作者：廖婷婷，姚钢炼，周琳，袁浩峥，李美如，桂保松
【摘要】 目的 观察氧化苦参碱对慢性肾脏病(CKD)患者血清转化生长因子- β1(TGF-β1)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)的影响，探讨其在肾间质纤维化发生发展过程中的作用和治疗价值。方法 选取健康对照者10例、慢性肾脏病患者40例，根据肾小球滤过率(GFR)分为轻度肾损害组(GFR<90 mL/min·1.73m2， CKDⅠ)、中重度肾损害组(GFR<60 mL/min·1.73m2， CKDⅡ)，再分层随机抽样，分为常规治疗组和氧化苦参碱组。利用双抗体夹心酶联免疫吸附法分别检测各研究对象治疗前、后血清TGF-β1、ColⅢ含量，采用t检验比较两组TGF-β1、ColⅢ水平的差异。结果 氧化苦参碱组TGF-β1、ColⅢ含量显著低于常规治疗组(P<0.05)。结论 氧化苦参碱可能通过下调TGF-β1、ColⅢ水平，减少ECM沉积，从而达到防止肾间质纤维化的作用。
【关键词】 转化生长因子- β1(TGF-β1)；Ⅲ型胶原(ColⅢ)；慢性肾脏病；肾间质纤维化；氧化苦参碱
ABSTRACT: Objective To study the effects of oxymatrine on serum TGF-β1 and ColⅢ levels in patients with chronic kidney disease (CKD) and illuminate the mechanism of renal interstitial fibrosis and treatment. Methods Totally 40 patients were pided into 2 groups according to GFR level: CKDⅠ group and CKDⅡgroup. Then each group was pided into 2 subgroups stratifiedly and randomly: conventional group and oxymatrine group. ELISA was employed to measure TGF-β1 and ColⅢ activities in the plasma samples of 40 CKD patients and 10 control subjects. Results The levels of TGF-β1 and ColⅢ were higher in conventional group than in oxymatrine group (P<0.05). Conclusion Oxymatrine could degrade renal interstitial fibrosis by decreasing TGF-β1 and ColⅢ levels and reducing ECM deposit.
KEY WORDS: transforming growth factor-β1(TGF-β1); collagen Ⅲ (ColⅢ); chronic kidney disease; renal interstitial fibrosis; oxymatrine
肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis)是多种原因所致肾脏疾病进展至终末期肾衰竭的共同病理特征［1］，其发病率高，严重危及人类健康。其病理过程与细胞外基质(extracellular matrix， ECM)的合成和降解失衡、大量积聚有关。大量研究证明，转化生长因子- β1(transforming growth factor-β1， TGF-β1)是各种内源性和外源性刺激引起正常组织纤维化发生的主要细胞因子［2］。Ⅲ型胶原(collagen Ⅲ， ColⅢ)属间质胶原蛋白，它不仅是肾间质的主要胶原成分，也是纤维化形成中的重要ECM成分。氧化苦参碱具有抗心律失常、抗炎、抗纤维化、抗肿瘤及免疫调节等诸方面的重要药理作用［3］，特别是其抗组织纤维化方面的作用受到了极大的关注，但未见用于治疗肾间质纤维化方面的报道。本研究通过观察氧化苦参碱对慢性肾脏病患者血清TGF-β1、ColⅢ的影响，探讨其在肾间质纤维化发生发展过程中的作用和治疗价值。
1 资料与方法
1.1 研究对象及分组
所有病例均来自我院肾病内科门诊和住院的非透析患者，均符合NKF-K/DOQI诊断标准［4］，实验前2周内均除外肝病、肿瘤及泌尿系统、呼吸系统感染，及其他器官纤维化等疾患。
