2期Activin A水平为(3.16±0.87)μg/L，S3~S4期为(5.81±1.68)μg/L，提示血清ActivinA水平变化与肝组织病理改变相关。
2.3肝硬化患者肝组织Activin A表达水平图1A显示正常肝组织肝小叶结构清晰，而肝硬化组织的肝小叶被分隔成大小不等的肝细胞团，汇管区扩大，呈典型的纤维组织样变化(图1C)。免疫组织化学染色结果显示正常肝组织在肝门脉区有部分细胞呈Activin A阳性表达(图1B)，而在肝硬化的整个肝组织Activin A表达均呈强阳性。表1酒精性肝硬化患者血清Activin A、ALT及AST水平图1免疫组织化学染色观察肝组织Activin A表达
3讨论
肝硬化是慢性肝病死亡的主要原因，肝硬化的不同时期治疗方法不同，取得的效果也不同，所以明确肝硬化的分期对于指导治疗有重要意义。肝纤维化、肝硬化的分期现在是采用肝组织活检进行判定，但由于费用较高及存在创伤性，很难被患者接受，其局限性导致临床研究者不断寻找替代方法来为肝病进行分期。激活素是近年发现的具有广泛生物学作用的致炎因子之一。作用于肝脏时，它抑制肝细胞的再生，诱导细胞凋亡，刺激星形细胞及肝窦内皮细胞生成细胞外基质，参与纤维化的形成4〕。在肝纤维化及肝硬化时，Activin A的水平明显增高〔5，6〕。急性肝损伤时，Activin A可以促进纤连蛋白的产生，促进肝星形细胞的活性。研究表明在大鼠肝纤维化、肝硬化形成时Activin A表达水平明显升高〔6，7〕。Activin A还能刺激小鼠肝细胞系Hep1-6分泌细胞外基质〔8〕。这些研究揭示了Activin A在肝纤维化过程中的重要作用。本研究结果显示，Activin A伴随肝损伤指标ALT及AST水平在肝硬化患者外周血中的升高，肝硬化患者外周血Activin A水平也明显升高，提示Activin A水平变化与肝损伤程度相关。研究同时对照肝活检病理分期，发现伴随肝硬化分期的升高，患者外周血Activin A水平也逐渐升高，提示Activin A水平变化还与患者肝组织病理分期相关。这一结果与Yndestad等〔9〕的研究结果相一致。免疫组化染色进一步观察发现，在正常肝组织中，ActivinA表达水平弱阳性，而在肝硬化肝组织中Activin A表达强阳性，提示肝硬化患者外周血Activin A水平升高，可能来源于肝硬化肝组织分泌的Activin A。Activin A在肝硬化肝组织中的高表达，可能进一步加重肝脏损伤，如可以刺激星形细胞分泌细胞外基质，促进肝脏纤维化、肝硬化的进展，对肝实质细胞的抑制可以阻止肝脏再生。因此，如果能够下调Activin A表达，或阻断Activin A信号传导通路，对改善和治疗肝硬化均具有重要意义。综上所述，肝硬化患者外周血Activin A可能来源于肝硬化组织产生，其水平测定有助于辅助诊断肝硬化，其可能成为临床诊断、治疗和判断预后的良好指标。
参考文献
1张红军，台桂香，杨清，等.激活素在肝纤维化行程中的作用〔J〕.临床肝胆病杂志，2007;23(3)：232-4.
2Gressner AM，Weiskirchen R.Modern pathogenetic concepts of liver fibrosis suggest stellate cells and TGF-beta as major players and therapeutic targets〔J〕.JCell Mol Med，2006;10(1)：76-9.
3Rodgarkia-Dara C，Vejda S，Erlach N，et al.The Activin axis in liver biology and disease〔J〕.Mut Res，2006;613(1)：123-37.
4Patella S，Phillips D，de Kretser D，et al.Characterization of serum Activin-A and follistatin and their relation to virological and histological determinants in chronic viral hepatitis〔J〕.J Hepatol，2001;34()：576-83.
5Bleser D，Niki PJ，Xu T，et al.Localization and cellular sources of activinsin normal and fibrotic rat liver〔J〕.Hepatology，1997;26()：905-12.
6Sugiyama M，Ichida T，Sato T，et al.Expression of Activin A is increased incirrhotic and fibrotic rat livers〔J〕.Gastroenterology，1998;114(4):550-8.
7黄新，李定国，陆汉明，等.激活素和卵泡抑素mRNA在肝纤维化形成过程中的作用〔J〕 .中华肝脏病杂志，2002;10(2):85-9.
8Zhang HJ，Tai GX，Zhou J，et al.Regulation of activin receptor-interactingprotein 2 expression in mouse hepatoma Hepa1-6 cells and its relationship with collagentype IV〔J〕.World J Gastroenterol，2007;13(41)：5501-5.
9Yndestad A，Haukeland JW，Dahl TB，et al.A complex role of Activin A in non-alcoholic fatty liver disease〔J〕.Am J Gastroenterol，2009;104(9)：2196-205.