【摘要】 目的 研究补阳还五汤对脑缺血再灌注后脑梗死体积及病理学改变的影响。方法 采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、补阳还五汤组。各组大鼠处死后行TTC和HE染色，测定脑梗死体积并观察病理学改变。结果 补阳还五汤组大鼠缺血侧脑组织病理改变较模型组减轻，梗死体积均明显小于模型组(P&<0.01)。结论 补阳还五汤可使脑缺血再灌注后脑梗死体积缩小，病理学改变减轻，对脑缺血再灌注损伤有保护作用。
【关键词】 补阳还五汤；脑缺血；脑梗死体积
Abstract：Objective To investigate the influence of Buyanghuanwu (BYHW) Decoction on cerebral infarct volume and pathological changes after cerebral ischemia and reperfusion. Methods The model of focal cerebral ischemia and reperfusion was made by thread embolism method. Healthy male SD rats were pided randomly into sham-operated group， model group and BYHW Decoction group. Infarct volume was detected by triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining and pathological changes were observed microscopically in HE stained sections. Results In BYHW Decoction group， infarct volume was significantly smaller than that in model group (P&<0.01)， pathological changes were better than those in model group. Conclusion BYNW Decoction could decrease the cerebral infarct volume and alleviate the pathological changes after cerebral ischemia and reperfusion. It possesses protective effect against cerebral ischemia-reperfusion injury. Key words：Buyanghuanwu Decoction；cerebral ischemia；pathology；cerebral infarct volume 缺血性脑血管病是临床常见病，具有发病率高、致残率高的特点，随着溶栓疗法的开展，再灌注损伤的问题越来越受到重视。中医学认为，缺血性中风的病理基础是气虚血瘀，益气活血为其基本治法[1]。补阳还五汤是清代名医王清任创立的益气活血名方，主治中风后遗症，临床疗效显著[2]。本实验拟通过观察补阳还五汤对脑缺血再灌注后脑梗死体积及病理学改变的影响，探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。
1 材料与方法
1.1 动物模型制备及分组 健康成年雄性SD大鼠，体重250～350 g，购于本校实验动物中心。采用Longa[3]报道的线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。结扎大鼠一侧颈总和颈外动脉，自颈总动脉分叉处向颈内动脉插入栓线约(18.5±0.5)mm，阻断大脑中动脉血流，造成局灶性脑缺血。术后将栓线尾部置于皮下，缺血2 h后轻拔栓线造成血流再灌注。动物分组为假手术组、模型组及补阳还五汤组，每组8只。假手术组颈内动脉也插入栓线，但深度仅为6 mm左右，不阻塞大脑中动脉。假手术组及模型组以生理盐水10 mL/(kg?d)灌胃，补阳还五汤组以补阳还五汤煎剂(1.28 g/mL，由本院中药制剂室制备)12.8 g/(kg?d)灌胃。各组每天灌胃1次，7 d后造模。
1.2 脑梗死体积测定
每组选6只大鼠于脑缺血2 h再灌注24 h时用10%水合氯醛过量麻醉断头处死，3 min内取出全脑，将脑组织置于-20 ℃冰箱，冷冻10 min后取出，于冰盘上自额极至枕极行冠状等厚切片，片厚2 mm，将切片立即置于2%氯化-2，3，5-三氯苯基四氮唑(TTC)磷酸缓冲液中避光，37 ℃恒温孵育30 min。TTC是一种水溶性盐，它可与活性细胞线粒体内脱氢酶反应生成深红色脂溶性物质，死亡细胞由于线粒体脱氢酶失活而不显色，故非缺血区被染成鲜红色，梗死区呈苍白色。将染色后脑片置于4%多聚甲醛中固定24 h后数码相机拍照，随后应用病理图像分析仪测量脑梗死体积。根据梯形公式[4]计算出梗死体积。
