【摘要】目的 探讨胎膜早破患者血清中Th1和Th3细胞因子的变化及其临床意义。方法 ELISA法检测胎膜早破组和对照组孕妇血清中Th1类细胞因子IFN-γ、IL-2及Th3类细胞因子IL-4、IL-10的表达水平，同时胎膜行病理检查。结果 胎膜早破组患者血清中IFN-γ、IL-2的表达水平均显著高于对照组，并随时间延长而含量增高（P&<0.05）；有绒毛膜羊膜炎者血清IFN-γ、IL-2高于无绒毛膜羊膜炎者及对照组（P&<0.01）；无绒毛膜羊膜炎者及对照组IL-4、IL-10的表达水平均显著高于有绒毛膜羊膜炎者组（P&<0.05）。 结论 胎膜早破患者血清中Th1/Th3 细胞平衡向Th1 细胞为主的模式转化。
【关键词】胎膜早破 Th1/Th3细胞因子 IFN-γ IL-2 IL-4 IL-10
妊娠被认为是最成功的同种异体移植。妊娠期母体Thl/Th3免疫调节过程维持着一种微妙的、不断变化的平衡过程[1]。胎膜早破(premature rupture of membranes， PROM)是常见的产科并发症，发生的原因和机制目前尚不十分清楚。胎膜早破是否与“Thl/Th3漂移”即平衡紊乱有关？本文分别测定胎膜早破孕妇血清中Th1型细胞因子代表因子IFN-γ、IL-2及Th3型细胞因子代表因子IL-4、IL-10的含量，观察它们在胎膜早破患者血清中的变化， 并分析Th1/Th3在胎膜早破发生中的部分机理，为临床诊断和治疗提供参考。
1 材料和方法
1.1 研究对象 选取2009年1月～2010年1月我院住院分娩者，入院时未临产的胎膜早破孕妇45例。年龄(27.6±3.2)岁，孕周29～38+6周，平均(35.7±3.5)周。同时随机选取我院产科门诊定期产检，无临产、感染及破膜征象的正常孕妇40例为对照组，年龄(28.3±3.8)岁，孕周29+3～37周，平均(36.1±3.3)周。所有孕妇均无产科及内外科合并症。胎膜早破组与对照组年龄及孕周相比，差异无显著性。
1.2 绒毛膜羊膜炎的诊断标准[2]：①胎膜组织病理检查呈炎症反应，产前或分娩24h 后体温≥37.5℃，恶露臭味，白细胞计数升高（本文中绒毛膜羊膜炎有临床症状的以此为标准）。②胎膜病检呈炎症反应（本文中绒毛膜羊膜炎无临床症状的以此为标准）。
1.3 胎膜组织绒毛膜羊膜炎病理分期标准[2]：I期：中性粒细胞浸润少、散在，几乎全部局限于绒毛板下纤维蛋白沉积物内，或胎膜的蜕膜层；II期：中性粒细胞浸润增多，并延伸至绒毛膜组织内或绒毛膜板组织及胎儿血管；但未进入羊膜：III期：中性粒细胞已广泛浸润蜕膜、绒毛膜，并达羊膜。
1.4 检测方法 胎膜早破孕妇于入院后即抽肘静脉血6mL，采用ELISA 法，试剂盒由武汉华美生物工程有限公司提供，严格按说明书操作。测定IFN－γ、IL-2 及IL-4、IL-10 浓度，分娩时取4cm ×4cm大小胎盘胎膜组织，用10%甲醛固定，送病理检查。对照组孕妇于产检时抽血同法测定IFN－γ、IL-2 及IL-4、IL-10 浓度。
1.5 统计学分析
采用 t 检验和方差检验。
2 结果
2.1 孕妇血清中Th1/Th3细胞因子水平的变化：早产感染组中IFN-γ和IL-2的水平均显著高于另外两组，差异有显著性(均为P&<0.05)；早产非感染组中IFN-γ和IL-2的水平虽高于正常对照组，但差异无显著性(P&>0.05)。正常对照组中IL-4 和IL-10 的水平均显著高于另外两组，差异有显著性(均为P&<0.05)；早产非感染组中IL-4 和IL-10 的水平虽低于正常对照组，但差异无显著性(P&>0.05)(表1) 。
表1. 血清Th1/Th3细胞因子的变化(ng/L，x-±s)
﹡，﹡﹡，﹡﹡﹡，﹡﹡﹡﹡早产感染组与早产非感染组、足月组比较P&<0.05; △，△△，△△△，△△△△早产非感染组与足月组比较， P&>0.05
2.2 破膜时间与血清Th1/Th3细胞因子的关系：破膜时间在72h以上的血清IFN-γ和IL-2水平均显著高于不足72h的另外两组，差异有显著性(均为P&<0.05)；破膜时间不足72h的另外两组间差异无显著性(P&>0.05) (表2)。
表2 破膜时间与血清Th1/Th3细胞因子变化的关系(ng/ L，x-±s)
﹡，﹡﹡，﹡﹡﹡，﹡﹡﹡﹡&>72h组与24h～72h组、&<24h组比较P&<0.05; △，△△，△△△，△△△△24h～72h组与&<24h组比较， P&>0.05 .
