关于胃癌组织FHIT蛋白表达及其与幽门螺杆菌感染关系

【摘要】 目的 探讨脆性组氨酸三联体（FHIT）蛋白在胃癌组织表达及其与幽门螺杆菌（HP）感染的关系。方法 应用免疫组化PV法检测52例胃癌、30例癌旁组织和48例远癌组织中FHIT蛋白的表达情况，硼酸亚甲蓝染色法检测HP。结果 FHIT蛋白在胃癌组织中的表达明显弱于癌旁及远癌组织（χ2=17.49、36.15，P&<0.01）；后两者比较差异亦有显著性（χ2=102.67，P&<0.01）。胃癌及癌旁组织中，HP阳性组的FHIT蛋白表达弱于HP阴性组（Z=-2.881、-2.550，P&<0.05）。FHIT蛋白表达与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移有关（Z=－2.124、－2.552，P&<0.05）。结论 FHIT蛋白的表达缺失或下降在胃癌发生发展中起着重要作用，HP感染可能通过影响FHIT蛋白表达促使胃癌发生。
【关键词】 胃肿瘤；蛋白质，脆性组氨酸三联体；螺杆菌感染；免疫组织化学
　胃癌的发生是一个多阶段多步骤的过程，其发生发展与多种肿瘤相关基因和肿瘤抑制基因相关。脆性组氨酸三联体（FHIT）蛋白参与肿瘤的细胞周期调控及诱导细胞凋亡，与细胞增殖有关。已有研究表明，FHIT蛋白在许多恶性肿瘤如肺癌、食管癌、胃癌、结肠癌、宫颈癌、肾癌中都存在表达缺失。且国内外研究显示， FHIT蛋白表达缺失或下降可能在胃癌发生发展中起着关键作用，然而，其表达与幽门螺杆菌（HP）感染的关系却了解很少[1，2]。本文采用免疫组化PV9000法检测胃癌、癌旁组织及远癌组织中FHIT蛋白表达，探讨FHIT蛋白在胃癌发生发展中的作用及其与HP感染的关系。现将结果报告如下。
　　1 材料和方法
　　1.1 标本来源
　　
　　收集我院附属医院病理科2008年1月～2008年5月间胃癌根治手术切除的手术标本52例。所有胃癌病人术前均未行化疗或放疗， 且临床资料完整，其中男34例，女18例；年龄35.9～78.6岁，平均59.8岁；肿瘤位于贲门胃底部8例，胃体部5例，胃窦部39例；肿瘤直径＜5 cm组22例，≥5 cm组30例；组织学分型(WHO 标准)：腺癌42例（低分化30例，中高分化12例），黏液腺癌8例，印戒细胞癌2例；淋巴结有转移者39例，淋巴结无转移者13例；TNM分期(UICC 2003年制定的TNM分期标准)：Ⅰ期+Ⅱ期共13例，Ⅲ期+Ⅳ期共39例；HP阳性者16例。另收集癌旁组织30例（其中伴肠上皮化生22例，伴不典型增生8例），HP阳性者23例；远癌组织48例，经病理证实均为慢性浅表性胃炎，HP阳性者34例。
　　1.2 方法
　　1.2.1 HP检测 应用硼酸亚甲蓝染色法检测HP， HP专一性定位于胃黏膜上皮细胞表面，染色呈蓝色，螺旋状或S状分布，未发现HP者为阴性(-)，余为阳性（+）。
　　1.2.2 FHIT蛋白检测 采用免疫组化PV9000法，兔抗人FHIT多克隆抗体（1∶100）、PV9000检测试剂盒及DAB显色试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化染色程序按说明书要求进行。PBS代替一抗为阴性对照，乳腺组织为阳性对照。
　　1.2.3 结果判定 FHIT蛋白表达于胞浆，出现黄色或棕黄颗粒为阳性。