根据肾小球滤过率(glomerular filtration rate， GFR)分为轻度肾损害组(GFR<90 mL/min·1.73 m2， CKDⅠ)和中重度肾损害组(GFR<60 mL/min·1.73 m2， CKDⅡ)，再从CKDⅠ、CKDⅡ分层随机抽样，分为常规治疗组和氧化苦参碱组。常规治疗组，男性8例，女性12例，平均年龄(53.70±11.4)岁，平均血尿素氮(11.25±4.72)mmol/L，血肌酐(242.28±100.49)μmol/L，GFR(46.96±10.77)mL/min·1.73m2；氧化苦参碱组，男性10例，女性10例，平均年龄(54.40±12.0)岁，平均血尿素氮(11.93±4.56)mmol/L，血肌酐(247.23±104.31)μmol/L，GFR(45.22±11.36)mL/min·1.73 m2。两组患者的平均年龄、病程、原发病、症状与体征基本相同，血尿素氮、血肌酐、GFR等指标经统计分析无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。健康对照组，来自我院健康职工，其中男5例，女5例，平均年龄(52.3±10.2)岁。
1.2 治疗方法
常规治疗组给予病因治疗。血尿素氮、肌酐升高者给予低蛋白饮食；高血压患者另给予洛汀新(盐酸贝那普利，10 mg，每日1次)口服，单用洛汀新降压效果差时加用钙拮抗剂拜新同(硝苯地平控释片，30 mg，每日1次)上午8时顿服；贫血患者根据贫血情况予以促红细胞生成素(100-150 u/kg·周)皮下注射，富血素、叶酸口服及维生素B12肌肉注射等对症治疗。氧化苦参碱组在获得患者知情同意后，在常规治疗组基础上加用氧化苦参碱治疗。以治疗人肝脏纤维化的剂量为基础，按药理常用剂量［5］：氧化苦参碱注射液(江苏正大天晴药业有限公司，商品名天晴复欣)600 mg/100 mL静脉滴注，每日1次，连用14 d，继予氧化苦参碱胶囊(江苏正大天晴药业有限公司，商品名天晴复欣胶囊)0.2 g，每日3次，口服6周，总疗程共8周。
1.3 TGF-β1及ColⅢ含量的测定
所有患者及对照组均于清晨空腹抽取肘静脉血6 mL，其中2 mL以2 500×g离心3 min分离血清，-20 ℃冻存待检。采用双抗体夹心ELISA法测定TGF-β1及ColⅢ，试剂盒均为美国Biotec公司产品。余4 mL分送血常规、肝功能及血尿素氮、肌酐等检查。
1.4 统计学处理
采用SPSS12.0软件，所有数据均采用均数±标准差(±s)表示，组间比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 实验完成情况
氧化苦参碱组入组20例，脱落3例；常规治疗组20例，脱落1例。
2.2 治疗8周后肾功的变化
治疗前，常规治疗组和氧化苦参碱组肾功能比较无显著性差异(P>0.05)。治疗8周后，两组肾功能较前改善但并无显著性差异(P>0.05)，氧化苦参碱组肾功能改善较常规治疗组相对明显，但无统计学意义(表1)。表1 治疗前、后两组肾功能的比较（略）
2.3 治疗前、后两组血清TGF-β1、ColⅢ含量的比较
治疗前，常规治疗组和氧化苦参碱组血清TGF-β1、ColⅢ的含量分别为(1258.37±354.56)pg/mL、(19.21±7.25)ng/mL和(1283.36±361.27)pg/mL、(20.02±7.33)ng/mL，比较无显著性差异(P>0.05)。
治疗8周后，常规治疗组血清TGF-β1、ColⅢ水平较治疗前有所下降，但无显著性差异(P>0.05)；氧化苦参碱组TGF-β1、ColⅢ水平较治疗前显著下降(P<0.05)。与常规治疗组比较，氧化苦参碱组TGF-β1、ColⅢ 水平显著下降(P<0.05，表2)。表2 两组治疗前、治疗8周后血清TGF-β1、ColⅢ比较（略）
3 讨 论
肾间质纤维化是指由多种原因引起的ECM成分在肾间质内过度沉积。研究显示，TGF-β1在肾组织的纤维化过程中有着十分重要的作用［6］。TGF-β1在促进肾脏纤维化过程中的作用主要包括以下几方面［7］：①促进ECM产生；②通过减少基质金属蛋白酶(MMPs)表达，促进纤溶酶激活抑制剂和组织金属蛋白酶抑制剂的合成来减少ECM的降解；③刺激ECM受体-整合素(integrin)的合成，包括调节基质-细胞、细胞-细胞黏附的亚型，使细胞黏附于ECM，而富含ECM的基底膜也作用于细胞调控TGF-β1的产生；④刺激成纤维细胞的增生；⑤TGF-β1生物放大效应，即损伤部位释放TGF-β1可诱导细胞产生更多的TGF-β1。
