作者：张志勇，孙公凯，杨世忠
【摘要】 目的：通过开胃进食汤对胃黏膜组织的EGF表达的影响，探讨开胃进食汤对实验性胃溃疡大鼠胃黏膜的保护作用及其作用机制。方法：采用冰醋酸注射至大鼠浆膜下形成胃溃疡模型，随机分成生理盐水(B) 组，雷尼替丁(C)， 组开胃进食汤(D) 组，设立正常对照(A) 组，用游标卡尺测量溃疡指数(UI)，用免疫组化法检测胃黏膜组织EGF的表达。结果：C、D组与B组比较、D组与C组比较，UI、EGF表达均有显著性差异( P&< 0. 05 或0. 01) ;且 C、D组溃疡边缘组织EGF阳性细胞表达较A、B 组逐渐增多(P&< 0. 01)。结论：开胃进食汤具有促进EGF分泌、保护胃黏膜上皮细胞，加速上皮细胞增殖、分化、迁移，组织修复而加速溃疡愈合、提高溃疡愈合质量，改善溃疡预后。
【关键词】 开胃进食汤;表皮生长因子;胃溃疡
［ABSTRACT］ Objective: To explore the influences of appetite promotion decoction on the mucosal healing and EGF expression in gastric ulcer model of mice， and its mechanism. Methods: Gastric ulcer model of mice were induced by subserosal injection of glacial acetic acid and then randomly pided into normal saline group (B)， ranitidine group (C)， appetite promotion decoction group (D)， and normal control group (A). Ulcer index was measured with vernier caliper， and EGF expression in the mucosa tissue was evaluated by immunehistochemical method.Results: Significantly different size of UI and level of EGF repression were presented when group C and D were compared with group B， group D was compared with group C (P &<0. 05 or 0.01). Besides， EGF expression level in the adjacent tissues of gastric ulcer lesion of group C and D gradually increased comparing with that of group A and B， showing significant differences (P&<0.01). Conclusions: Appetite promotion decoction can promote EGF secretion， protect epithelial cells of gastric mucous， and facilitate the recovery of gastric ulcer by accelerating the proliferation， differentiation， migration， and tissue repair.
［KEY WORDS］ Appetite promotion decoction; Epidermal growth factor; Gastric ulcer
开胃进食汤源于《医宗金鉴》杂病心法要诀门类篇中，其方由党参、白术、茯苓、陈皮、半夏、炙甘草、丁香、木香、藿香、莲子肉、厚朴、砂仁、神曲、麦芽组成。临床研究证实其可以促进溃疡愈合，防止溃疡复发，但其机制仍不清楚。EGF 是一种具有抑制胃酸分泌，促进上皮增殖， 营养胃肠黏膜的内源性物质，在保护胃黏膜免受损伤因子破坏、维持胃肠黏膜完整性方面起着非常重要的作用，并通过刺激细胞的迁移和增殖以加速胃十二指肠溃疡愈合过程。本研究旨在探讨该药对实验性大鼠胃黏膜的愈合作用及其可能的机制。
1 材料与方法
1. 1 对象、试剂和仪器
（1）选健康SD大鼠80只，雌雄各半，清洁级动物，体重180～220g，由西安交通大学医学院动物中心提供。室温下喂养，自由饮食饮水。（2）EGF免疫组化多克隆抗体和SABC 免疫织化学试剂盒均购自购自北京中杉金桥生物公司。图像分析采用MPIAS 多媒体彩色病理图纹分析系统。（3）药品：开胃进食汤（法半夏15g， 陈皮15g，茯苓10g，白术12g，党参15g，砂仁12g，木香12g，麦芽30g，炙甘草10g，六神曲10g，丁香10g，木香10g，藿香10g）由海南医学院附属医院提供， 雷尼替丁由江西汇仁药业有限公司生产(国药准字H36021340) 。
1.2 动物模型制备、分组及给药方法
