作者：孙钢，吕志坚，茅彩萍，陈宇，浦明之，周运海，何焕荣
【摘要】 目的 观察参蛤益肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症因子及气道病理形态的影响。方法 SD大鼠60只，随机分为正常对照组、COPD模型组、金水宝对照组及参蛤益肺胶囊低、中、高剂量组，烟熏加脂多糖法造模，观察各组治疗后肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平及气道病理组织学变化。结果 参蛤组IL-8、TNF-α水平比模型组减低(P&<0.01)，气道病理改变较轻。结论 参蛤益肺胶囊具有一定的抑制COPD气道炎症的作用。
【关键词】 参蛤益肺胶囊；慢性阻塞性肺疾病；气道炎症；白细胞介素8；肿瘤坏死因子α
Abstract：Objective To observe the effect of Shengeyifei capsule on the inflammatory mediators in the airway and the pathology of the airway in the rat with chronic obstructive pulmonary diserse (COPD). Methods 60 SD rats were pided randomly into normal group， COPD model group， Jinshuibao control group and Shengeyifei groups. The COPD model was established by smoking and infusing lipopoly- saccharide (LPS). The level of interleukin-8 (IL-8) and tumor necrosis factor α (TNF-α) in bronchoalveolar lavage fluid (BALF) were measured and the pathology of the airway and lung tissue was observed after treatment on the rats. Result The levels of IL-8 and TNF-α in Shengeyifei groups were lower than in COPD model group (P&<0.01)， the pathological changes were also lessen in Shengeyifei groups. Conclusion Shengeyifei capsule has inhibitory effect on inflammation in the airway with COPD. Key words：Shengeyifei capsule；COPD；inflammation in airway；IL-8；TNF-α 近年研究发现，炎症介质白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在气道炎症中发挥着重要作用[1]。本研究中，笔者在应用中药参蛤益肺胶囊治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期患者取得一定疗效的基础上，观察该药对COPD大鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-8、TNF-α和气道病理形态的影响，现报道如下。
1 实验材料
1.1 动物 清洁级健康SD大鼠60只，雄性，体重(250±30)g，苏州大学实验动物中心提供。1.2 药物 参蛤益肺方由西洋参、蛤蚧、虫草菌丝、紫河车、川贝母、参三七等中药组成，苏州中医院药剂科加工提供，原药粉用蒸馏水分别以25、50、100 g/L浓度配制成混悬液。金水宝由江西金水宝制药有限公司生产，批号050111，原药粉用蒸馏水以50 g/L浓度配制成混悬液。
1.3 试剂及仪器
脂多糖(LPS)由美国Sigma公司提供，IL-8、TNF-α放免试剂盒由北京科美东雅生物技术有限公司提供，批号050525。放射免疫γ-计数器(SN-682型)，中国科学院原子核研究所日环仪器厂产。徕卡2135型石蜡切片机，德国徕卡公司生产。Olympus bxso型显微镜、Olympus20型显微照相设备，日本Olympus光学工业株氏社生产。
2 实验方法
2.1 造模及给药
大鼠实验前适应性饲养1周，随机分为6组，即正常对照组、COPD模型组、金水宝对照组及参蛤益肺(以下简称参蛤)低、中、高剂量组，每组10只。参照文献[2]烟熏加LPS造模，除空白组外，余5组各鼠第1、14天用4%水合氯醛(10 mL/kg)腹腔注射麻醉后，予气管内注入LPS各200 μg/200 μL，第2～13、15～28天每日上午在自制烟熏箱(43 cm×32 cm×24 cm)内熏香烟0.5 h(每次每箱4支，大前门牌，上海卷烟厂生产，每支含焦油15 mg、烟气烟碱量1.1 mg)。各组第2～13、15～28天每日下午给予大鼠灌胃处理，参蛤各组用参蛤方悬液分别按0.25、0.5、1 g/(kg?d)灌胃，金水宝对照组按0.5 g/(kg?d)灌胃，正常组和模型组分别用等量生理盐水灌胃。