1.3 组织病理学观察
每组选2只大鼠处死后脑标本行常规HE染色，光镜下观察病变区病理变化并拍照。
1.4 统计学方法
所有数据均以x±s表示，以组间t检验进行统计学处理。
2 结果
2.1 梗死灶体积
TTC染色结果表明，假手术组脑片均红染，无白色梗死灶形成。模型组大鼠梗死灶位于缺血侧脑组织基底节区和额顶部外侧皮层，脑梗死灶明显，体积为(206.3±24.2)mm3。补阳还五汤组的脑梗死体积为(98.3±10.5)mm3，较模型组减小(P&<0.01)。
2.2 脑组织病理学改变
光镜下假手术组神经元形态结构正常，未见明显的病理性损伤。模型组可见梗死灶，主要位于大鼠缺血侧脑组织大脑皮层和基底节区，呈典型的缺血性改变，神经元胞体缩小，胞核固缩，病变部位与周围组织界线清楚，坏死中心区可见大量神经细胞缺血坏死，神经元外形不易辨认，大部分细胞结构消失，胞浆空泡样变性，神经细胞数目明显减少，坏死灶内大量胶质细胞增生。坏死边缘区可见细胞核固缩明显，核深染，胞浆嗜酸性明显增多。补阳还五汤组梗死灶较模型组减小，上述病理改变也较模型组减轻明显，神经元脱失减少，神经细胞数目增多。
3 讨论
脑缺血后的再灌注是神经功能恢复的基本条件，也是脑组织损伤加重的重要因素。尽管再灌注本身本质上是组织循环功能的恢复，但是如果能消除再灌注损伤则可进一步减少组织损伤。保护细胞功能和避免缺血梗死区扩大，以及促进半暗带神经元结构和功能恢复、减轻由于脑缺血所致的神经功能异常是对脑缺血再灌注后采取处理措施的主要目的。
脑梗死体积是评价局部脑缺血及缺血性脑损害程度最重要的客观指标之一。本实验采用目前已被国内外学者普遍采用的TTC染色法作为梗死区域的检测标记[5]。TTC与完整的线粒体氧化酶系反应，诱发产生深红色、光酶脂溶性的Formazan而使正常组织染色，缺血组织的线粒体损伤，不能诱导染色反应而呈白色，容易鉴别。本实验结果显示，大鼠脑梗死灶呈苍白色，与大脑中动脉支配的脑区域一致，未缺血部分呈红色，证实模型制作成功。补阳还五汤组大鼠脑梗死灶体积较模型组明显减小。急性脑缺血后的脑组织病理形态学改变是衡量脑损伤程度的标志，也是证实药效学的最可靠指标。本实验HE染色结果显示，脑缺血再灌注后，大鼠脑组织出现严重的缺血、坏死及神经元脱失，神经细胞数目明显减少。经补阳还五汤治疗后，脑组织的病理损伤减轻。
补阳还五汤由益气药黄芪和活血药川芎、当归尾、红花、赤芍、桃仁、地龙组成。现代研究表明，补阳还五汤可通过下调p53和p21表达[6]、抑制炎症反应[7]、抗自由基损伤[8]、促进内源性神经干细胞增殖分化[9]等对脑缺血损伤发挥保护作用。本研究发现，脑缺血再灌注后大鼠脑梗死体积较大，缺血性病理损伤严重，补阳还五汤可使缺血性脑组织病理变化减轻，脑梗死体积明显缩小，说明补阳还五汤具有抗脑缺血再灌注损伤作用。
【参考文献】
[1] 张运克.缺血性脑血管疾病之气虚血瘀与补阳还五汤[J].中医研究， 2006，19(1)：9－11.
[2] 罗卫东，李 力.补阳还五汤治疗中风后遗症150例疗效观察[J].中医药学报，2005，33(5)：49.
[3] Longa EZ， Weinstein PR， Carlson S. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J].Stroke，1989， 20(1)：84
[4] 汤耀法，晏义平.脑内缺血区体积的定量估测[J].上海医科大学学报，1996，23(6)：422.
[5] Goldlust EJ， Paczynski RP， He YY， et al. Automated measurement of infarct size with scanned image of triphenyl tetrazolium chloride-stained rat brains[J].Stroke，1996，27：1657.
[6] 佟 丽，曲宏达，陈育尧，等.补阳还五汤药物血清对体外培养大鼠皮层神经元缺氧后p53和p21表达的影响[J].中国中西医结合杂志，2004， 24(2)：133－135.
[7] 唐映红，陈瑞芬，李 花，等.补阳还五汤有效部位对脑缺血再灌注大鼠IL-1β和ICAM-1表达的作用[J].湖南中医学院学报，2005，25(5)：5－7，11.
[8] 张运克.补阳还五汤及拆方对脑缺血再灌注模型大鼠血清及脑组织超氧化物歧化酶及丙二醛和一氧化氮含量的影响[J].中国临床康复，2005， 9(9)：237－239.
[9] 刘柏炎，蔡光先，林 琳，等.补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞影响的初步研究[J].中国临床康复，2004，22(8)：4532－4533.