莫索尼定滴眼对家兔葡萄膜巩膜途径房水外流的作用及机制

　　　　 作者：杨建刚，崔丽珺，权彦龙，王肖华，赵世平

【摘要】 目的 观察I1受体激动剂莫索尼定滴眼对葡萄膜巩膜途径各部位荧光强度的变化，研究莫索尼定对葡萄膜巩膜途径房水外流的作用机制。方法 莫索尼定单侧滴眼，示踪剂FITCBSA双眼前房注入，2-10h不同时点冰冻切片，荧光显微镜下观察葡萄膜巩膜途径各部位的荧光强度；prazosin(α1受体拮抗剂)、yohimbine(α2受体拮抗剂)和efaroxan(I1受体拮抗剂)前处理30min，莫索尼定滴眼，观察葡萄膜巩膜途径荧光变化。结果 莫索尼定滴眼荧光显微镜观察，双侧葡萄膜巩膜途径荧光强度明显增强，以睫状体和脉络膜上腔较强。prazosin前处理组各部位与莫索尼定比较荧光强度无显著性差异，yohimbine和efaroxan前处理组双侧荧光强度各部位均较莫索尼定组减弱，差异有统计学意义(P<0.01)，yohimbine较efaroxan前处理组荧光更弱。结论 莫索尼定可增加房水经葡萄膜巩膜途径外流，与prazosin产生协同作用，yohimbine和efaroxan均可抑制双侧葡萄膜巩膜途径房水外流的增加，yohimbine的抑制作用更显著，说明葡萄膜巩膜途径房水外流主要由α2受体介导，I1受体也产生作用。

【关键词】 莫索尼定；咪唑啉受体；葡萄膜巩膜途径；房水；家兔

　　ABSTRACT: Objective To investigate the changes of uveoscleral pathway by an I1 receptor agonist， moxonidine， and with pretreatment of antagonists topical administration， and to study the mechanism that moxonidine improves uveoscleral outflow. Methods Moxonidine was administered unilaterally and topically to rabbits and with pretreatment of the antagonists， namely， prazosin， yohimbine and efaroxan. FITCBSA， a tracer agent， was injected into the anterior chamber after moxonidine treatment or with pretreatment of the antagonists. Frozen sections were undertaken at different time points between 2 to 10h. Fluorescence intensity was observed in the sites of uveoscleral pathway in the sections by fluorescence microscopy. Results Bilateral fluorescence intensity treated with moxonidine was more intense than that with placebo， and the most intense regions of fluorescence were ciliary body and superchoroidal space. Fluorescence intensity by prazosin pretreatment was not significantly different compared to that by moxonidine， while yohimbine and efaroxan pretreatment decreased the intensity compared with moxonidine (P<0.05). Yohimbine was more significant effectively than efaroxan. Conclusion Topical administration of moxonidine increased uveoscleral outflow. Prazosin pretreatment produced the synergy with moxonidine， whereas yohimbine and efaroxan inhibited the effect of moxonidine. The inhibition by yohimbine was more significant in uveoscleral pathway. It indicates that the mechanism of moxonidine in uveoscleral pathway is firstly moderated by α2 receptor， and then I1 recptor.

　　KEY WORDS: moxonidine; imidazoline receptor; uveosceleral outflow; aqueous humor; rabbit

　　可乐定类药物apraclonidine、brimonidine等的降眼压作用已被明确证实[1]，通过对α2受体的激动作用，抑制房水生成和增加葡萄膜巩膜途径的流出产生降眼压效应[2]。而自Bousquet[3]首次提出咪唑啉受体的假设，经大量的研究证实，此类药物首先通过位于延髓腹外侧头区(RVLM)的一种特殊受体——咪唑啉受体(imidazoline receptor)介导而产生作用。
　　
　　莫索尼定(moxonidine， MOX)是可乐定类药物的衍生物，在中枢通过咪唑啉1型受体(I1受体)对眼压调节起主要作用，而对中枢α2受体作用较小，因此被称为I1受体激动剂[3]。本实验应用FITCBSA为示踪剂，观察莫索尼定滴眼对家兔葡萄膜巩膜途径房水外流的改变，并应用α1受体拮抗剂prazosin(PZ)、α2受体拮抗剂yohimbine(YH)和I1受体拮抗剂efaroxan(EF)前处理，研究莫索尼定滴眼降眼压在葡萄膜巩膜房水外流途径的受体作用机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 健康兔50只，体重2.0-2.5kg。MOX和PZ粉剂分别由陕西省医药工业研究所和美国纽约Pfizor实验部提供，YH和EF由美国Sigma公司生产，实验当日用无菌蒸馏水分别配制成0.5、1、5g/L和5g/L的滴眼液，每次滴眼50μL。

