SPF级KM小鼠主要脏器重量和血液生化值的测定

　　　　　　作者：夏介英 雷培琪 曾晓兰 李鹤

【摘要】 目的：建立本实验动物中心SPF级KM小鼠主要脏器，血液及血生化等指标的背景资料，并分析比较雌雄之间的差异。方法：(1)选取同日龄出生的SPF乳鼠200只，雌雄各半，分别在28、56、114日龄时随机抽取60只(雌雄各半)，活体称重，依次剖取心、肝等主要脏器器官称重，计算脏器系数。(2)同时采集28日龄SPF小鼠60只(雌雄各半)的血液，作血液学和血生化测定。结果：(1)同期雌、雄小鼠的心、肝、肺、肾、胸腺脏器系数差异显著(P&<0.01);随着日龄增长心、肝、脾、肾、肾上腺和胸腺系数变小，但睾丸、附睾、卵巢和子宫系数增大。(2)28日龄雌、雄小鼠血液学检查表明HCT和PLT有差异(P&<0.05);血生化检测表明ALT、AST、AKP、GLU、TG之间差异不显著(P&>0.05)，但CRE、TC、BUN结果差异显著(P&<0.01)。结论：性别因素对脏器重量、脏器系数以及血液、血生化指标都有一定的影响。

【关键词】 SPF小鼠;脏器重量;脏器系数;血液细胞学检查;血生化指标

本中心SPF级屏障系统建成后，自2005年6月从国家实验动物种子中心引种SPF级小鼠进行保种和扩大饲养，经过多年的积累，已形成了一定规模的实验动物群。主要服务于本院的新药开发等项目。为建立本中心实验动物主要脏器，血液学及血生化等指标的数据档案，同时为使用该群实验动物的科研人员提供明确的参考数据，我们进行了一系列的动物实验。现将SPF级KM小鼠的主要脏器重量及其系数、血液细胞学检查及主要的血生化测定值实验报告如下。

　　1 材料和方法

　　1.1 实验动物和生长环境

　　实验动物是本中心所养SPF级KM小鼠，饲养于屏障系统中。屏障内空气洁净度为10000级，全新风;温度控制在20°C～26°C，且日温差小于3°C;湿度为40%～70%;压力剃度为20～50Pa;光照12h/天，氨浓度小于14㎎/m3，噪音小于60分贝。动物行自由采食和饮水。饲料成分：粗蛋白质21.8%，粗脂肪5.0%。饲料、垫料经高压消毒处理，饮用水是实验动物饮用纯水机制备的无菌水，添加盐酸至Ph3～3。饲养动物的笼具每周更换一次，饮用水瓶每周一、三、五更换。实验动物生产许可证号为：SCXK(川)2005-19。

　　1.2 检测仪器与材料

　　称量所用天平分别为ELECTRONICT100(精度0.01g)和ELECTRONICJA1203N(精度0.001g)，由上海天平仪器总厂生产;血液学检查采用日本东亚KX121型全自动电脑血球计数仪;血液生化检测采用LDZ4-0.8型离心机，日立7020型全自动生化分析仪。检测所需试剂：GLU(批号0707071)、AKP(批号0607051)四川迈克生化有限公司生产;ACT(批号ZG7002)、AST(批号ZG7002)、BUN(批号ZG7003)希森美康公司生产;CRE(批号070501)上海东方公司生产;TG(批号070607)、TC(批号070601)伊利康生化有限公司生产。

　　1.3 测定方法

　　1.3.1 体重和脏器系数的测定随机抽取同日出生SPF级KM乳鼠200只，雌雄各半，常规饲养，分别在28日龄、56日龄、114日龄时随机抽取60只小鼠(雌雄各半)，空腹12h，然后活体称重，颈椎脱臼处死，剖开胸、腹腔，依次取出心、肝、脾等主要器官，剔除脂肪和筋膜，挤尽血液，用滤纸吸干表面的液体，称重并计算脏器系数。脏器系数(%)=脏器重量(g)/体重(g)×100。(见表1)。

　　1.3.2 血液学指标测定 将28日龄SPF级KM小鼠60只(雌雄各半)于处死前麻醉，拔眼珠取血，检测项目：白细胞计数(WBC×109·L-1)、红细胞计数(RBC×1012·L-1)、血红蛋白(HGB g·L-1)、红细胞压积(HCT g·L-1)和血小板计数(PLT×109·L-1)。(见表2)。

　　1.3.3 血液生化检查将所取血液离心，转速2000转·min-1，10分钟后分离血清，采用日立7020型全自动生化分析仪进行生化检测。检测指标：血糖(FPG，氧化酶法)、谷丙转氨酶(ALT，LDHUV法 )、谷草转氨酶(AST，MDHUV法)、碱性磷酸酶(AKP，AMP法)、肌酐(CRE，酶法)、甘油三酯(TG，GPOPAP法)、总胆固醇(TC，CODPAP法)和尿素氮(BUN，酶法)。(见表3)。

