【摘要】 目的 采用高效液相色谱法对小蓟中芦丁成分进行定量。方法 采用Lichrospher C18色谱柱(4.6 mm×200 mm，
5 μm)，柱温30 ℃，甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65)为流动相，流速1.0 mL/min，检测波长254 nm。结果 小蓟中芦丁的含量为0.580 8 mg/g。结论 经过系统的方法学考察，该方法具有简便、专属、稳定、可重复的特点，可用于小蓟中芦丁的含量测定。
【关键词】 小蓟；芦丁；含量测定；高效液相色谱法
Abstract：Objective HPLC was used to establish a method for determination of rutin in herba crisii. Methods Lichrospher C18 column (4.6 mm×200 mm， 5 μm) was used with methoanol-acetic acid (35∶65) as mobile phase， flow rate being 1.0 mL/min， column temperature at 30 ℃， detection wavelength at 254 nm. Results The content of rutin in herba crisii was 0.580 8 mg/g. Conclusions The method is proved to be simple， rapid， and accurate. It can be applied to content determination of rutin in herba crisii.
Key words：Cirsium setosum (Willd.) MB.；rutin；content determination；HPLC
小蓟为菊科植物小蓟[Cirsium setosum(Willd.)MB.]的干燥地上部分或根，具有凉血止血、祛瘀消肿的功能，可用于治疗衄血、吐血、尿血、便血、崩漏、外伤出血、痈肿疮毒等。小蓟中所含有机酸中有芦丁、咖啡酸等，文献记载芦丁、咖啡酸为其止血活性成分。本实验采用高效液相色谱法测定小蓟中芦丁的含量，方法稳定、快速、重现性好。
1 实验材料
1.1 仪器
LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A检测器，CLASS-LC10色谱工作站；sartorius BP211D电子天平；SHIMADZU AY220电子天平；KQ-500型超声波清洗器。
1.2 试剂与药物
甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。芦丁购自中国药品生物制品检定所(批号0080-9705)。小蓟药材分别购自江苏(南京医药股份有限公司，批号020313)、安徽(安徽省亳州市永刚饮片有限公司，批号031205)、上海(上海华宇药业有限公司，批号040802)，经本院药用鉴定教研室陈建伟教授鉴定为小蓟正品[Cirsium setosum(Willd.)MB.]。
1.3 色谱条件及系统适用性试验
1.3.1 色谱条件的选择
色谱柱：Lichrospher C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)，柱温30 ℃，流动相：甲醇-0.5%醋酸(体积比为35∶65)，流速1.0 mL/min；检测波长：254 nm。对照品、样品的高效液相色谱图见图1。
1.3.2 提取溶剂的考察
取本品2份，各1.0 g，精密称定，置2个50 mL具塞锥形瓶中，分别加入50 mL甲醇和50 mL 40%甲醇，称重，浸置1 h，超声处理(功率500 W，频率50 kHz)40 min，补足称重，滤过；微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。分别吸取上述2份溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按外标法以峰面积计算。结果表明，以体积分数为40%甲醇为提取溶剂效果较好。
2 方法与结果
2.1 溶液制备
2.1.1 对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品0.98 mg，置25 mL容量瓶中，加40%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.1.2 供试品溶液的制备
各取3个产地药材粉末(过2号筛) 1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别加入50 mL 40%甲醇，称重，浸置1 h，超声处理(功率500 w，频率50 kHz)40 min，补足称重，过滤，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。
2.2 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5 mL稀释10 mL，依次精密吸取稀释的对照品溶液10 μL注入液相色谱仪，测定其峰面积值，以芦丁的浓度(g/L)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归。得回归方程为：Y＝25 845 255X－28 716， r＝0.999 6。结果表明，芦丁在0.003 92～0.019 6 g/L范围内具有良好的线性关系。
2.3 精密度试验
吸取3号对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定其峰面积积分值，RSD＝1.503%。表明本法精密度较好。
2.4 稳定性试验
分别于0、1、2、4、6、12、24 h精密吸取同一份供试品溶液20 μL进样，测定其峰面积积分值，计算6 h内RSD＝1.972%。结果表明，供试品溶液在6 h内常温保存基本稳定。
2.5 重复性试验
取同一批号小蓟样品共5份，每份1.0 g，精密称定，按供试品溶液的制备方法平行制备5份，分别进样10 μL，每份测定2次，平均含量为0.703 5 mg/g，RSD＝1.129%。
2.6 回收率试验
精密称取小蓟样品6份，各1.0 g，分别精密加入芦丁对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备，每次进样10 μL，每份测定2次，取平均值，计算加样回收率，平均加样回收率为98.70%，RSD＝2.88%。见表1。表1 芦丁加样回收率测定结果(略)
2.7 样品测定
取3个产地的小蓟样品，按供试品溶液的制备方法制备，分别精密吸取对照品溶液和样品溶液，注入液相色谱仪，测量峰面积，按外标法计算，结果总平均值为0.580 8 mg/g。见表2。表2 小蓟中芦丁含量测定结果(略)
3 小结
对于小蓟中芦丁的含量测定，有人曾采用聚酰胺薄层扫描法[1]，此法受薄膜表面光洁度、均匀度、厚薄等因素影响而不太稳定，张氏等[2]采用HPLC法测定苦荞麦中芦丁含量。查阅文献，还未曾有人用过HPLC法测定小蓟中芦丁含量。本实验采用HPLC法测定芦丁含量，具有简便快速、结果准确可靠的特点，可以作为小蓟药材及饮片质量控制方法。
【参考文献】
[1] 周文序，田 珍.中药大、小蓟中柳穿鱼甙和芦丁的薄层扫描法定量分析[J].药物分析杂志，1994，14(6)：39－40.
[2] 张 琪，刘慧灵.苦荞麦中总黄酮和芦丁的含量测定方法研究[J].食品科学，2003，24(7)：113－116.