　　1.2 葡萄膜巩膜途径荧光强度测定 兔随机分2组(每组10只)，莫索尼定组和对照组表面麻醉后分别用MOX和生理盐水(NS)盲法单侧滴眼，滴眼后1.5h氯氨酮全身麻醉(25mg/kg)，微量进样器抽取FITCBSA 5μL于颞上方角巩膜缘注入处理眼前房，于2、4、6、8和10h分别摘除2只兔双侧眼球。子午线冰冻切片，每只眼球切片6张。荧光显微镜下观察葡萄膜巩膜各部位荧光强度。荧光等级判断标准规定如下，无荧光：-，微弱荧光：+，明亮荧光：，耀眼荧光：。
　　
　　拮抗剂组分别用PZ、YH和EF单侧滴眼前处理，30min后MOX同侧滴眼，其余处理同莫索尼定组和对照组。

　　1.3 统计学处理 应用SPSS12.0软件进行统计学分析，采用成组设计多样本比较的秩和检验分析葡萄膜巩膜途径的荧光变化，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 莫索尼定对葡萄膜巩膜途径荧光强度的改变 莫索尼定滴眼葡萄膜巩膜途径各部位荧光强度不同，双眼均以睫状体和脉络膜上腔荧光较强，其次为脉络膜，巩膜荧光较弱。与对照组比较，在双眼各部位荧光强度均显示差异有统计学意义(P<0.01)，葡萄膜巩膜途径荧光强度2h即开始增强，这种增强的荧光持续至10h(图1)。

　　图1 莫索尼定和生理盐水滴眼后6h处理眼葡萄膜巩膜途径荧光比较（略）

　　Fig.1 Comparison of fluorescence in uveoscleral outflow at 6h between MOX and placebo

　　A: NS; B: MOX administration

　　2.2 拮抗剂前处理荧光强度的变化 处理眼中，PZ前处理组与莫索尼定比较葡萄膜巩膜途径各部位荧光差异无统计学意义。PZ组2、4h荧光较莫索尼定强，6h后两组荧光强度相似。EF和YH前处理组与莫索尼定组比较各部位荧光强度降低，均显示显著性差异(P<0.01)。YH组与安慰剂组荧光强度差异无统计学意义，EF组荧光增强，差异有统计学意义(P<0.01，图2，表1)。
　　
　　对侧眼与莫索尼定比较，PZ前处理组各部位差异无显著性意义(P>0.05)，EF和YH前处理组荧光强度降低，差异均显示有统计学意义(P<0.01，表2)。YH组与安慰剂组比较，各部位荧光强度差异无统计学意义，EF组睫状体(P<0.05)、巩膜(P<0.01)荧光增强，差异存在统计学意义，脉络膜上腔、脉络膜荧光差异无统计学意义。

　　表1 处理眼MOX与拮抗剂组葡萄膜巩膜途径各部位荧光强度比较（略）

　　Table 1 Comparison of the frequency of fluorescence intensity in each site of ipsilateral uveoscleral pathway between MOX group and antagonist group

　　表2 对侧眼MOX与拮抗剂组葡萄膜巩膜途径各部位荧光强度比较（略）

　　Table 2 Comparison of the frequency of fluorescence intensity in contralateral uveoscleral pathway between MOX group and antagonist group

