两种中药配伍抗诱变作用的比较

【摘要】 目的 观察及对比抗诱变中药人参、五加皮、猪苓、甘草(配伍1)及人参、五加皮、茯苓、当归(配伍2)的抗诱变作用。方法 以诱变剂敏感性与肿瘤易感性关系的理论为依据，采用诱变剂敏感性实验方法，取正常人外周血淋巴细胞进行培养，比较各实验组的染色体断裂率(b/c：每分裂相染色单体的断裂数)，观察并比较两种配伍的抗诱变效果。结果 配伍1、配伍2抗诱变组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)，配伍1、配伍2抗诱变组与博来霉素处理组之间差异有统计学意义(P<0.01)，但两配伍组相比较，无明显差异。结论 配伍1、配伍2具有良好的抗诱变作用且本身不具有诱变作用，对肿瘤易感人群具有保护作用。

【关键词】 抗诱变 中药配伍 诱变剂敏感性

　　个体对致癌因素的敏感性是决定性的致病危险因素，个体的DNA损伤的修复能力影响着他对致癌因素的敏感性[1]。DNA损伤修复能力低下的个体在诱变剂作用下，由于DNA修复功能缺陷，表现为染色体断裂增加。Hsu建立的以博莱霉素为诱变剂的诱变剂敏感性检测方法，以每个细胞染色体断裂率(b/c)来表示，所以b/c值可反映个体对肿瘤的易感性。正常人群的肿瘤易感性呈梯度分布，其中存在肿瘤易感者。在以前实验中，我们通过正交实验确定出两种中药配伍：人参、五加皮、猪苓、甘草(配伍1)及人参、五加皮、茯苓、当归(配伍2)[23]，现将其应用于正常人外周血进行实验，观察其对染色体稳定性的影响，并对两者的作用进行比较。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验对象 实验对象共50例，男25例，女25例，来自健康献血者，均无癌症家族史，无癌症状和病史。

　　1.2 药品的制备 人参、五加皮、猪苓、茯苓、当归及甘草购自长春市同仁堂大药房。制备配伍1取人参800mg、五加皮800mg、猪苓800mg、甘草400mg；配伍2取人参800mg、五加皮800mg、茯苓800mg、当归400mg。每组配伍分别加双蒸水300mL，水煎30min；双蒸水200mL，水煎20min；双蒸水200mL，水煎20min。混合3次水煎液，粗滤纸过滤后加无水乙醇进行醇沉24h，使醇浓度达到70%，再过滤。过滤后蒸馏，用4mL双蒸水完全溶解。装入无菌小瓶，封好，-20℃冻存备用。

　　1.3 培养液的制备 在超净工作台内，取已灭菌的洁净培养瓶，依次加入RPMI 1640培养液4mL、小牛血清1mL、PHA 0.3mL、0.4%肝素4滴(6号针头)，封好，冰箱内4℃保存备用。

　　1.4 试剂 博来霉素(BLM)，由日本化药株式会社生产。

　　1.5 方法 实验当日采静脉血，采用微量外周血培养法，培养周期72h。实验分组：对照组、配伍1处理组、配伍2处理组、BLM处理组、配伍1抗诱变组、配伍2抗诱变组。终止培养前5h各组加入药品：配伍1处理组加入配伍1；配伍2处理组加入配伍2；BLM处理组加入BLM；配伍1抗诱变组加入BLM和配伍1；配伍2抗诱变组加入BLM和配伍2。各药终质量浓度为BLM：0.03mg/L、人参4g/L、五加皮4g/L、猪苓4g/L、甘草2g/L、茯苓4g/L、当归4g/L。加药后继续培养至72h。收获细胞，常规方法制备染色体片[4]。Giemsa染色，光学显微镜下每张玻片观察50个分裂相，评价断裂标准参照CBIC(Chatham Barrs Inn Conference)，粉碎核型及染色单体重叠等不予计数。平均断裂≥0.8为敏感，≥1.0为高度敏感。记录染色体断裂数，计算出b/c值。

　　1.6 统计学方法 实验数据符合正态分布，方差齐。配伍1、配伍2对染色体断裂率影响采用方差分析，α=0.05；配伍1、配伍2的抗诱变作用采用q检验，α=0.05。

　　2 结果

　　2.1 配伍1，配伍2对染色体断裂率的影响 所检样本染色体自发断裂率(空白对照)为0.0232±0.0168，配伍1处理组断裂率为0.0180±0.0123，配伍2处理组染色体断裂率为0.0176±0.0125。配伍组与对照组之间差异无统计学意义(F=2.47， P>0.05)。

　　2.2 配伍1、配伍2的抗诱变作用 加入配伍1的抗诱变组的染色体断裂率为0.520±0.1485a，配伍2的抗诱变组染色体断裂率为0.5376±0.1551b， BLM诱变组染色体断裂率为0.664±0.1913。配伍1、配伍2抗诱变组与BLM诱变组相比较，差异有统计学意义(aq=5.0， aP<0.01; bq=4.39， bP<0.01)。

　　3 讨论
　　
　　遗传因素与环境因素均在肿瘤发病中起一定的作用，前者可表现为染色体不稳定的个体其肿瘤易患性增高，后者表现为诱变剂造成DNA损伤、基因突变和染色体损伤。正常人群中诱变剂敏感性并非是“全”或“无”现象，而是呈梯度分布，其中一部分人为肿瘤易感人群。易感人群在多次接触致癌物后，产生突变的积累，因此比其他人更易发生肿瘤。由于DNA修复功能缺陷，经BLM诱导后，该人群的染色体更易发生断裂。断裂常发生于染色体的脆性位点，而脆性位点与癌基因、抑癌基因及生长因子基因位点重叠或邻近。肿瘤是体细胞遗传病，是关键基因(癌基因和抑癌基因)发生遗传改变积累的结果，断裂造成的癌基因激活、抑癌基因失活及生长因子基因表达失控诱发了肿瘤形成。
　　
　　目前，尚无方法将某种诱变剂诱发某一位点断裂与诱发某种肿瘤相对应，所以不能针对基因组中某一位点或某几个位点进行的“量体裁衣”式的预防和保护手段。但是，我们可以通过抗诱变作用的结果来确定染色体保护剂，达到预防肿瘤的目的。中药防治肿瘤是目前研究的一个方向。
　　
　　中药防治肿瘤确有疗效，其作用机制是多方面的，基本上可以归结为以下3点:抑制肿瘤细胞生长增殖；免疫调节作用；减毒增效作用。具有抗诱变作用的中药很多。我们采用的配伍1和配伍2是经正交实验而确定的。实验证明，配伍方案优于单味药的抗诱变作用[59]。其中各味中药均具有抗诱变作用[812]。将两组配伍用于诱变实验，配伍1、配伍2与空白对照无明显差异，证明配伍1、配伍2本身不具有诱变作用。抗诱变实验结果则证明配伍1、配伍2均有良好的抗诱变作用，且两种配伍间比较无明显差异。
　　
　　肿瘤严重危害人类健康，预防肿瘤发生是医学研究的重点。许多中草药具有稳定染色体的作用，可以提高机体的抗癌能力。筛选具有肿瘤抑制作用的中药，可预防易感人群发生肿瘤，降低肿瘤的发病率。

参考文献

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　　[4]李凡，刘永茂. 基础医学实验教程 [M]. 北京：高等教育出版社， 2002:166.

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