VEGF在儿童血管瘤与血管畸形中的表达及意义

【摘要】 目的：研究血管内皮生长因子(VEGF)在儿童血管瘤与血管畸形中的表达，为临床辨别血管瘤及血管畸形、指导血管瘤的治疗及检验治疗效果提供客观有效的指标。方法：采用免疫组化SP法检测VEGF在血管瘤不同分期、血管畸形、正常血管中的表达情况。结果：VEGF在血管瘤中有高表达;在增殖期的表达率高于消退早期和消退晚期(P&<0.05)。在血管畸形及正常血管中均未见阳性表达。结论：VEGF在血管瘤中有高表达，且与其分期明显有关。

【关键词】 血管瘤;血管畸形;VEGF;免疫组织化学

　　AbstractObjective：To　study　the　different　expression　of　vascular　endothelial　growth　factor　(VEGF)　in　hemangioma　and　vascular　malformation　and　provide　an　efficacious　index　for　distinguishing　hemangioma　from　vascular　malformation，　and　for　guiding　the　treatment　or　checking　up　the　treatment　effect　of　hemangioma.Method：Immunohistochemistry　SP　method　was　used　to　test　the　expression　of　VEGF　at　each　stage　of　hemangioma，　in　vascular　malformation　and　normal　blood　vessels.Results：An　intensive　expression　of　VEGF　was　found　in　hemangioma　with　a　higher　expressive　rate　at　the　proliferative　stage　than　at　the　earlier　or　later　paracmastic　stage(P&<0.05).No　expression　of　VEGF　was　found　in　normal　blood　vessels　and　vascular　malformation.Conclusion：The　higher　expression　of　VEGF　found　in　hemangioma　has　obvious　correlation　with　different　stages　of　the　disease.

　　Key　wordshemangioma;　vascular　malformation;　VEGF;　immunohistochemistry

　　血管瘤是一种血管增生性疾病，可导致多种严重的并发症，甚至可以危及生命。1982年，Mulliken　和Glowacki　提出了新的分类标准，认为传统分类的“血管瘤”实为“先天性血管病变”，而其又可分为血管瘤和血管畸形两大类[1]。血管内皮生长因子(vascular　endothelial　growth　factor，　VEGF)　作为血管内皮细胞特异性生长因子，特异性地作用于血管内皮细胞，参与血管瘤的发生和增殖，对于平滑肌细胞和其它类型细胞则无作用[2]。为了研究VEGF在血管瘤中的作用，我们利用免疫组织化学方法测定VEGF在血管瘤及血管畸形中的表达情况，进而探讨其在血管瘤增殖、退化过程中的作用及意义。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 研究对象 选取中国医科大学第一临床医院和解放军二二医院2000至2005年共58例手术切除标本，其中男31例，女27例，患儿年龄为1个月至13岁，平均5.5岁。按照Mulliken　标准[1]，将标本分为血管瘤及血管畸形，并将血管瘤标本分为增殖期、消退早期和消退晚期。血管瘤标本共49例，其中增殖期31例，消退早期11例，消退晚期7例;血管畸形为9例，均取自皮肤。另取5例含有正常血管的皮肤标本作为对照。全部标本为10　%甲醛固定，石蜡包埋。

　　1.1.2 主要试剂 鼠抗人单克隆抗VEGF抗体、SP超敏免疫组织化学试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒、EDTA均购于福州迈新生物技术公司。

　　1.2 实验方法 免疫组织化学方法检测采用链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶免疫组化法(即SP法)。4　μm厚度连续切片，常规脱蜡入水，一抗为鼠抗人单克隆抗VEGF抗体(克隆号JH121)，所有操作按照SP试剂盒说明进行。抗原修复采用EDTA抗原修复液热浴修复。DAB染色，苏木素复染。同时用已知阳性片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.3 结果判定 每张切片随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞的百分比。以血管内皮细胞胞浆出现棕黄色颗粒为阳性表达。按着色细胞百分数记分，小于20%为0分;20%～50%为1分;大于50%为2分。按着色强度记分，无着色为0分;浅棕色为1分;深棕色为2分。将着色细胞百分数记分与着色强度记分相乘，总记分0分为阴性(-);12分为弱阳性(+);4分为强阳性(++)。

　　1.4 统计学分析 采用SPSS　for　windows　11.5统计分析软件进行分析，对VEGF在血管瘤不同分期中及不同年龄组中的表达采用卡方检验和确切概率法。P&<0.05有统计学意义。

