【摘要】目的 探讨P16、P63、Survivin和Ki67在宫颈上皮鳞状上皮内瘤变及宫颈鳞癌中的表达及临床意义；方法 10例正常宫颈上皮、67例宫颈上皮内瘤变及19例宫颈鳞癌均做免疫组织化学染色；结果 P16、P63、Survivin和Ki67在上皮内瘤变和鳞癌的表达均明显高于正常宫颈上皮，（p均＜0.05）；结论 P16、P63、Survivin和Ki67与宫颈上皮内瘤变和鳞癌的发生发展密切相关，可作为评价宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌程度的指标。
【关键词】P16 P63 Survivin Ki67 宫颈上皮内瘤变 宫颈鳞癌 免疫组织化学
【Abstract】Object To investigate the significance of expression of P16，P63，Survivin amd Ki67 in cervical intraepithelial neoplasia(CIN) and squamous cell carcinoma of the cervix. Methods 10 cases of normal cervical tissues， 67 cases of cervical intraepithelial neoplasia(CIN) and 19 cases of squamous cell carcinoma of the cervix. All cases were immunocytochemical staining. Results Positive rates of P16，P63，Survivin amd Ki67 in CIN and squamous cell carcinoma were notably higher than in the normal cervical epithelia. The difference had significance of statistics (p＜0.05). Conclusion P16，P63，Survivin amd Ki67 may involve initiation of CIN and squamous cell carcinoma. May be used as an important maker of evaluate the degree and the prognosis of CIN and squamous cell carcinoma.
【Key words】 P16 P63 Survivin Ki67 cervical intraepithelial neoplasia;squamous cell carcinoma of the cervix immumohistochemistry
宫颈癌是妇女较为常见的恶性肿瘤之一，研究表明绝大多数都是由宫颈上皮内瘤变发展而来的，而这过程一般需要数年时间，因此对癌前病变正确有效的诊断，是防止宫颈浸润癌的发生的关键所在。本实验旨在检测P16、P63、Survivin、Ki67在不同级别的宫颈上皮内瘤变和浸润性鳞癌和的表达，探讨其在临床应用的意义。
1 材料与方法
1.1材料来源 所有标本均来自我院2004年1月至2010年12月宫颈活检及手术切除标本79例，其中CINⅠ27例，CINⅡ22例，CINⅢ18例，浸润性鳞状细胞癌19例，年龄27-63岁，平均年龄39.2岁，另选10例炎症较轻且宫颈鳞状上皮基本正常的为对照。
1.2 方法 切4微米厚切片，分别标记P16、P63、Survivin、Ki67。所有抗体均采用即用型单克隆抗体，P16、Ki67和S-P试剂盒购自福建迈新生物技术公司，P63、Survivin购自北京中杉金桥生物有限公司。采用链亲和素—过氧化物酶法（SP法）。
1.3 结果判定 切片无杂染，以各抗体正常着色部位出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞，P16、Survivin着色在胞浆和胞核，P63、Ki67阳性表达在胞核。阳性细胞小于25%为（－），25%-50%为（+），50%以上为（++）。
1.4 统计学方法 使用SPSS软件，采用χ2检验统计学处理。
2 结果
表1 不同类型病变P16表达情况
P16是一种直接调控细胞周期的抑癌基因，它的缺失和突变与宫颈癌的发生、发展有密切的关系[1]，其在癌前病变及宫颈鳞癌有特异性的表达，检测P16可以作为诊断宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的一个重要的辅助手段[2-3]。P16在对照组、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ和鳞癌组的阳性率分别为0、18.5%、45.5%、72.2%，逐级比较有明显的差异性（p＜0.05），而CINⅢ和鳞癌组78.8%的阳性率较为接近，无显著的差异性。
P63属于抑癌基因P53家族，常表达于许多上皮组织的基底层，对于正常上皮的形成具有重要意义，但研究表明，P63在肿瘤发生发展过程所起到的作用中更多的是致癌而不是抑癌，P63在鳞状上皮的良恶性肿瘤中表达阳性，尤其是在鳞癌中高表达，其阳性表达的细胞数量及其分布区域与鳞状细胞的间变程度呈正相关，与鳞癌的发生密切相关，P63的异常高表达也可以是这些肿瘤的诊断标志[4-6]。本实验中，P63在对照组仅为鳞状上皮基底层有阳性表达，其阳性率＜25%，计为阴性，CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ的P63阳性表达分别为11.1%、50.0%、94.4%，存在显著差异（p＜0.05），鳞癌组100％与CINⅢ的94.4%的阳性率相近，无明显差异(p＞0.05)，从正常→CIN→鳞癌，其阳性细胞分布由基底层逐渐扩展到整个上皮层，P63在腺上皮中无表达。
Survivin作为一种凋亡抑制因子，对细胞的有丝分裂和细胞程序性死亡有重要的调节作用，与肿瘤的发生发展有密切关系。其最重要的特点之一是在正常的成熟组织中不表达[7]，但在多种肿瘤中广泛表达，抑制Survivin足以诱导肿瘤细胞自发性凋亡，这是其他抑制凋亡的基因所不具备的特点[8]，由于Survivin在肿瘤中选择性表达这使其成为目前恶性肿瘤诊断和治疗的新靶点，而在肿瘤中的表达可作为预后不良的标志。Survivin蛋白在各组的表达率为对照组（0），CIN Ⅰ(14.8％)、CIN Ⅱ（31.8％)、CINⅢ(72.2％) 、鳞癌组（84.2%），其阳性表达率呈逐渐升高趋势， 存在显著差异（p＜0.05）， 与张培荣等[9]的实验结果相接近。
Ki67是核增殖标记基因，几乎在细胞的整个有丝分裂过程中都能表达，是较为可靠的全面地反映细胞增殖活性的客观指标[10]。实验表明，在正常对照组中Ki67仅限于鳞状上皮基底细胞及副基底细胞层有阳性表达，随着上皮内瘤变由低级别向高级别逐渐上升直到浸润癌，其阳性细胞数量也相应增多，阳性表达率从CINⅠ的33.3%到CINⅢ和浸润癌的100%，存在显著差异（p＜0.05）。阳性细胞分布的层次也逐渐从基底层由下至上逐步扩展到全层。
综上所述，P16、P63、Survivin和Ki67通过不同的作用机理参与到鳞状上皮内瘤变和浸润癌的发生发展过程中，实验表明，由正常组织→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ到浸润癌，随着细胞的间变程度的逐步增大，P16、P63、Survivin和Ki67的阳性表达率明显的增高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，阳性细胞分布的区域也明显增大。通过联合检测P16、P63、Survivin和Ki67在宫颈组织中的表达，结合HE下的形态学改变，能有效的提高临床对宫颈上皮内瘤变的分级和浸润癌的诊断，并对宫颈癌在发生、发展的各阶段的预后和转归的判定有重要的意义。
参 考 文 献
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