CD4+T细胞激活后分泌的细胞因子可分为Th1和Th3两个功能亚群：Thl 细胞分泌白细胞介素2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）和肿瘤坏死因子β（TNF-β）；Th3细胞分泌IL-4，-5，-6，-9，-10，-13和-17A[3]。Thl和Th3来自一个共同的前体细胞（Th0），在抗原刺激后分化为中间状态的Th0细胞， 其在多种因素作用下可Thl或Th3方向分化发育。
“Thl/Th3 漂移”的概念是指Thl 和Th3细胞的分化与功能互相制约，只有当Thl/Th3处于动态平衡时，机体才处于健康状态。若Thl/Th3失衡，就会发生感染性疾病、过敏性疾病、妊娠病理等[4]。在某些状态下，Thl/Th3的动态平衡被打破。而偏向Thl 或Th3优势应答，称为“Thl/Th3漂移[5]”。
母胎间生理的免疫相容，对于妊娠的成功是必不可少的条件之一。近年来对Th1/Th3型细胞因子的大量研究表明：正常妊娠是一种“Th3现象”，即妊娠期母体是趋向于Th3型细胞因子参与的体液免疫，而避免Th1 型细胞因子参与的细胞免疫。Saito等[6]利用流式细胞仪直接检测妊娠期妇女外周血单个核细胞（PBMC）中CD4+T 细胞的亚群，结果表明正常妊娠晚期外周血中Th1 细胞比例较未孕妇女明显下降，Th3细胞比例在孕早期即明显升高，孕中晚期Th1/Th3细胞比例明显下降。Marzi 等[7]的研究表明：正常妊娠妇女孕晚期Th1型细胞因子（IFN-γ、IL-2）的分泌较正常未孕及孕早中期相比明显下降，伴之以Th3型细胞因子（IL-4、IL-10）随着妊娠的进展分泌增加，到孕晚期达高峰。表明在妊娠晚期发生了Th1向Th3方向转换现象，使胎儿免受母体免疫排斥。
本实验选择具有代表性的Th1 型细胞因子IFN-γ、IL-2及Th3型细胞因子IL-4、IL-10。IL-4和IFN-γ是调节Th1/ Th3平衡中最重要的细胞因子，较明确参与调节的还有IL-2、IL-10和IL-12。IL-4可以上调MHC2Ⅱ类分子，下调MHC 限制性的细胞毒性作用[8]。IL-4还抑制TNF-α受体在胎盘血管中的表达，以利于妊娠。IL-10则可抑制Th1型细胞因子的产生进而抑制Th1型免疫反应及NK细胞的激活，对妊娠有保护作用[9]。IL-10是抑制Th1细胞、促进Th3细胞分化的重要因子。Lim等[10] 测定黄体中期的子宫内膜发现，Th1型细胞因子的表达缺乏，而表现为Th3型细胞因子的优势表达。可以保护胎儿[11]。
本实验结果显示PROM患者血清中IFN-γ、IL-2的表达水平均显著高于对照组，并随时间延长而含量增高（P&<0.05）；有绒毛膜羊膜炎者血清IFN-γ、IL-2高于无绒毛膜羊膜炎者及对照组（P&<0.01）。说明在PROM患者血清中细胞因子较正常孕妇的异常表达[12]。Shazly等[13]用ELISA方法检测了PROM 组在正常妊娠中IL-2、IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12的表达，结果Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ水平及对Th1反应起诱导作用的IL-1水平PROM中较正常妊娠组显著增加，而Th3型细胞因子IL-4、IL-6、IL-10在正常妊娠足月胎盘中显著增加，这些数据表明在PROM妇女中有Th1偏移现象[14]。根据本实验结果我们提出在有关细胞因子与PROM的研究中， 是否应同时考虑到细胞因子的作用， 从而为PROM预测、诊断和治疗提供线索。
参 考 文 献
[1]彭冰，刘淑芸.Th1、Th3型细胞因子与妊娠及其并发症的关系[J].中华围产医学杂志，2004，7 (1):59-61.