参考文献

[3]，每张切片随机选取5个高倍视野，每个高倍视野计数200个细胞，观察阳性细胞染色强度，并计数阳性细胞百分数。首先按染色强度记分:0 分为无染色，1分为浅黄色，2分为黄色，3 分为棕黄色;再按阳性细胞百分比记分:阳性细胞&<5%为0分，5%～24%为1分，25%～49%为2分， 50%～74%为3分，≥75%为4分。两者相乘0分为阴性(－)， 1～3分为弱阳性(+)， 4～7分为阳性()，8～12分为强阳性()。
　　1.3 统计学处理
　　
　　采用SPSS 11.5及PPMS 1.5[4]统计软件进行分析，FHIT蛋白在各组、与临床病理参数及HP感染关系的比较采用等级秩和检验（KruskalWallis或MannWhitney法），多个样本间两两比较采用Nemenyi法，P&<0.05为差异有显著性。
　　2 结果
　　2.1 FHIT蛋白在胃癌、癌旁及远癌组织中的表达
　　
　　FHIT蛋白主要表达于正常胃黏膜上皮细胞和癌细胞的胞浆，在淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞的胞核及胞质也有表达。FHIT蛋白在3组中均有不同程度表达。见表1。3组间的表达强度差异有显著性（χ2=44.696，P&<0.001）。FHIT蛋白在胃癌组表达最弱，与癌旁及远癌组比较差异有显著性（χ2=17.49、36.15，P&<0.01）；其在癌旁组的表达强度亦显著弱于远癌组（χ2=102.67，P&<0.01）。癌旁组织中FHIT蛋白在不典型增生组的表达强度亦明显弱于肠上皮化生组（χ2=-2.320，P&<0.05）。
　　2.2 FHIT蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系
　　
　　FHIT蛋白表达与胃癌病人年龄、性别及肿瘤大小、部位、分化程度、组织类型及浸润深度均无关（P&>0.05）；与肿瘤的TNM分期及淋巴结有无转移有关（Z=-2.124、-2.552，P&<0.05）。见表2。
　　2.3 HP感染与FHIT蛋白表达的关系
　　
　　胃癌组中，FHIT蛋白在HP阳性组与HP阴性组中的表达强度差异有显著性（Z=-2.881，P&<0.05）；癌旁组中，FHIT蛋白在HP阳性组中的表达强度亦弱于HP阴性组（Z=-2.550，P&<0.05）；而远癌组中FHIT蛋白在HP阳性组与阴性组中的表达差异无显著性（Z=-1.175，P&>0.05）。见表3。
　　表1 FHIT 蛋白在胃癌、癌旁及远癌组织中的表达（略）
　　表2 FHIT蛋白在胃癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系（略）
　　表3 HP感染与FHIT 蛋白表达的关系组别nFHIT蛋白表达（略）
　　3 讨论
　　
　　胃癌的发生是一个多阶段多步骤的过程， 在其发生演变过程中伴有多种癌基因和抑癌基因的表达异常。当前学者们普遍认为胃癌的发生与许多致癌因素(如幽门螺杆菌感染、亚硝酸盐、高盐饮食)密切相关。 FHIT基因是一种新的抑癌基因，属于组氨酸三联体(HIT)基因家族。BARNES等[5]研究显示，FHIT蛋白是一种典型的Ap3A水解酶。现己知FHIT基因突变将导致Ap3A水解酶活性丧失，引起Ap3A水平升高。而Ap3A是ATP类似物，能抑制蛋白激酶的活性，其水平升高可能增强生长信号传导途径，阻断增殖抑制途径或细胞凋亡通道，导致肿瘤的发生。有学者提出了FHITApnA复合物信号传导模型假说，FHITApnA复合物可能是FHIT蛋白的活性形式之一，其抑制肿瘤的功能可能比其水解酶活性更重要；FHIT蛋白还能作用于mRNA帽类似物，通过影响重要基因mRNA的翻译起到抑癌作用。总之，FHIT蛋白可能通过多种途径发挥抑癌功能。
　　
　　本文结果显示，FHIT蛋白在胃癌组织中表达最弱，并且有明显的缺失（27/52），这与国外研究结果一致[6～9]，FHIT蛋白在癌旁组织中的表达强度亦弱于远癌组织（P&<0.01），FHIT蛋白在3组中的表达强度逐渐升高。而且本研究还显示，在癌旁组织中，FHIT蛋白在不典型增生组中的表达强度亦明显弱于肠上皮化生组（P&<0.05），这与KAWAGUCHI等[10]研究结果相似，他们在对胃癌前病变的研究中显示，FHIT蛋白在黏膜内癌中的表达缺失率（38.2％）高于胃腺瘤（12.5%），两者比较差异有显著性。这提示在胃癌发生过程中FHIT蛋白的表达是一个渐进的过程，其表达缺失或下降在胃癌的发生过程中起着重要作用。本文结果显示，胃癌组织中FHIT蛋白表达与病人性别、年龄及肿瘤大小、部位、分化程度、组织类型及浸润深度均无关（P&>0.05），而与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移有关（P&<0.05），FHIT蛋白表达缺失或下降者多见于TNM分期高及有淋巴结转移的病人，这提示FHIT蛋白的表达缺失在胃癌的发展演化中起着重要作用，与胃癌的侵袭转移有关，这与国外一些研究结果相一致[7～9，11～13]。然而另有一些研究则显示，FHIT蛋白表达与胃癌的临床病理参数无关，LEE等[2]研究35例胃腺癌却发现FHIT mRNA异常与胃癌临床病理参数(年龄、性别、肿瘤位置、TNM分期)无关。有关FHIT蛋白与胃癌临床病理参数的关系尚存在争议，有待进一步研究。

　　大量的流行病学和病理组织学资料表明，HP感染与胃癌的发生关系密切[14]，且于1994年被列为胃癌的第Ⅰ类致癌因子，但其致癌机制尚不清楚。本实验结果显示，胃癌及癌旁组织中FHIT蛋白在HP阳性组中的表达强度显著弱于HP阴性组（P&<0.05），这与SKOPETLIUO等[11]的研究结果一致。FHIT基因的脆性位点是染色体的裂隙或不连续的间断区，是多种致癌物和致突变物作用的靶点。HP可能直接或间接（毒力因子、炎性递质、自由基等）引起FHIT基因脆性位点的断裂，导致FHIT蛋白表达缺失或下降， 失去其抑癌作用，但其具体机制有待进一步研究。
　　
　　综上所述，FHIT基因作为一个新发现的抑癌基因，其表达缺失或下降与胃癌的发生发展有着密切的联系，其可能在胃癌发生的早期就发挥重要作用。HP感染可能影响FHIT蛋白的表达，深入研究FHIT蛋白与胃癌发生发展及与HP感染的关系，将有助于进一步阐明胃癌发生与演变的分子机制，为胃癌早期诊断及预防提供新的方法和策略，为胃癌基因治疗提供科学理论依据和新的靶点。
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