注射用通栓欣粉针对大鼠脑缺血损伤的保护作用及其机制

　　　　　　 作者：魏菲 纪凤兰 温富春　周继胡 丁涛

【摘要】 目的 观察注射用通栓欣粉针对脑缺血保护作用及其作用机制。方法 通过不完全性脑缺血模型观察注射用通栓欣粉针对大鼠脑血管通透性、脑组织形态学、超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响;通过血小板黏附、ADP诱导血小板聚集试验观察注射用通栓欣粉针对大鼠血小板功能的影响。结果 注射用通栓欣粉针可明显降低不完全性脑缺血大鼠脑血管通透性，使缺血脑组织病变程度减轻，脑组织发生病变的动物数减少，MDA含量明显降低、SOD活性明显升高;可明显降低血小板黏附百分率，抑制血小板聚集。结论 注射用通栓欣粉针可抑制血栓的形成，对实验性大鼠脑缺血损伤具有保护作用。

【关键词】 注射用通栓欣粉针;脑缺血;作用机制

三七〔panax notoglnseng(Burk)F.H.Chen〕为五加科人参属植物，由其根提取的总皂苷制成的血塞通注射液广泛应用于临床，为了充分利用三七的地上资源，降低原料成本，本研究对三七叶中总皂苷进行分离纯化，制成通栓欣粉针剂，并观察了通栓欣粉针对脑缺血保护作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 动物 Wistar大鼠，雌雄均用，体重240～300 g，300～350 g。购于吉林大学基础医学院动物实验中心，合格证号：SCXK(吉)20070003。

　　1.1.2 药物及试剂 注射用通栓欣粉针，白色粉末，纯度为96.7%，规格：100 mg/支，吉林省中医药科学院剂型室提供。用时以生理盐水配成所需浓度，供静脉注射给药。实验所用阳性药血塞通注射液由昆明制药股份有限公司生产;5′腺苷二磷酸钠盐(ADPNa)，中科院上海生化所东风生化技术公司出品，批号：0710137;盐酸肾上腺素(Adr)注射液，北京市永康制药厂生产，批号：0703021;伊文思蓝，中国医药(集团)上海化学试剂公司生产，批号：070706。

　　1.1.3 仪器 GX964型体外血栓形成、血小板黏附两用仪，中国石塘湾新兴电上海第三分析仪器厂出品。LBYNJ2血液凝聚仪，北京普利生出品;752型紫外分光光度计，上海第三分析仪器厂出品。

　　1.2 方法

　　1.2.1 对大鼠不完全性脑缺血模型的影响

　　1.2.1.1 脑血管通透性影响实验 取54只健康大鼠，随机分为6组：空白对照组，缺血模型组，血塞通注射液(57.0 mg/kg)组，通栓欣粉针31.0、15.5、7.8 mg/kg 3个剂量给药组。每天1次，连续给药3 d。末次给药前，先将动物腹腔注射水合氯醛(300 mg/kg)麻醉，分离双侧颈总动脉，穿线以备结扎。用药后15 min于动物舌下静脉注射伊文思蓝50 mg/kg，5 min后结扎，逐层缝合皮肤〔1〕。空白对照组只将颈总动脉分离不结扎。4 h后处死大鼠，取同样重量脑组织置于3 ml 0.5% Na2SO3生理盐水丙酮(3∶7)溶液中，捣碎，充分浸泡24 h，离心，上清液于650 nm处比色，计算其中伊文思蓝含量。

　　1.2.1.2 脑组织形态学检测 动物分组给药同前。末次给药后15 min同前述方法结扎双侧颈总动脉，造成动物不完全性脑缺血。4 h后将动物断头处死，取脑组织同一部位，于10%福尔马林中固定，做病理检查。

　　1.2.1.3 脑组织超氧化物岐化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量检测 动物分组、给药、造模方法同上。4 h后将动物断头处死，立即取脑，在4℃下匀浆、离心，提取SOD，并测定其活性;同时测定MDA含量〔2〕。

　　1.2.2 血小板功能测定

　　1.2.2.1 血小板黏附性检测 取50只大鼠，随机分为5组：空白对照组，血塞通注射液(57.0 mg/kg)组，通栓欣粉针31.0、15.5、7.8 mg/kg三个剂量给药组。每天1次，连续给药3 d。末次给药后15 min，于动物腹腔注射戊巴比妥钠(35 mg/kg)麻醉，在腹静脉采血1.5ml/只，按玻球瓶法计算血小板黏附率〔3〕。

　　1.2.2.2 ADP诱导血小板聚集实验 取45只大鼠，动物分组给药同上。末次给药后15 min，腹腔注射水合氯醛300 mg/kg麻醉，主动脉采血2.7 ml/只，缓缓注入装有0.3 ml 3.8%枸椽酸钠溶液的试管中，混匀，离心，分离PRP和PPP，按文献方法测定ADP诱导血小板最大聚集率，计算聚集抑制百分率〔3〕。