[2]陈忠年.妇产科病理学[M]. 上海:上海医科大学出版社， 1996，341-344.
[3]Hirata T， Osuga Y， Hamasaki K， et al. Interleukin (IL)-17A stimulates IL-8 secretion， cyclooxygensase-2 expression， and cell proliferation of endometriotic stromal cells[J]. Endocrinology，2008，149(3):1260-1267.
[4]Nan CL， Lei ZL， Zhao ZJ， et al. Increased Th1/Th3 (IFN-gamma/ IL-4) cytokine mRNA ratio of rat embryos in t he pregnant mouse uterus [J]. J Reprod Dev，2007，53 (2):219-228.
[5]Taylor JJ， Mohrs M， Pearce EJ.Regulatory T cell responses develop in parallel Th responses and control the magnitude and phenotype of the Th effector population[J].J Immunol，2006，176(10):5839-5847.
[6]Saito S， Sakai M， Sasaki Y， et al. Quantitative analysis of peripheral blood Th0，Th1，Th3 and the Th1: Th3 cell ratio during normal pregnancy and preeclampsia[J]. Clin Exp Immunol， 1999， 117:550-555.
[7]Marzi M， Vigano A， Trabattoni D， et al. Characterization of type1 and type 2 cytokine production profile in physiologic and pathologic pregnancy[J]. Clin:Exp Immunol，1996， 106:127-133.
[8]Ekerfelt C， Lidstrom C， Matthiesen L， et al. Spontaneous secretion of interleukin-4， interleukin-10 and interferon-gamma by first trimester decidual mononuclear cells[J]. Am J Reprod Immuno1.2002，47(3):159-166.
[9]孙琪，王秀华.IL-10对人滋养层细胞中HLA-GmRNA表达和HCG分泌的影响[J].实用妇产科杂志，2004， 20(1):46-48.
[10]Lim KJ， Odukoya OA， Ajjan RA， et a1. Profile of cytokine mRNA expression in peri-implantation human endometrium[J]. Mol Hum Reprod.1998， 4(1):77-81.
[11]Bretscher PA. The regulatory functions of CD4+ and CD8 + T cell subsets in immune class regulation[J]. Immunol Res，2006，13:141-150.
[12]张静，张文真.胎盘Th1/Th3 型细胞因子失衡与妊娠不良结局[J].国外医学妇幼保健分册，2005，16 (4):211-213.
[13]Shazlys EL， Makhseed M， Azizieh F， et al. Increased expression of proinflammatory cyt- okines in placentas of woman undergoing spontaneous preterm delivery or premature rupture of membranes [J] . Am J Reprod Immunol ，2004，52 (1):45-52.
[14]张静，王红霞，周建慧.自然流产患者蜕膜组织TH1/Th3 型细胞的变化[J]. 四川大学学报(医学版)J Sichuan Un iv (Med Sci Edi) ，2005，36 (4):574-575