关于子宫内膜癌患者组织中雌激素受体mRNA和蛋白的表达及其意义

【摘要】目的　探讨子宫内膜癌患者组织中雌激素受体α和β（ERα和ERβ）mRNA和蛋白的表达及其意义。方法　采用RT-PCR和免疫组织化学法检测25例子宫内膜癌组织和22例正常子宫内膜组织中ERα、ERβmRNA和蛋白的表达水平，并分析比较子宫内膜癌不同手术分期和组织学分级雌激素受体α和βmRNA和蛋白的表达水平。结果　与正常子宫内膜组织比较，子宫内膜癌组织ERα、ERβmRNA的表达明显降低（P＜0.05），ERαmRNA的表达随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈下降趋势，ERβmRNA的表达则随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈升高趋势。正常子宫内膜组织ERα、ERβ表达连续、均匀，主要在上皮细胞核内，间质细胞有少量表达；子宫内膜癌组织中ERα、ERβ分布不均匀，染色强度弱。与正常子宫内膜组织比较，子宫内膜癌组织中ERα、ERβ阳性表达率明显降低（P＜0.05），子宫内膜癌组织中ERα阳性表达率随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈降低趋势，ERβ阳性表达率随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈升高趋势。结论　ERα、ERβ的低表达可能与子宫内膜癌的发病有关。
【关键词】子宫内膜癌　雌激素受体α　雌激素受体β
【Abstract】Aim To descussion estrogen receptor α and β (ERα and ERβ) mRNA and protein expression and its significance in endometrial cancer patients. Methods ERα， ERβ mRNA and protein were detected in 25 cases of endometrial carcinoma and 22 cases of normal endometrium by RT-PCR and immunohistochemistry. ERα and ERβ mRNA and protein expression levels were analyzed and compared of different surgical staging and histological grade in endometrial cancer tissue. Results Compared with normal endometrium， Erα and ERβ mRNA expressions were significantly lower in endometrial carcinoma (P＜0.05). ERα mRNA expression in endometrial cancer with clinical stage and histological grade showed a decreasing trend. ERβ mRNA expression in endometrial cancer with clinical stage and histological grade showed an increasing trend. ERα and ERβ expression were a continuous and uniform in normal endometrium， mainly in the epithelial cell nucleus， a small amount express in stromal cells. ERα and ERβ distribution were uneven and weak staining intensity in endometrial carcinoma. Compared with normal endometrium， ERα expressions were significantly lower in endometrial carcinoma (P &<0.05). ERα and ERβ positive rate of endometrial cancer with clinical stage and histological grade showed a decreasing trend in endometrial carcinoma. ERβ positive rate of endometrial cancer with clinical stage and histological grade showed an increasing trend in endometrial carcinoma. Conclusion The lower expression of ERα and ERβ may be related with the incidence of endometrial cancer.
【Keywords】Endometrial Cancer Estrogen Receptor α Estrogen Receptor β
　　子宫内膜癌是女性生殖系统的最常见恶性肿瘤之一，其发病原因不明，通常认为与过多雌激素刺激有关[1]。雌激素通过与雌激素受体（ER）结合后刺激内膜增生，因此，雌激素受体可能在子宫内膜癌的发生发展起非常重要的作用。本研究旨在探讨ERα、ERβmRNA和蛋白的表达变化及其临床意义。