　　1.4 统计方法

　　所有测定值均以平均数()±标准差(s)表示，采用t检验。

　　2 结果

　　2.1 不同日龄SPF小鼠主要脏器重量(mg)、脏器系数(%)测定结果(见表1)

　　统计结果表明，同期雌、雄小鼠间比较得出体重、心、肝、肺、肾、胸腺脏器系数差异显著(P&<0.01);且随着日龄增长心、肝、脾、肾、肾上腺和胸腺系数变小，但睾丸、附睾、卵巢和子宫系数增大。表1不同日龄SPF小鼠主要脏器重量(mg)、脏器系数(%)的测定同期雌性与雄性之间比较， *表示P&<0.05;**表示P&<0.01; 2.228日龄SPF级KM小鼠主要血液细胞学值测定结果(见表2)

　　针对28日龄雌、雄小鼠血液学检查数据显示，红细胞压积(HCT)差异显著(P&<0.05);血小板总数(PLT)差异显著(P&<0.01);

　　2.3 28日龄SPF级KM小鼠主要血生化值测定结果(见表3)

　　比较28日龄雌、雄小鼠主要血生化值测定结果显示：碱性磷酸酶(AKP)、血糖(GLU)、甘油三酯(TG)结果差异不显著(P&>0.05);谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)结果差异显著(P&<0.05);肌酐(CRE)、总胆固醇(TC)、尿素氮(BUN)结果差异显著(P&<0.01)。表2 28日龄SPF级KM小鼠主要血液细胞学值测定

　　 3 讨论

　　3.1 到目前为止国内报道有关SPF级KM小鼠的主要脏器系数，血液及血生化等指标的正常检查值的文献并不多。而这些指标又都是动物实验中常见的重要基础数据[1]，脏器重量及脏器系数是衡量动物功能状态的重要指标，同时也是药物进行毒性实验的指定检测项目。小鼠血液学及血生化指标的使用频率尽管没有大鼠高，但在涉及相关实验时，同样具有相当的参考价值。因此需要各实验动物室建立和完善自己的实验动物的背景参数。

　　3.2 就脏器系数与性别有否关联的讨论，詹纯烈[2]等报道认为没有差别，但卢胜明[3]等的结论却是不同品系动物的各种脏器系数有明显差别，即使是同种品系，不同性别间也存在差异。我们的数据表明同期雌、雄小鼠的体重、心、肝、肺、肾、胸腺脏器系数差异显著(P&<0.01)，雌、雄小鼠的脏器重量随着体重增加而增加，但脏器系数随着体重的增加而减少。故得出性别对体重影响较大，同时性别与脏器重量和脏器系数也存在一定的影响。比较本中心饲养的SPF小鼠与施美莲[4]等报道的同期KM小鼠的脏器重量及其系数的数值相近，但同期的体重略高。这可能与饲养管理水平有关。李慕[5]等报道过SPF级KM小鼠血液生理生化指标在雌雄、日龄之间存在差异，胡建武[6]等报道显示性别、年龄都会影响实验动物的血液学及血生化指标值。我们针对28日龄KM小鼠血液、血生化指标检测数据显示：血液细胞学方面表现在HCT和PLT这两个指标有差异;血生化检测表明ALT、AST、AKP、GLU、TG之间差异不显著，但CRE、TC、BUN结果差异显著。结论是性别因素对血液学及血生化指标存在一定的影响。由于此次血液学及血生化指标测定实验只针对28日龄小鼠，不同日龄阶段的小鼠的各项指标值有待进一步实验补充。

　　3.3 随着饲养环境的改善，饲养水平的提高，以及管理制度的优化等诸多原因，KM小鼠的各种基本的生物学数据与早期的文献数据之间已经出现了差异，清洁级、SPF级动物的广泛应用使这一差异扩大化，我们在实际的工作中有必要建立自己的标准。

参考文献

　1 李吉庆，李文龙，王冬平，等.不同日龄smad3基因剔除小鼠的脏器重量及脏器指数[J].实验动物科学与管理， 2003， 20(1)： 11-13.

　　2 詹纯烈，李超权，徐本华，等. SPF小型猪主要脏器重量脏器系数的测定[J].中国实验动物学杂志， 2001， 11(4)： 215-217.

　　3 卢胜明， 胡建武， 车路平，等. 10种常用SPF级实验大、小鼠体重及主要脏器的测定[J]. 实验动物科学， 2007， 24(3): 12-16.

　　4 施美莲，朱冬琴，顾坚忠，等.中国六个群体KM小鼠脏器重量测定[J].上海实验动物科学， 2001， 21(3)： 143-146.

　　5 李慕，王冬平，尚士臣，等.不同日龄SPF级KM小鼠血液生理生化正常指标的探讨[J]. 中国比较医学杂志， 2006， 16(9)： 561.

　　6 胡建武， 卢胜明， 车路平，等. 10种常用SPF级实验大、小鼠血液学及生化指标正常参考值的探讨[J].实验动物科学， 2007， 24(2): 5-10.