　　2 结果

　　VEGF定位于血管内皮细胞胞浆，呈棕黄色颗粒。在31例增殖期血管瘤标本中有30例VEGF表达呈阳性，阳性表达率为96.77%;在11例消退早期血管瘤标本中有7例VEGF表达呈阳性，阳性表达率为63.64%;在7例消退晚期血管瘤标本中有4例VEGF表达呈阳性，阳性率为57.14%。在9例血管畸形标本及5例正常血管标本中均未见阳性表达。对VEGF的表达进行卡方检验，结果发现在血管瘤的不同分期中其表达率存在显著性差异(表1，P&<0.05)。表1 VEGF在血管瘤不同时期中的表达

　　3 讨论

　　Fam等[3]认为血管形成包括细胞外基质的蛋白分解，内皮细胞移行和增生，细胞外基质的产生，血管状结构的形成和管道再通。血管瘤是血管生成异常性疾病，血管生成不受控制是其增殖的主要原因[4]。VEGF可以对血管生成的各步骤产生影响，从而调节血管的生成。

　　VEGF是存在于内皮细胞的特异性生长因子，对内皮细胞有极强的促有丝分裂作用，而对其它细胞无此作用[5，6]。在肿瘤、缺血缺氧等情况下，VEGF　及其受体呈现高表达，而VEGF　不足时会导致血管腔闭合、血管退化[7]。

　　在对HE染色的血管瘤及血管畸形标本进行分类时观察到：在增生期的血管瘤标本中可见血管丛的内皮细胞增生活跃，细胞肥大，界限不清，常聚集成团，管腔不规则，甚至闭塞。间质内纤维组织很少并有较多的肥大细胞。而从消退早期到消退晚期，则血管内皮细胞逐渐变扁平，　内皮细胞数目逐渐减少，管腔明显可见。同时血管间距逐渐增大，血管间结缔组织逐渐增多，并且出现较多脂肪细胞。在血管畸形的标本中发现血管密集，管腔扩张明显，且其内皮细胞与正常的血管内皮细胞无差别，无异常增生现象。

　　免疫组化结果显示：VEGF在血管瘤增殖期、消退早期、消退晚期的表达阳性率是依次递减的，而在血管畸形标本及正常血管标本中均未见阳性表达。目前认为血管内皮细胞的增殖受多种因素的调节，而VEGF正是其中之一。VEGF的作用机制包括：①是内皮细胞特异性有丝分裂原，在体外可促进内皮细胞生长，体内可诱导血管发生。②可以提高血管通透性。③可以改变胞外基质，使其更有利于血管的生长。④许多生长因子如转移生长因子(TGF)　刺激血管新生的作用是通过诱导VEGF　的表达而实现的[8，9]。我们的实验结果也证明了VEGF在促血管瘤发生中的重要作用。

参考文献

　[1]Mulliken　JB　，　Glowacki　J　.　Hemangiomas　and　vascular　malformations　in　infants　and　children　：　A　classification　based　on　endothelial　characteristics　[J].　Plast　Reconst　Surg，　1982，　69　：412.

　　[2]袁新初，　周乾毅.　转化生长因子β1在毛细血管瘤组织中的表达[J].　武汉大学学报(医学版)　，　2002，　23　(3)：　213-214.

　　[3]Fam　NP　，　Verma　S.　Clinical　guide　to　angiogenesis　[J]　.　Circulation　，　2003　，108　(21)　：2613　-　2618.

　　[4]Folkman　J.　Clinical　applications　of　research　on　angiogenesis[J].　N　Engl　J　Med，　1995，　333(26)：　1757-1763.

　　[5]Tokunaga　T，　Oshika　Y，　Abe　Y，　et　al.　Vascular　endothelial　growth　factor　(VEGF)　mRNA　isoform　expression　pattern　is　correlated　with　liver　metastasis　and　poor　prognosis　in　colon　cancer[J].　Br　J　Cancer，　1998，　77(6)：　998.

　　[6]Alvarez　Arroyo　MV，　Caramelo　C，　Angeles　Castilla　M，　et　al.　Role　of　vascular　endothelial　growth　factor　in　the　response　to　vessel　injury[J].　Kidney　Int　Suppl，　1998，　54(68)：7.

　　[7]易成刚，　郭树忠.　血管新生的机制及在整形外科领域中的研究进展　[J].实用美容整形外科杂志，　2004，　15：　315　-　317.

　　[8]Neufield　G，　Tessler　S，　Gitay2Gohen　H　，　et　al　.　Vascular　endothelial　growth　factor　and　its　receptors　[J]　.　Prog　Growth　Factor　Res，　1994，　5　(1)　：89-97.

　　[9]Weidner　N，　Carroll　PR　，　Flax　J，　et　al.　Tumor　angiogenesis　correlates　with　metastasis　in　invasive　prostate　carcinoma[J]　.　AmJ　Pathol，　1993，　143(2)：　401-409.