　　1　对象与方法
　　1.1　研究对象 子宫内膜癌患者25例，年龄55.8±7.3岁。采用国际妇产科联盟（FICO）2000年制定的手术病理分期，其中Ⅰ期14例，Ⅱ期7例，Ⅲ期3例，Ⅳ期1例；组织学分级：G1期11例，G2期10例，G3期4例。选择同期因子宫肌瘤行子宫切除术患者的正常子宫内膜组织22 例作对照。
　　1.2　RT-PCR测定ERα、ERβmRNA表达 新鲜组织匀浆用Trizol试剂提取总RNA，再逆转录成cDNA。参照文献[2，3]合成引物，以GAPDH为内参。PCR反应条件：94℃预变性5min，94℃45s，54℃（ERβ是50℃）45s，72℃延伸1min，35个循环，最后72℃延伸10min。取PCR扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，利用图像分析系统进行分析，目的基因与GAPDH灰度比值为mRNA相对表达量。
　　1.3　免疫组化检测ERα、ERβ蛋白表达 每个石蜡块连续切片，共4张，片后5μm，其中一张作HE染色，用于病理诊断；其余经高压加热法修复抗原后非免疫血清孵育30min，37℃，DAB显色，苏木素复染。显微镜下观察，子宫内膜腺上皮细胞核内有棕黄色颗粒为阳性，根据阳性细胞所占全部肿瘤细胞的百分比判定结果[4]。每张切片取5个视野，计算每个视野中阳性细胞百分数，取平均值。ERα、ERβ单克隆抗体购自Santa Cruz公司，免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。
　　1.4　统计学方法　计量资料采用t检验和方差分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。
　　2　结果
　　2.1 ERα、ERβmRNA的表达 与正常子宫内膜组织比较，子宫内膜癌组织ERα、ERβmRNA的表达明显降低（P＜0.05），ERαmRNA的表达随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈下降趋势，ERβmRNA的表达则随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈升高趋势（表1）。
　　表1. ERα、ERβmRNA的表达
　　
　　2.2　ERα、ERβ蛋白的表达　正常子宫内膜组织ERα、ERβ表达连续、均匀，主要在上皮细胞核内，间质细胞有少量表达；子宫内膜癌组织中ERα、ERβ分布不均匀，染色强度弱（图1和图2）。与正常子宫内膜组织比较，子宫内膜癌组织中ERα、ERβ阳性表达率明显降低（P＜0.05），子宫内膜癌组织中ERα、ERβ阳性表达率随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈降低趋势，ERβ阳性表达率随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈升高趋势（表2）。 　　 图1. ERα的免疫组化染色(×100) 左为正常对照组，右为子宫内膜癌组。
　　图2 . ERβ的免疫组化染色(×100) 左为正常对照组，右为子宫内膜癌组。
　　表2. ERα、ERβ蛋白阳性表达率
　　
　　
　　3　讨论
　　雌激素受体是一类由配体激活的转录因子，是核受体超家族的成员。目前已发现与人类相关的雌激素受体亚型为ERα和ERβ。雌激素受体以两种途径调控基因转录：一种是经典的雌激素反应元件途径。当雌激素与雌激素受体结合后，雌激素受体空间结构发生改变形成同质二聚体或异二聚体，并与雌激素反应元件结合，调控基因转录。另外一种途径是AP-1增强子元件途径。雌激素与雌激素受体结合经AP-1位点调控时，需要转录因子Fos和Jun参与调控基因转录，ERα和ERβ产生不同的生物学效应，配体与ERα结合促进基因转录，与ERβ结合基因转录受到抑制。
　　研究发现，子宫内膜癌组织雌激素受体水平降低，是因为子宫内膜癌肿瘤细胞通常保留雌激素受体的表达，当肿瘤发展到一定阶段，受体的产生和作用受到损伤，组织会逐渐失去雌激素受体[5]。本研究中，子宫内膜癌组织ERα、ERβmRNA的表达明显降低，ERαmRNA的表达随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈下降趋势，ERβmRNA的表达则随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈升高趋势。子宫内膜癌组织中ERα、ERβ阳性表达率明显降低，ERα阳性表达率随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈降低趋势，ERβ阳性表达率随内膜癌临床分期和组织学分级的进展呈升高趋势。ERα下调不仅是子宫内膜癌发生发展中的早期事件，可能与肿瘤的进展也有关系。提示ERα的高表达是预后良好的指标，ERβ的高表达是预后不良的指标。
　　本研究的不足在于未对有无淋巴结转移及其转移程度者进行观察，不能长期随访，未对生存率进行分析。子宫内膜癌的发生是多因素、多步骤、长期的过程。研究子宫内膜癌组织中ERα、ERβ的表达，不仅可以探讨子宫内膜癌发生发展的规律，而且有望通过逆转基因表达，在基因水平治疗子宫内膜癌。
参 考 文 献
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[4]张家文，彭芝兰.雌激素受体亚型与子宫内膜癌预后的关系.四川大学学报，2004，35(6):843-845.
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