　　图2 各拮抗剂前处理6h处理眼葡萄膜巩膜途径荧光强度比较（略）

　　Fig.2 Comparison of fluorescence in uveoscleral outflow at 6h in antagonist group

　　A: PZ pretreated; B: EF pretreated; C: YH pretreated with MOX administration

　　3 讨论
　　
　　莫索尼定对中枢I1受体有强烈的选择性和高亲合力，对中枢突触前α2受体为完全激动剂，但亲和力低。Campbell等用套管将莫索尼定分别注入单侧RVLM 区，能明显降低双侧眼压，I1受体拮抗剂EF可抑制莫索尼定诱导的低眼压效应，而α2受体拮抗剂rauwolscine的抑制作用不显著，说明中枢的眼压调节主要在RVLM区，由I1受体介导。用EF和rauwolscine前侧脑室注入，可明显抑制莫索尼定的低眼压效应，EF的抑制作用比rauwolscine明显。说明中枢I1受体较α2受体作用更明显[45]。
　　
　　临床研究发现许多降眼压药物都存在增加房水经葡萄膜巩膜途径排出的作用，如前列腺素衍生物、brimonidine等。本实验通过荧光显微镜观察，莫索尼定能明显增加双侧葡萄膜巩膜途径的荧光强度，维持时间达10h，尤以睫状体及脉络膜上腔为著，说明莫索尼定可增加房水经葡萄膜巩膜途径的外流。
　　
　　莫索尼定可抑制虹膜睫状体上交感神经去甲肾上腺素(NE)的释放，并抑制睫状上皮cAMP的累积。莫索尼定在眼前节可能存在两种作用方式：中枢性及外周性作用。莫索尼定可能通过I1受体及α2受体抑制交感神经元功能，继而抑制睫状体NE的释放及cAMP的分泌[6]。I1受体与前列腺素释放偶联，而前列腺素可通过扩张睫状肌组织间隙，利于房水排出。

　　采用PZ前处理后双侧荧光强度未减弱，反而增强，说明莫索尼定和PZ均能增加葡萄膜巩膜途径房水外流。这与PZ有明显降眼压的作用，其机理为增加房水经葡萄膜巩膜途径的外流的研究结果相符。莫索尼定和PZ的作用机制不同，分别激动α1受体和α2/I1受体产生作用。6h前可能主要表现为PZ的作用，6h后主要为莫索尼定的作用。YH和EF前处理后均可抑制莫索尼定诱导的双侧葡萄膜巩膜途径的荧光强度，说明α2受体和I1受体均可调节莫索尼定的葡萄膜巩膜途径外流，但EF为部分抑制莫索尼定的葡萄膜巩膜途径房水外流，YH为完全抑制作用。三种拮抗剂抑制作用的强弱为YH>EF>PZ，α2受体较I1受体作用更重要，说明葡萄膜巩膜途径中莫索尼定对α2受体的选择性更强。
　　
　　用可乐定滴眼可减弱高眼压鼠缺血再灌注造成的视网膜内层变薄和ERG中b波波幅，rauwolscine而非AGN192403(I受体拮抗剂)可抑制这种作用[7]。应用I1受体激动剂rilmenidine猫瞳孔产生散大作用，这种作用可被高选择性α2受体拮抗剂RS79948抑制[8]。上述实验与本实验结果结合，说明此类药物的眼部外周作用主要为α2受体，其次才为I1受体。
　　
　　咪唑啉受体作为一种新发现的受体，其作用机制目前还未充分认识，要揭示莫索尼定和咪唑啉受体的作用机制，还需要进一步的实验研究。

参考文献

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　　[3]Parkin ML， Godwin SJ， Head GA. Importance of imidazolinepreferring receptors in the cardiovascular actions of chronically administered moxonidine， rilmenidine and clonidine in conscious rabbits [J]. J Hypertens， 2003， 21:167178.

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　　[7]Chao HM， Osborne NN. Topically applied clonidine protects the rat retina from ischaemia/reperfusion by stimulating αadrenoceptors and not by an action on imidazoline receptors [J]. Brain Res， 2001， 904:126136.

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