作者：丁永志，李霄锋，蔡俊安，郭鑫慧
【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定穿龙骨刺片中淫羊藿苷的含量。方法 采用外标一点法，Diamonsil ODS1 C18色谱柱，乙腈-水(27∶73)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长270 nm。结果 淫羊藿苷在0.125～1.00 μg范围内呈良好线性，回归方程为Y＝81 601X＋10 356，r2＝0.999 7，平均加样回收率为99.12%，RSD＝0.65%(n＝6)。结论 本方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，为穿龙骨刺片中淫羊藿苷的定量分析提供了科学有效的方法。
【关键词】 穿龙骨刺片；淫羊藿苷；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish the method for detemining the content of Icariin in Chuanlong Guci Pian by HPLC. Methods Diamonsil ODS1 C18 Column was used with acetonitrile-water (27∶73) as the mobile phase， detection wavelength as 270 nm， and flow rate was 1.0 mL/min. Results The calibration curve was linear at the range of 0.125～1.00 μg for Icariin and linear equation was Y＝81 601X＋10 356， r2＝0.999 7. The average recovery was 99.12% and RSD was 0.65% (n＝6). Conclusion This method was simple， accurate and proper， and the reduplication of the result was good， which provides scientific quantitative analysis of Icariin in Chuanlong Guci Pian.
Key words：Chuanlong Guci Pian；Icariin；HPLC；content determination
穿龙骨刺片收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第十四册，处方由穿山龙、淫羊藿、狗脊、川牛膝、熟地黄、枸杞子组成，功能补肾、健骨、活血、止痛，用于骨质增生、骨刺疼痛[1]。原标准只有检查项，没有含量控制项。淫羊藿在处方中为主药，淫羊藿的主要成分淫羊藿苷是控制淫羊藿及其制剂的主要质量控制指标成分，故我们对穿龙骨刺片中淫羊藿苷的含量测定进行了试验研究。本试验采用高效液相色谱(HPLC)法测定淫羊藿苷含量，方法简便快速，稳定可靠，专属性强。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：SPD-10A，日本岛津；紫外分光光度仪：上海康化生化仪器制造厂；超声波清洗器：SK3200H，上海科导超声仪器有限公司。
淫羊藿苷对照品(批号110737-200414，供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；穿龙骨刺片(批号20081002、20081003、20081004)由河南百年康鑫药业有限公司提供。试验所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水(27∶73)为流动相，流速1.0 mL/min；检测波长为270 nm；理论塔板数按淫羊藿苷峰计算应不低于1 500[2-4]。
2.2 供试溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含淫羊藿苷50 μg的溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备
取本品10片，精密称定，研细，取1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率135 W，频率59 kHz)1 h，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.3 阴性样品的测试
取缺淫羊藿的样品，按供试品溶液制备法制备阴性样品溶液后测定，结果在淫羊藿苷相应位置无峰出现。见图1。
2.4 线性关系考察
精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含50 μg的对照品溶液，分别精密吸取2.5、5、10、15、20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，Y＝81 601X＋10 356，r2＝0.999 7，表明淫羊藿苷在0.125～1.00 μg之间呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
取同一对照品溶液10 μL，重复进样6次，测定淫羊藿苷峰面积，并计算相对标准偏差，结果RSD＝0.26%，表明本法精密度良好。
2.6 重复性试验
取同一批号(批号20081004)供试品，按供试品溶液制备方法制备5份供试液，分别测定淫羊藿苷峰面积，并分别计算淫羊藿苷含量和含量的相对标准偏差，结果RSD＝1.08%，表明重复性良好。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8 h测定淫羊藿苷峰面积，并计算淫羊藿苷峰面积积分值的相对标准偏差， 结果RSD＝1.35%(n＝5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。
2.8 加样回收率试验
取同一批号已知含量供试品(批号20081004，淫羊藿苷含量0.36 mg/片)20片，研细，称取0.75 g，精密称定，共取6份，均分别精密加入淫羊藿苷对照品溶液(精密取淫羊藿苷对照品13.26 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得每1 mL含0.5304 mg的溶液)1 mL，即加入淫羊藿苷0.5304 mg，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样10 μL，测得淫羊藿苷峰面积，计算淫羊藿苷含量(见表1)。结果平均回收率为99.12%，RSD＝0.65%(n＝6)。表1 加样回收率试验结果（略）
2.9 样品测定
按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，对3批产品进行测定，结果见表2。样品每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计，均不少于0.30 mg。表2 淫羊藿苷含量测定结果（略）
3 讨论
参照相关文献[2-4]报道的色谱条件，比较流动相乙腈-水20∶80、30∶70、27∶73的分离效果，结果以27∶73的分离效果、重复性最好，且阴性样品无干扰。
为了保证供试品中淫羊藿苷提取完全，我们对供试品超声处理时间进行了考察，分别超声处理30、60、90 min进行测定，试验结果表明，超声处理60 min时能够提取完全。
根据含量测定结果以及生产中所用药材质量差异和生产中的实际情况，暂拟定本品中每片含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H40O15)计，不得少于0.30 mg。
参考文献
[1] WS3-B-2695-97.卫生部药品标准·中药成方制剂(第十四册)[S].
[2] 朱山寅，薛磊冰.HPLC法测定益肾灵颗粒中淫羊藿苷的含量[J].中国中医药科技，2007，14(2)：108－109.
[3] 李启发，王晓玲，严 平.HPLC法测定前列舒乐微丸中淫羊藿苷的含量[J].西北药学杂志，2007，22(2)：52－53.
[4] 陈岳蓉，王慧春，吉保少.RP-HPLC法测定昂勃振胶囊中淫羊藿苷含量[J].西北药学杂志，2004，19(3)：102－104.