参照Takagi 法建立动物模型，80只SD大鼠随机分出20只为正常对照组(A组) ，另60只大鼠禁食24h 后，按3mg·kg- 1体重氯胺酮腹腔注射麻醉，剖腹暴露胃，用微型注射针头在胃前壁窦体交界处浆膜下注射100%冰醋酸0.03mL ，持续30s ，将胃送还腹腔，缝合皮肤。模型建立后5d随机分成3组，每组20只:生理盐水组(B 组) ，雷尼替丁组(C 组) ，开胃进食汤组(D 组) 。用药剂量按人与大鼠体表面积折算（大鼠日服药量=人日服药量×0.018）。中药以蒸馏水煎煮30min，提取2次，再合并煎液，并将所得药液用双层纱布过滤，水浴加热蒸发浓缩到200%，使每毫升药汗中含生药2g，置于100mL玻璃瓶内密封，贮于冰箱中备用；雷尼替丁胶囊由雷尼替丁胶囊与蒸馏水配成相应浓度的悬浊液备用。实验结束时A、D组各有1只死于灌胃;B组有1只死于胃穿孔;C组有1只死于腹腔感染。
1.3 胃组织标本制备
喂养15d 后，禁食24h 处死，剪开大鼠腹腔，取出胃，展开胃组织，沿溃疡周围切下约0.5cm×0.5cm大小的胃壁组织放入4%多聚甲醛中，固定6h 后石蜡包埋切片。
1.4 观察指标及检测方法
溃疡指数(ulcer index ， UI) 测定，采用游标卡尺(精确度0.02mm) 测量溃疡面的最大长径和垂直于最大长径的最大宽径，以二者的乘积作为溃疡指数。EGF测定采用免疫组织化学方法，严格按试剂盒说明步骤操作。每组每张切片随机选取5个视野作图像分析，即采用面积百分比、积分光密度、平均灰度来检测EGF的表达。细胞膜或细胞浆出现棕黄色颗粒为EGF阳性细胞。积分光密度越高，平均灰度越低，均说明阳性细胞数量越多。
1.5 统计学处理
试验数据用均数±标准差（±s）表示，各组数据之间的比较采用SPSS 11.5 分析软件，进行方差分析，检验水准 α=0.05。
2 结果
2.1 溃疡指数及EGF变化
D组、C组、B组与A组比较UI P&<0.01;D组、C组与B组比较，UI P&<0.01（见表1）。B组和C组EGF阳性表达较A组增加(积分光密度值、平均灰度和阳性细胞占总面积的百分比(P&<0.05); D组较C组和B组进一步增加(P&<0.05)。（见表1）。表1 各组UI及大鼠胃黏膜上皮EGF 表达(略)
2.2 各组大鼠胃黏膜镜下变化情况
A 组胃黏膜结构完整，腺体排列整齐，未见炎性细胞浸润（图1）。B 组溃疡病灶与周围正常组织有明显分界，溃疡部位黏膜腺体正常结构消失，可见侵犯黏膜全层并深达黏膜肌层或更深的坏死性病变(图2) ;C 组可见坏死组织逐渐脱落，并有大量新生的肉芽组织（图3）；D 组可见新生的腺体覆盖溃疡及增生的纤维结缔组织，肌层增生增厚（图4）。
3 讨论
胃溃疡属于中医学“胃脘痛”范畴。研究表明中医药治疗胃溃疡有其自身特点和优势。众多研究证实，中药不但能抑制胃酸、胃蛋白酶分泌，还能增强胃黏膜血流、上皮细胞再生、黏液分泌和黏膜屏障的完整性。还能促进溃疡肉芽组织增生及上皮、腺体的再生，达到愈合溃疡的目的［1］。研究表明，开胃进食汤中（由丁香、藿香、木香、莲子、厚朴、半夏、陈皮、党参、白术、甘草、砂仁、麦芽、神曲组成）的诸多药物可影响黏液的生成及胃黏膜周围神经介质和体液的调节：党参、白术具有增强人体细胞与体液免疫功能的作用，能增强网状上皮系统功能，并能促进胃黏膜细胞的增殖功能，加速溃疡愈合。砂仁、陈皮对不同发病机制的消化性溃疡动物模型的胃黏膜均有明显保护作用，能明显增加黏膜血流量，提高黏膜保护力，并能提高溃疡愈合质量［2］。本实验结果表明，使用开胃进食汤治疗乙酸诱发胃溃疡大鼠15d后，与模型组比较，溃疡指数明显减少，在统计学上差异有显著性意义。开胃进食汤组的溃疡指数明显小于雷尼替丁组，证实开胃进食汤能够加快胃溃疡愈合速度，有防治胃溃疡的作用。
消化性溃疡是黏膜的特殊损伤，溃疡的愈合是一个非常复杂的过程，不仅需要黏膜缺失的填充，更需要黏膜下组织结构的重建。一些与胃酸分泌、细胞移行、分化、增殖和细胞外基质形成及新生血管生成有关的细胞生长因子参与这一过程。EGF 是一种具有抑制胃酸分泌，促进上皮增殖，组织修复和细胞保护作用的内源性物质，在保护胃黏膜免受损伤因子破坏，维持胃肠黏膜完整性方面起着非常重要的作用［3］，是近年发现的在细胞增殖和分化中起重要作用的分子［4］。有研究证实，胃溃疡患者胃液EGF的水平明显低于正常人，提示EGF的降低可能与胃溃疡的发生有一定的关系，溃疡愈合后其胃液EGF含量变明显增高，表明EGF可能在溃疡愈合中起着重要的作用［5］。我们的实验结果显示开胃进食汤和雷尼替丁治疗后胃溃疡周围EGF表达增强，说明开胃进食汤可刺激腺上皮细胞分泌EGF，并且通过显著增加胃溃疡周围EGF的表达，加速溃疡的愈合。有关开胃进食汤对EGF的具体影响有待于进一步研究。
参考文献
1 周福生，胡玲，崔琦珍，等，中医药抗消化性溃疡复发的机理研究进展［J］.中国西医结合">中西医结合杂志，2007，21（7）：21.
2 邓长生，黄梅芳，高志清，丹参对大鼠急性胃黏膜损伤后LPO、SOO及GSHPx含量可活性的影响［J］.湖南医科大学学报，2006，16（2）：121123.
3 TakagikaOkabe S.A new method for the production of chronic gastric ulcer inrats ulcer inrats and several chugs on its healing［J］.Tap J Pharmcol，1969，19:418.
4 黄适，林寿宁.表皮生长因子促进消经性溃疡愈合的中医药研究现状主［J］.江西中医学院学报，2009，17（6）：7778.
5 杨雪松.大鼠胃溃疡愈合质量与抗强的松再损伤关系的实验研究［J］.北京医科大学学报，2006，28（6）：275.