甲型H1N1流感疫苗安全性和免疫原性初步研究

　　 作者：庄茂欣　潘红星　王芙　崔颖杰　姜葳　张雪峰　孟繁岳　姚根红　周余春　胡小奎　朱凤才

【摘要】 目的：评价国产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗的临床安全性和免疫原性。方法：按照随机、对照、盲法的原则，选择老年（６０岁以上）组、少年（１２～１７岁）组和少儿（３～１１岁）组各220人，按1︰1比例随机接种15、30μg甲型H1N1流感疫苗；成年（１８～６０岁）组330人，按1︰1︰1比例随机接种15、30μg甲型H1N1流感疫苗和安慰剂对照。比较两种剂量疫苗免后总体不良反应率、全身和局部不良反应率、HI抗体阳转率、HI抗体（≥1︰40者）保护率、免后HI抗体GMT和免后HI抗体GMT 较免前平均增长倍数。结果：免后21 d，各剂量组征集性不良反应总发生率为10.81%（107/990），均以1级不良反应为主，未观察到3级及以上不良反应。安全性观察期内未观察到其它异常反应、偶合反应和任何有临床意义的严重不良事件。30、15μg的HI抗体阳转率分别为87.24%、84.45%，差异无显著性，均显著高于安慰剂对照组的HI抗体阳转率；HI抗体（≥1︰40者）保护率分别为87.94%和85.61%，差异无显著性，均显著高于安慰剂对照组的HI抗体保护率；免后HI抗体GMT 30μg组高于15μg组，15μg组高于安慰剂对照组，且差异均有显著性，其中12～17岁组和＞60岁组免后抗体GMT水平30μg组均高于15μg组，且差异均有显著性；30、15μg两个剂量组间免后HI抗体GMT 较免前平均增长倍数差异无显著性，与安慰剂对照组差异有显著性。结论：此国产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗具有良好的安全性和免疫原性。

【关键词】 甲型H1N1流感疫苗； 安全性； 免疫原性
　　
　　Abstract：Objective To evaluate safety and immunogenicity of influenza A (H1N1) 2009 vaccine. Methods Samples were chosen by cluster and random method. A total of 990 subjects，equally pided into 4 age groups (3-11 years，1217 years，1860 yesrs and ＞60 years)，were enrolled and underwent randomization to receive either 30，15μg hemagglutinin antigen or PBS(placebo) by intramuscular injection.We measured antibody titers using hemagglutinationinhibitionand assays at baseline and 21 days after vaccination.The coprimary immunogenicity end points were the antibody positive rates and the proportion of subjects with antibody titers of 1∶40 or more on hemagglutinationinhibition assay，the proportion of subjects with either seroconversion or a significant increase in antibody titer，and the factor increase in the geometric mean titer. Results By day 21 after vaccination，the general adverse event of 30μg dose and 15μg dose did not appeared statistically significant，and the level of adverse event were also not appeared statistically significant.No death，serious adverse events，or adverse events of special interest were reported. Antibody positive rates were observed in 364 of 431(84.45%) subjects who received the 15μg dose and in 376 of 431 subjects (87.24%) who received the 30μg dose，antibody titers of 1∶40 or more were observed in 369 of 431 subjects (85.61%) who received the 15μg dose and in 379 of 431 subjects (87.94%) who received the 30μg dose as well. Conclusion A single 15μg or 30μg dose of 2009 H1N1 vaccine is immunogenic in people whose age is above 3 years，especially in adults，with mildtomoderate vaccineassociated reactions.
　　
　　Key words：influenza A (H1N1) 2009 vaccine；　 safety；　 immunogenicity

　　2009年4月，甲型H1N1流感在墨西哥和美国爆发［1］，随后，疫情迅速蔓延到美洲、欧洲、亚洲多个国家，严重威胁人民健康［2］。随着每日确诊病例的增加，WHO不断提升流感大流行警戒等级，于2009年6月11日正式将甲型H1N1流感警戒级别升至6级，即流感大流行警戒级别最高级［3］。
　　
　　在人群中大规模免疫接种是预防甲型H1N1流感最有效方法之一［4］。美国等地的血清流行病学调查表明，人群普遍缺乏对甲型H1N1流感的免疫力，易感性高，尤其是高发人群青少年和儿童，几乎没有免疫力，季节性流感疫苗对甲型H1N1流感没有交叉保护［5］，为此开发和研制安全有效的新型甲型H1N1流感疫苗非常重要。根据国家食品药品监督管理局（SFDA）有关要求，我们选择江苏省泰兴市为研究现场，于2009年7～9月对长春生物制品研究所生产的甲型H1N1流感疫苗进行了Ⅱ期临床试验，以探索免疫剂量与免疫程序，并初步评价其安全性和免疫原性。