TGF-β1可促进Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达，且在一定浓度范围内，Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA的表达量与TGF-β1浓度成正相关；在6-48 h内与时间呈现正相关［8］。Isaka等［9］把TGF-β1反义寡核苷酸转染到单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质成纤维细胞，发现梗阻侧肾脏TGF-β1水平和Ⅰ型胶原mRNA的表达显著降低，肾间质纤维化程度也明显减轻，进一步证明TGF-β1在肾间质纤维化中的意义。阻断潜在TGF-β1的活化，抑制配体和受体之间的相互作用以及抑制信号向下转导，是有效的治疗手段。
国外学者报道［10］，自UUO后3 d起，梗阻肾ColⅢ的表达即开始增加，且随时间的延长，表达量呈增加趋势，在UUO 14 d后，模型组梗阻侧肾脏总胶原蛋白含量约为假手术组的2.6-3.6倍，其中ColⅢ也较假手术组显著增多。
动物实验发现，经氧化苦参碱干预后，UUO大鼠肾间质炎细胞浸润、增殖程度、胶原纤维以及ColⅢ、α-SMA表达明显减少，肾间质纤维化程度明显减轻［11］。氧化苦参碱通过抑制细胞外基质产生细胞活化和表型转化而抑制细胞外基质的增加。
目前，国内外尚无氧化苦参碱治疗肾间质纤维化的临床报道。本研究通过观察氧化苦参碱注射液对慢性肾脏病患者血清TGF-β1、ColⅢ表达的影响，以寻求新型有效、副作用小的治疗药物。研究结果表明，氧化苦参碱注射液可以显著降低CKD患者血清TGF-β1、ColⅢ水平，并且在整个研究过程中未出现明显的副反应。由此，我们推测氧化苦参碱可以通过降低TGF-β1表达，减少对ECM产生细胞的刺激，降低ColⅢ表达，减少ECM产生，防止ECM 过度积聚，从而产生抗纤维化作用。
从临床疗效看，短期应用氧化苦参碱对慢性肾脏病有一定的治疗作用，但其长期应用情况以及对肾功能严重损害患者的应用情况还有待进一步研究。
参考文献
［1］Bohle A， Muller GA， Wehrmann M， et al. Pathogenesis of chronic renal failure in the primary glomerulopathies， renal vasculopathies， and chronic interstitial nephritides ［J］. Kidney Int， 1996， 49(Suppl 54):S2-S9.
［2］Lan HY. Tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation mechanisms in proximal tubule cells ［J］. Curr Opin Nephrol Hypertens， 2003， 12(1):25-29.
［3］王俊学，王国俊. 苦参碱及氧化苦参碱的药理作用及临床应用 ［J］. 肝脏， 2000， 5(2):116-117.
［4］王海燕. 慢性肾脏病及透析的临床实践指南 ［M］. 北京:人民卫生出版社， 2003:6-7.
［5］杨霓芝，包昆，王立新. 通脉口服液对慢性肾炎气虚血瘀证大鼠模型的药效学研究 ［J］. 广州中医药大学学报， 2000， 17(4):332-336.
［6］Massague J. How cells read TGF-beta signals ［J］. Nat Rev Mol Cell Biol， 2000， 1:169-178.
［7］Klahr S， Morrissey J. Obstructive nephropathy and renal fibrosis ［J］. Am J Physiol renal Physiol， 2002， 283(5):861-875.
［8］王伟铭，姚建，石蓉，等. 转化生长因子β1对肾间质成纤维细胞胶原表达的影响 ［J］. 中华肾脏病杂志， 1999， 15:343-346.
［9］Isaka Y， Tsujie M， Ando Y， et al. Transforming growth factor-beta 1 antisense oligodeoxynucleotides block interstitial fibrosis in unilateral ureteral obstruction ［J］. Kidney Int， 2000， 58(5):1885-1892.
［10］Zhang G， Kim H， Cai X， et al. Urokinase receptor deficiency accelerates renal fibrosis in obstructive nephropathy ［J］. J Am Soc Nephrol， 2003， 14(5):1254-1271.
［11］姚钢炼，宁宁，高登峰，等. 氧化苦参碱在大鼠肾间质纤维化进程中的保护作用 ［J］. 西安交通大学学报(医学版)， 2006， 27(3):254-257.