2.2 BALF的收集、检测
实验第29天处死大鼠，完整取肺及气管，将静脉套管针插入左主支气管，钳夹右总支气管，用3 mL生理盐水灌洗左肺并回收，反复2次，总回收量约为4 mL，离心，取上清，保存于-20 ℃冰箱中待检。用放免法检测BALF中IL-8、TNF-α水平(按试剂盒说明书操作)。
2.3 病理组织学观察
于各鼠右肺中叶取材，浸泡于10%甲醛液中固定12 h，经梯度乙醇脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋，切片，苏木精-伊红(HE)染色。镜下观察支气管管腔、黏膜、杯状细胞及肺泡等情况。
2.4 统计学方法
计量资料用x±s表示，各组间均数比较用t检验。
转贴于3 结果
3.1 各组IL-8、TNF-α水平比较
(见表1)表1 参蛤益肺胶囊对COPD大鼠BALF中IL-8、TNF-α的影
响(略)注：与正常对照组比较，▲▲P&<0.01；与COPD模型组比较，*P&<0.05，**P&<0.01；与金水宝组比较，#P&<0.05，##P&<0.01。
3.2 支气管及肺泡病理组织学观察
与正常对照组相比，模型组见明显支气管黏膜水肿变形增厚，管腔变窄，杯状细胞明显增多，管壁见有较多炎性细胞浸润，肺泡壁有断裂、肺泡扩大融合现象，符合慢性支气管炎、阻塞性肺气肿病理学特征。与模型组相比，参蛤治疗组支气管黏膜上皮结构尚正常，无明显水肿变性，有少量杯状细胞增生，管壁各层浸润的炎性细胞相对较少；肺泡壁变薄、断裂、肺泡腔扩大融合的范围和程度较轻，其中参蛤中剂量组减轻程度较为明显。金水宝对照组病理改变减轻程度不明显。
4 讨论
本研究结果表明，COPD大鼠模型BALF中IL-8、TNF-α水平明显高于正常对照组(P&<0.01)，提示该两种细胞因子与COPD气道炎症及其病理改变密切相关。中药复方参蛤益肺胶囊可降低BALF中IL-8、TNF-α水平，表明该药具有一定的抑制COPD气道炎症的作用；气道病理组织学观察也表明，该药能减轻模型大鼠气道炎症及其结构改变。
气道慢性非特异性炎症是COPD主要的病理学特征，管腔内炎症特点则以中性粒细胞浸润(PMN)为主，作为PMN的强趋化剂和活化剂，IL-8通过促使PMN脱颗粒、释放弹性蛋白酶和引发PMN的呼吸爆发、释放大量氧自由基等途径造成肺组织损伤[3]。TNF-α是一种多功能的细胞因子，在COPD气道炎症中，能诱导血管内皮细胞表达粘附分子，导致PMN在炎症部位聚集；能激活巨噬细胞和PMN，使其细胞毒性增加，释放更多的其他细胞因子如IL-8等；能增强PMN的细胞外蛋白分解作用，并能促进炎症反应、血管生成和组织纤维化[4]。因此，抗炎症介质治疗有望成为COPD防治新的研究途径。中医药防治COPD在抗炎症介质方面具有一定的研究前景。
COPD稳定期药物治疗的目的是改善症状，减少急性发作次数，减缓或阻止肺功能的不断衰减，提高生活质量，降低病死率。中医药在这方面积累了丰富的经验，尤其对稳定期的治疗具有一定的优势。我们经多年临床观察和治疗方药筛选，确定了参蛤益肺胶囊组方，其中西洋参、虫草菌丝、紫河车补肺益肾，蛤蚧纳气平喘，川贝母清肺化痰，参三七活血祛瘀，配合西洋参具有益气活血作用，经临床治疗COPD稳定期患者，取得了较好的疗效。鉴于COPD的形成是由多因素参与的、复杂的慢性病理改变过程，任何针对单一因素的治疗可能不会有力地改变COPD病变进程，这有赖于对COPD病因和发病机理的深入了解以及针对性的综合干预措施，而中药复方具有多靶位、多因素及生物调节剂样作用的特点，在COPD防治中值得深入研究并能够发挥积极的作用。
参考文献
[1] 中华医学会呼吸病学分会慢性阻塞性肺疾病学组.慢性阻塞性肺疾病诊治指南[J].中华结核和呼吸杂志，2002，25(8)：453－500.
[2] 宋一平，崔德健，茅培英，等. 慢性阻塞性肺病大鼠模型的建立及药物干预的影响[J].中华内科杂志，2000，39(8)：556－557.
[3] 侯静静，朱 蕾.白介素-8与慢性阻塞性肺疾病[J].国外医学?呼吸系统分册，2005，25(6)：427－429.
[4] Keatings VM， Collins PD， Scott DM， et al. Differences in IL-8 and tumor necrosis factor alpha in induced sputum from patients with chronic obstructive pulmonary disease or asthma[J].Am J Respir Crit Care Med，1996，153：530－534.