　　1 对象与方法

　　1.1 受试对象与分组

　　以知情同意、自愿参加为原则，选择无接种禁忌证的3岁以上健康人群进行临床研究，分为4个年龄组：老年（60岁以上）组、少年（12～17岁）组和少儿（3～11岁）组每组各220人，按1︰1比例随机接种15、30μg甲型H1N1流感疫苗；成年组（18～60岁）330人，按1︰1︰1比例随机接种15、30μg甲型H1N1流感疫苗和安慰剂对照。共计990人，每个年龄组的入选研究对象性别比均为1︰1。

　　1.2 试验疫苗与接种方法

　　试验疫苗为长春生物制品研究所研制的甲型H1N1流感病毒裂解疫苗，每剂0.5ml，含30μg血凝素，批号20090702；安慰剂为0.5 ml·支-1的PBS液，批号200907001；使用30μg剂量（0.5 ml）疫苗，注射剂量减半（0.25 ml）即为15μg血凝素。以上疫苗均经中国药品生物制品检定所检定合格，并在有效期内使用。每人只接受1个剂量的接种，于上臂三角肌附着处肌肉接种。

　　 1.3 安全性评价

　　每位受试者接种后进行30 min即时反应观察，并于6、24、48、72 h采用受试者填写日记卡的方式进行系统性局部和全身反应观察，7、14、21 d采用受试者填写日记卡和主动报告的方式进行随访和观察。

　　1.4 免疫原性评价

　　分别于接种前和接种后21 d采集静脉血，并用微量血凝抑制试验方法测定甲型H1N1流感疫苗HI抗体。主要指标为免后HI抗体阳转率，次要指标为免后HI抗体达保护性水平比例、免后抗体GMT及GMT增长倍数。

　　以免前HI抗体＜1∶10、免后HI抗体滴度≥1∶40为阳转，或免前HI抗体≥1∶10、免后HI抗体滴度4倍增长为阳转;以HI抗体滴度≥1∶40为保护水平阳性界值。

　　1.5 统计学分析

　　用Epidata 3.0录入数据并建立数据库，所有统计分析应用SAS 8.1软件进行，采用双侧统计学检验，得出检验统计量及其对应的P值，P＜0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 受试对象基本情况

　　990名受试者年龄范围为3～80岁；男、女各495人，男女性别比为1∶1；试验疫苗组和对照组研究对象的年龄和性别构成差异均无统计学意义，说明本阶段临床试验的试验组与对照组的性别构成、年龄分布是均衡可比的。

　　免前筛选入组990人，抗体检测990人，接种990人，全部完成安全性观察；第21天免疫原性采血972人，血样采集率达98.2％。

　　2.2 疫苗安全性

　　2.2.1 免后征集性不良反应总体发生情况

　　免后各组总不良反应发生率为10.81%（107/990），以1级为主。在107例不良反应者中，1级不良反应占89.72％（96/107），平均发生率为9.70％，30μg组及15μg组的1级不良反应发生率与对照组比较，尚不能认为差异有统计学意义（P=0.0493）；2级不良反应占10.28％（11/107），平均发生率为1.11％，各剂量组间差异无显著性；未观察到3级及以上不良反应。

　　2.2.2 免后征集性全身不良反应发生情况

　　疫苗免后观察期内，征集性全身不良反应发生率为8.99%，主要为1级反应，1级不良反应发生率为8.18％，2级不良反应发生率为0.81％，未观察到3级及以上不良反应。各剂量组间征集性全身不良反应发生率差异均无显著性。

　　2.2.3 接种后征集性局部不良反应发生情况

　　疫苗免后观察期内，征集性局部不良反应发生率为2.42%，主要为1级反应，1级不良反应发生率为2.12％，2级不良反应发生率为0.30％，未观察到3级及以上不良反应。各剂量组间征集性局部不良反应发生率差异均无显著性。

　　从4个年龄组分层的情况看，各年龄组的不同剂量组间征集性不良反应发生率差异均无显著性。不良反应发生情况详见表1。表1 各试验组免后不良反应发生率比较例（略）注：括弧中为所占百分比2.3 疫苗免疫原性

　　2.3.1 免前各试验组可比性分析

　　从3个试验组情况看，免前HI抗体达到保护性水平（抗体滴度≥1∶40）比例均较低，各组间免前HI抗体滴度达到保护性水平的比例及HI抗体GMT水平差异均无显著性，表明免前HI抗体达到保护性水平的比例及GMT水平在各组间是均衡可比的。

　　2.3.2 免后各组间HI抗体阳转率比较

　　30和15μg剂量组总体HI抗体阳转率分别为85.45%和82.73%，差异无显著性，但均显著高于安慰剂对照组的2.73%。各年龄组的不同剂量组及对照组间HI抗体阳转率差异均无显著性。见表2。表2 各试验组免后HI抗体阳转率比较（略）

　　2.3.3 免后各组间HI抗体达到保护性水平的比例
　　免后21d30和15μg剂量组总体的HI抗体（≥1︰40者）保护率分别为87.94%和85.61%，差异无显著性，但均显著高于安慰剂对照组的6.36%。各年龄组的不同剂量组及对照组间免后HI抗体保护率均无显著性差异。见表3。表3 各试验组免后HI抗体保护性水平比较（略）