　　1.3 统计学处理 数据用x±s表示，采用t检验。

　　2 结 果

　　2.1 对大鼠不完全性脑缺血模型的影响

　　2.1.1 对脑血管通透性的影响 各组伊文思蓝含量为：空白对照组(27.9±10.87) mg，缺血模型组(29.9±4.93) mg，血塞通注射液组(25.3±8.01) mg，注射用通栓欣粉针31.0 mg/kg组(20.6±5.82) mg，15.5 mg/kg组(20.5±5.76) mg，7.8 mg/kg组(20.9±8.11) mg。注射用通栓欣粉针可明显降低不完全性脑缺血大鼠脑中伊文思蓝含量，与缺血模型组比较有统计学差异(P<0.05，P<0.01)。血塞通注射液给药组伊文思蓝含量亦有降低趋势，但无统计学差异。

　　2.1.2 对脑组织形态学的影响 见表1。空白对照组动物脑组织神经细胞正常，血管周围腔隙狭窄;缺血模型组动物脑组织发生病理性改变，神经细胞及血管周围的腔隙增宽;而血塞通注射液和注射用通栓欣粉针三个剂量给药组均可使大鼠缺血性脑组织病变程度减轻，发生组织病变的动物数减少，尤以注射用通栓欣粉针高剂量给药组作用明显。表1 注射用通栓欣粉针对各组大鼠脑组织形态学的影响

　　2.1.3 对脑组织SOD活性及MDA含量的影响 见表2。大鼠脑缺血后，脑组织中MDA含量明显升高，SOD活性显著降低，与空白对照组比较差异显著(P<0.01);而注射血塞通和通栓欣粉针的动物脑组织中MDA含量明显较模型组降低，同时SOD活性明显升高。表2 注射用通栓欣粉针对各组大鼠脑组织中MDA含量及SOD活性的影响与空白对照组比较：1)P<0.01;与模型组比较：2)P<0.001

　　2.2 对血小板功能的影响

　　2.2.1 对血小板黏附性的影响 各组血小板黏附率分别为：空白对照组(36.2±0.15)%，血塞通注射液组(20.9±0.12)%，通栓欣粉针31.0 mg/kg组(16.2±0.10)%，15.5 mg/kg组(19.6±0.12)%，7.8 mg/kg组(31.5±0.17)%。血塞通注射液和通栓欣粉针高、中剂量组均可明显降低血小板黏附率，与对照组比较有明显差异(P<0.05，P<0.01)。

　　2.2.2 对ADP诱导血小板聚集率的影响 见表3。注射用通栓欣粉针高剂量组可明显抑制血小板聚集，其聚集率与对照组比较明显降低;阳性药血塞通注射液也使动物血小板聚集百分率有降低的趋势。表3 注射用通栓欣粉针对大鼠血小板聚集的影响

　　3 讨 论

　　血塞通注射液即为三七总皂苷制成的注射剂，目前在临床上广泛用于治疗脑血栓，疗效确切。以往的三七总皂苷都是从三七根中提取得到的，茎叶常作为废弃物扔掉。本课题组经多年研究认为三七叶地上部分含有与根中相同的有效成分。实验结果显示，注射用通栓欣粉针对结扎双侧颈总动脉造成的不完全性脑缺血有明显的缓解作用，抑制脑水肿的发生，拮抗脑组织神经细胞损伤。

　　在脑缺血时，自由基清除酶活性降低，自由基产生急剧增多。SOD能清除超氧阴离子自由基，保护细胞免受损伤，MDA常可以反映机体内脂质过氧化的程度〔4〕。因此测定SOD的活性及MDA的含量可反映机体内自由基引发的脂质过氧化反应的程度。本研究发现，大鼠脑缺血后，脑组织SOD活性降低，MDA含量升高，给予通栓欣粉针后能明显降低缺血区脑组织MDA含量，升高SOD活性，显示出其清除过多自由基的能力，减轻由氧自由基介导的脂质过氧化反应，从而可使大鼠缺血性脑组织病变程度减轻，发生组织病变的动物数减少，对实验性大鼠脑缺血损伤具有保护作用。脑缺血时无氧糖酵解增加，导致酸中毒及自由基的大量生成使血管内皮细胞受损，激活血小板发生黏附、聚集和释放反应，而血小板聚集会促进血栓形成〔5〕，缺血动物经注射通栓欣粉针可以明显抑制血小板聚集，改善血液黏度，从而抑制血栓的形成，因此对脑缺血具有缓解作用。 其更深入的作用机制还在研究中。

参考文献

　1 张梅兰，金静维，杜秀芳，等.丹红注射液对实验性脑缺血大鼠脑毛细血管通透性及脑含水量的影响〔J〕.河北医药，2007;29(3)：2045.

　　2 易 娟.复方丹参滴丸对实验性脑缺血保护作用的研究〔J〕.临床和实验医学杂志，2007;6(4)：34.

　　3 纪凤兰，徐惠波，温富春，等.血塞通大输液对大鼠血小板功能及血液流变学影响的试验研究〔J〕.中国中医药科技，2008;15(1)：345.

　　4 武继彪，李克明，隋在云，等.水蛭微粉对脑缺血再灌注损伤大鼠血清及脑匀浆SOD、MDA、NO的影响〔J〕.山东中医杂志，2008;27(6)：2657.

　　5 姜红玉，睢大员，于晓风，等.刺五加叶皂苷对实验性脑缺血大鼠血液流变学及血小板功能的影响〔J〕.吉林大学学报(医学版)，2004;30(3)：3846.