　　2.3.4 免后各组间HI抗体GMT的比较

　　免后21 d总体HI抗体GMT 30和15μg组分别为166.83和120.36，均显著高于安慰剂对照组的7.16。各年龄组中，12～17岁组免后抗体GMT水平较高，3～11岁组免后抗体GMT水平较低，其中12～17岁组和＞60岁组免后抗体GMT水平30μg组高于15μg组，且有显著性差异。见表4。表4 各组免后HI抗体GMT水平比较（略）

　　2.3.5 免疫前后各组间HI抗体滴度平均增长倍数的比较

　　免后21 d，30、15μg两个剂量组总体HI抗体滴度平均增长倍数分别为112.07和77.31，差异无显著性，但均显著高于安慰剂对照组的1.50。12～17岁组免后HI抗体滴度平均增长倍数较高，3～11岁组较低，各年龄组免后HI抗体滴度平均增长倍数在30μg组和15μg组间无显著性差异。见表5。表5 各组免疫前后HI抗体平均增长倍数比较（略）

　　3 讨 论

　　本次疫苗试验安全性评价结果显示：免后征集性不良反应发生率为10.81%，以1级反应为主；不同剂量组的1级不良反应发生率与对照组比较，虽然Ｐ＝0.0493，但已近似于0.05，因此尚不能认为差异有统计学意义，有待加大样本量得出进一步的研究结论。未观察到3级及以上不良反应；在观察期间，未观察到其它异常反应、偶合反应和任何有临床意义的严重不良事件。以上结果提示本次研究的甲型H1N1流感病毒裂解疫苗具有较好的安全性。

　　本次疫苗试验的免疫原性结果显示：免后30、15μg两个剂量组的HI抗体阳转率、HI抗体（≥1︰40者）保护率、HI抗体滴度平均增长倍数无显著性差异，但均显著高于安慰剂对照组；两个剂量疫苗组中所有年龄组的抗体平均阳转率均大于40%，且抗体阳转率95%CI的下限均大于40%；15μg剂量组中除3～11岁年龄组外，其他年龄组的HI抗体保护率均大于70%，30μg剂量组所有年龄组的HI抗体保护率均大于70%；两个剂量疫苗组中所有年龄组的免疫前后GMT抗体增长倍数的95%CI下限均超过2.5倍。

　　欧盟药品评价局（EMEA）的标准是HI抗体阳转率≥40%，且保护率≥70%、GMT≥2.5［6］；美国FDA的标准是HI抗体阳转率95%CI下限≥40%，且HI抗体保护率95%CI下限≥70%［7］。本次疫苗试验中只有30μg剂量组完全达到上述两种标准，但其抗原量比15μg剂量增加了1倍。与近期Greenberg等在澳大利亚的一项针对甲型H1N1流感开展的临床研究（CSL研究）［8］相比较，本研究中成人组的HI抗体保护率水平与其相近，不良反应发生率较低。

　　综合安全性和免疫原性考虑，可以认为本试验疫苗15μg和30μg剂量均具有良好的安全性和免疫原性。

参考文献

　　［1］CDC.Update:swine influenza A/H1N1 infections—California and Texas，April 2009［J］.MMWR Morb Mortal Wkly Rep，2009，58:435437.

　　［2］CDC.Swine influenza A/H1N1 infection in two children—Southern California，MarchApril 2009［J］.MMWR Morb Mortal Wkly Rep，2009，58:400402.

　　［3］World Health Organization.New influenza A/H1N1 virus: global epidemiological situation，June 2009［J］.Wkly Epidemiol Rec，2009，84:249257.

　　［4］CDC.Use of influenza A/H1N1 2009 monovalent vaccine: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP)，2009［J］.MMWR Recomm Rep，2009，58(RR10):18.

　　［5］CDC.Serum crossreactive antibody response to a novel influenza A/H1N1 virus after vaccination with seasonal influenza vaccine［J］.MMWR Morb Mortal Wkly Rep，2009，58:521524.

　　［6］European Committee for Proprietary Medicinal Products.Guideline on dossier structure and content for pandemic influenza vaccine marketing authorisation application(CPMP/VEG/4717/03).European Agency for the Evaluation of Medicinal Products［EB/OL］.［２００1218］.http://www.emea.europa.eu/pdfs/human/vwp/471703enfin.pdf.

　　［7］Department of Health and Human Services，Food and Drug Administration，Center for　 Biologics Evaluation and Research.Guidance for industry: clinical data needed to support the licensure of pandemic influenza vaccines［ＥＢ／ＯＬ］.［２００７0501］.http://www.fda.gov/cber/guidelines.htm.

　　［8］GREENBERG M E，LAI M H，HARTEL G F，et al.Response after one dose of a monovalent influenza A (H1N1) 2009 vaccine—preliminary report［J］.N Engl J Med，2009［Epub ahead of print］.